野生型p53对白血病K562细胞中心体过度复制的抑制作用

背景与目的：肿瘤组织细胞中p53基因突变或缺失是导致非整倍体的发生和基因组不稳定的主要原因之一：最近研究发现慢性粒细胞白血病（chronic myelogenous leukemia．CML）各期患者均有中心体异常,且异常的程度与临床分期有关。急变期显示更为严重的中心体异常。本研究建立携野生型p53基因的CML急变K562细胞株．以研究该细胞内野生型p53基因表达后p53信号转导通路对K562细胞中心体的影响。方法：用HEK293细胞扩增重组p53野生型、突变型及空载腺病毒载体,联合polybrene分别感染K562细胞;未接受感染的细胞作为空白对照。流式细胞术检测重组腺病毒载体感染效率,Western blot检测P53蛋白表达。间接免疫荧光染色后用激光共聚焦计数K562细胞中心体的变化。Westernblot检测p53信号转导通路下游效应分子生长阻滞和DNA损伤应答基因Gadd45a（growtharrest and DNA damage）、BubRl（Bublrelated）、AuroraA的表达。结果：成功建立携野生型p53基因的K562细胞株．腺病毒载体感染效率达60％以上,野生型p53可在K562细胞中持续表达。感染72h后,携野生型p53基因的K562细胞中中心体数量异常（n〉2）的细胞比例降至（0．38＋0．02）％,与空白对照组（0．71＋0．14）％比较其差异有统计学意义（P〈0．05）;Westernblot结果发现p53信号转导通路下游效应分子Gadd45a、BubRl表达分别上调93％、88％．而AuroraA的表达下降56％（P值均〈0．05）。结论：重组腺病毒介导的野生型p53基因能够在白血病K562细胞中持续表达：野生型P53蛋白可能通过转录激活-依赖途径上调Gadd45a、BubR1表达以及转录激活-非依赖途径使AuroraA的表达下降,从而抑制K562细胞中心体的过度复制。     

人慢性粒细胞白血病模型鼠的建立

通过SCID小鼠与NOD/Lt品系(T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞缺陷,循环补体缺乏,抗原呈递细胞分化及功能不良)回交得到的NOD/Ltsz-SCID/SCID小鼠(简称NOD/SCID小鼠).目前,NOD/SCID小鼠白血病模型的建立多采用经尾静脉接种较大数量的白血病细胞[1-3],虽然可以保证成功植入,但对研究小鼠的机体免疫反应实验十分不利,主要原因在于植入的肿瘤细胞不再分裂繁殖且小鼠本身为免疫缺陷鼠.     

复方首乌藤合剂对小鼠的促智作用研究

目的研究复方首乌藤合剂对小鼠的促智活性。方法采用跳台法。结果复方首乌藤合剂能增强自然衰老小鼠的学习和记忆能力,并对分别由东莨菪碱、亚硝酸钠和40%乙醇引起的小鼠记忆获得、记忆巩固和记忆再现病理模型有较明显的改善作用。结论复方首乌藤合剂中含有促智活性物质,它可能是本品具有良好临床疗效的物质基础。     

循证护理在急诊经皮冠状动脉介入治疗术后患者中的应用

目的:探讨循证护理在急诊经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后患者中的应用方法及效果。方法:选取山东省某三级甲等医院急性胸痛中心病区2018年8月1日～12月31日收治的53例急诊PCI术后患者作为对照组,采取常规护理措施;将2019年1月1日～5月31日收治的54例急诊PCI术后患者作为实验组,采取循证护理干预方案。比较两组患者术后第1天、术后1周心功能指标、焦虑情况及住院时间。结果:两组患者1周后血浆脑钠肽(BNP)、肌钙蛋白(cTnI)数值、心脏彩超左室射血分数(LVEF)比较差异无统计学意义(P0.05);实验组患者干预后焦虑自评量表(SAS)评分低于对照组(P0.05),住院时间短于对照组(P0.05)。结论:PCI患者术后实施循证护理干预方案安全可行,有利于缓解患者紧张、焦虑情绪,缩短住院时间,且不会加重心肌缺血与损害。     

HPLC-MS/MS法在白血病患者血浆维生素C水平测定中的临床应用

目的建立测定白血病患者血浆维生素C水平的高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)法,并应用于临床。方法采用HPLC-MS/MS法,L-Ascorbic Acid-1-13 C为内标,XBridge?C18(4.6 mm×50.0mm,5μm)色谱柱,流动相为(0.1%甲酸)甲醇-(2mmol/L乙酸铵-0.1%甲酸)水,梯度洗脱,流速为0.8mL/min,柱温60℃,进样量10μL。采用电喷雾电离源,以多反应监测(MRM)方式进行负离子检测。并对123份白血病患者标本及407份健康志愿者标本进行了检测,测定结果用t检验进行比较分析。结果维生素C的水平在0.5～50.0μg/mL范围内线性关系良好(r0.990 0),日内及日间精密度(RSD)均小于5%,回收率在90%～110%;与健康人相比,患者体内维生素C水平明显偏低[(8.8±3.0)vs.(2.4±3.9)μg/mL,P0.01]。结论该方法快速、准确、灵敏度高、操作简单,适用于临床中患者血浆中维生素C水平的检测。建议白血病患者应适当补充维生素C。     

野生型p53基因对白血病K562细胞增殖抑制作用及机制

目的:研究重组腺病毒介导的野生型?53基因(AdSmp53)对人慢性粒细胞白血病K562细胞增殖的影响及其可能机制.方法:分别将含有Ad5wtp53,突变型p53基因(Ad5mtp53)和绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒表达载体(AdSGFP),联合阳离子多聚季胺(polybrene)共感染K562细胞,经RT-PCR和Western Blot检测p53mRNA和P53蛋白的表达后,应用流式细胞术分析K562细胞周期、DNA含量的变化.Western Blot检测P21蛋白、核磷蛋白(NPM)、磷酸化核磷蛋白(Thr199-NPM)的表达情况.结果:Ad5wtp53和Ad5mtp53能在K562细胞中表达p53mRNA和P53蛋白.Ad5wtp53感染K562细胞48,72 h后分别有(74.45±12.09)%和(69.80±11.70)%的细胞周期出现G0/G1期阻滞,DNA含量分别下降了32.25%和38.13%;同时P21蛋白的表达升高,核磷蛋白的表达无改变,磷酸化核磷蛋白(Thr199)表达下降.而AdSmtp53感染组和AdSGFP感染组未见相应改变.结论:野生型P53蛋白町能通过上调P21的表达,阻滞细胞周期于G0/G1期,抑制S期DNA的合成,降低核磷蛋白第199位苏氨酸残基的磷酸化来抑制K562细胞的增殖.     

邵铭治疗气滞血瘀型慢性胆囊炎经验

慢性胆囊炎多表现为持续右上腹钝痛或不适,有恶心、腹胀、嗳气、泛酸等消化道症状。中医辨证分型为肝气郁结型、气滞血瘀型、肝胆湿热型、肝阴不足型、肝胃不和型、肝胆郁滞型、肝郁脾虚型,气滞血瘀型最为多见。发病主因少阳枢机不利,藏泄失司。病位在胆,与肝、脾、胃等脏腑密切相关。治疗常用柴胡、延胡索、香附、枳壳疏肝理气,以海金沙、鸡内金、金钱草、郁金利胆,大黄通腑,并根据血瘀程度活血化瘀。     

银锌乳膏在烧伤创面中的应用

目的 通过临床观察,验证银锌乳膏在烧伤创面治疗的效果和临床使用的安全性.方法 将85例烧伤面积大于30%TBSA的患者随机纳入银锌乳膏组50例和SD-Ag组(对照组)35例,用药方式均以包扎为主,比较观察两组的治疗效果.结果 创面用药10天后,银锌乳膏组创面细菌培养3例阳性,对照组细菌培养9例阳性,两组细菌培养率差异显著(P＜0.05);全身抗生素应用时间:银锌乳膏组平均(7.2±1.5)天,对照组平均(12.4±3.1)天,两组间差异有显著意义( P＜0.05).浅Ⅱ度创面愈合时间银锌乳膏组(8±3.5)天,对照组(13±2.5)天,深Ⅱ度创面愈合时间银锌乳膏组(16±2.5)天,对照组(20±3.2)天,两组间差异有显著意义(P＜0.05).Ⅲ度创面植皮成活率银锌乳膏组98.6%,对照组95.5%.伤后至植皮时间银锌乳膏组13～18天,对照组19～23天.结论 临床应用表明银锌乳膏具有显著的抗感染和促进上皮生长的作用,对创面刺激性小而且无明显毒副作用,是大面积烧伤患者的良好外用药.     

复方首乌藤合剂中药材的鉴别和大黄素的测定

目的 建立复方首乌藤合剂的质控方法.方法 用TLC法鉴别首乌藤、川芎、五味子;用HPLC测定大黄素.结果 TLC能特异地鉴别首乌藤、川芎和五味子.大黄素进样量30.4～380 ng与峰面积积分的线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为98.1%,RSD=0.9%(n=6).结论 所建方法专属性强,简便可行,重复性好,能有效控制首乌藤合剂的质量.