产毒性大肠杆菌菌毛抗原F_(41)单克隆抗体的制备及其特异性研究

本文报道以纯化的产毒性大肠杆菌菌毛F_(41)抗原,利用杂交瘤技术获得5株抗F_(41)抗原的单克隆抗体(1F6,2C5,3B6为IgG 1。1 H 5,4E11为IgM)。腹水抗体效价达10~(-6)培养上清抗体效价10~(-3)。通过免疫扩散、免疲印迹法及固相菌体ELISA试验证实,5株单克隆抗体均为针对ETEC菌毛F_(41)抗原的特异性抗体;红血球凝集抑制及肠上皮细胞粘附阻断试验证明1F6、2C5、3B6具有生物学活性,1H5与4E11无生物学活性,这可能(1)建立ELISA捕捉法,从粪便中直接检测F_(41)抗原以及用玻板凝集试验鉴定临床分离菌株。(2)用于F_(41)抗原性的分析及ETEC基因工程疫苗的监控手段。(3)为ETEC·F_(41)菌的致病性研究及被动免疫预防急性腹泻提供依据。     

ING1抑癌基因

采用cDNA消减杂交和体内选择技术,Garkartsev等分离了一个新的肿瘤抑制基因—ING1。该基因定位于人类染色体13p33-34,其cDNA长约2kb;编码一种分子量为33kD的核蛋白——p33~(ING1)。研究发现,p33~(ING1)的过表达可有效抑制细胞生长,促进无生长因子条件下的细胞凋亡。在抑制细胞生长过程中,p33~(ING1)与p53相互依赖,具有协同作用。对一些肿瘤细胞系的研究表明,在成纤维细胞瘤中ING1基因的3′端发生缺失,在乳腺癌细胞中p33~(ING1)表达减低。     

病毒的抗凋亡机制

宿主可利用细胞凋亡机制来对抗病毒的侵入。在细胞凋亡发生过程中,宿生细胞与病毒蛋白及核酸均被破坏。对机体来说,为防止病毒扩散,及时清除掉受病毒感染的细胞比保护它更有益。反之,延长受感染细胞的寿命则对病毒复制有利。受病毒感染细胞的凋亡可由病毒特异性的细胞毒T细胞（CIL）介导,也可以在无外界信号刺激情况下自发产生。即使在无抗病毒免疫反应的情况下,有些病毒如疮疹病毒、痘病毒、昆虫杆状病毒等的复制过程也可伴有感染细胞的调亡。但有些病毒如互型人类T细胞白血病病毒（Hll．VI）和乙型肝炎病毒等的复制过程中,并不…     

脂肽疫苗

肽疫苗与普通全蛋白 (或基因免疫中的全基因 )相比有诸多优点 ,如纯度高 ,可诱生高特异性免疫应答。但是 ,合成肽诱发免疫需要毒性佐剂。脂肽作为肽疫苗的一种形式 ,早在十年前就已被发现 ,它们可以在无佐剂条件下诱生全面的免疫应答。本文介绍了脂肽疫苗的过去 ,研究进展以及与脂肽疫苗合成、配方及接种途径有关的问题。脂肽疫苗粘膜应用的进展将为抗粘膜表面感染的病原体提供理想的策略。     

1例新的遗传性高铁血红蛋白血症复合杂合子基因型的鉴定

目的　从分子水平对 1例遗传性高铁血红蛋白血症患者进行确诊。方法　通过RT PCR产物直接测序 ,分析患者和正常对照b5R基因的cDNA编码序列。用PCR 限制性内切酶分析患者、其父母和正常人基因组DNA。结果　患者的一个b5R等位基因第 72位密码子 (位于外显子 3)发生了CTC→CCC突变 ,原来的亮氨酸被脯氨酸替换。患者另一个b5R等位基因第 2 0 3位密码子 (位于外显子 7)发生了TGC→TAC突变 ,原先的半胱氨酸被酪氨酸取代。结论　在中国患者确定了一个新的遗传性高铁血红蛋白血症基因型 ,即L72P/C2 0 3Y。     

乙型肝炎病毒前S1抗原化学发光免疫检测方法的建立及初步临床应用

目的建立乙肝病毒前S1抗原（PreSl-Ag）化学发光免疫检测方法，并分析其临床应用价值。方法采用PreSlAg单抗包被微孔板，以辣根过氧化物酶标记的抗乙肝病毒表面抗原的抗体为二抗，结合鲁米诺化学发光底物系统，建立PreSlAg的化学发光免疫检测方法。研制PreSl-Ag诊断试剂企业参考品，并用于分析所建立方法的特异性、灵敏度、稳定性和精密性等试剂性能。所建立方法与市售的PreSl-Ag诊断试剂盒同时比对检测临床血清样本126份，比较检测结果。结果检测结果表明试剂性能符合企业参考品质量标准。批内变异系数6．5％-8．1％、批间变异系数13．2％；试剂盒置37℃考核3d，其稳定性良好。临床样本比对检测结果表明，两种方法相关性良好（阴性符合率96．0％、阳性符合率100％，总符合率为97．6％，Kappa值为0．951，一致性强度为最强）。结论成功建讧了快速、特异、敏感和稳定的PreSlAg化学发光免疫检测方法，适合临床检验推广应用。     

高铁血红蛋白血症:基础与临床

<正>早在19世纪就已证实,高铁血红蛋白(Methemoglobin,MetHb)是由于遗传疾病或者是吸收毒性化合物后体内红细胞产生的;而正常红细胞能使MetHb恢复到有功能的亚铁形式,后来研究发现MetHb在正常人红细胞内只含低浓度,且MetHb的产生与还原是红细胞的一个正常过程。血红蛋白(Hemoglobin,Hb)在网织红细胞内以高铁血红蛋白形式合成这一事实,提示MetHb的还原可能是体内     

免疫斑点法检测NADH—细胞色素b5还原酶活性

在硝酸纤维素膜上点有抗细胞色素ｂ５还原酶（ｂ５Ｒ）单克隆抗体，以捕捉红细胞裂解液中的ｂ５还原酶，然后用还原型辅酶Ⅰ－二氯酚靛酚－噻唑蓝底物缓冲液进行活性染色。遗传性高铁血红蛋白血症５个不同家系患者（５例）ｂ５还原酶活性检测结果均为阴性，正常对照为强阳性。本法是一种简便、直观地检测遗传性疾病高铁血红蛋白血症ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶活性的定性或半定量方法     

乙型脑炎病毒E蛋白基因的克隆及其在大肠埃希菌中的表达

目的　在大肠埃希菌中表达乙型脑炎病毒E蛋白。方法　反转录聚合酶链反应 (PCR)扩增乙型脑炎病毒 (JEV)E蛋白基因 ,克隆入原核表达载体pET 2 8a,转化大肠埃希菌BL2 1(ED3)。经异丙基巯基半乳糖 (IPTG)诱导表达后 ,十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白免疫印迹分析表达产物。结果　本室所保存毒株的E蛋白与已发表的序列比较 ,有 5个核苷酸改变 ,可分别导致氨基酸替代。所表达的E蛋白的相对分子质量约为 5 0 0 0 0 ,表达量约占菌体总蛋白的 35 %。结论　在大肠埃希菌中成功地表达了JEVE蛋白 ,为制备JE实验室诊断抗原和分析E蛋白基因结构与功能的关系打下了基础     

肾上腺脑白质营养不良的分子诊断（附2例报告）

目的：探讨肾上腺脑白质营养不良(ALD)的分子诊断方法。方法：在临床诊断的基础上，从2名患者外周血提取白细胞总RNA，进行反转录后，用PCR方法分四段扩增ALD基因编码区。纯化PCR产物，并对其进行序列测定。查出突变位点后，对患者家系成员的基因组DNA进行PCR-限制性酶切分析。结果：患者A的ALD基因第280位密码子发生CGC—CTC改变，使原来编码的精氨酸被亮氨酸取代(R280L突变)；患者B的ALD基因第508位密码子发生了CCC→CTC改变。使正常的脯氨酸被亮氨酸替换(P508L突变)。两个突变通过酶切分析和家系调查得到进一步确证。结论：建立了ALD的分子诊断技术，并在中国人ALD患者发现了两个新的ALD基因突变。