基因芯片技术筛选卵巢癌紫杉醇耐药差异表达基因的研究

目的应用基因芯片技术研究人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OC3/Tax300与其敏感细胞系OC3之间的基因表达谱差异,筛选耐药相关基因.方法分别提取OC3/Tax300与OC3细胞的总RNA并纯化mRNA;将等量的mRNA逆转录,以Cy5和Cy3标记的cDNA做探针,在BiostarH140S基因表达谱芯片上进行杂交.扫描芯片荧光信号图像,用基因图像分析软件对扫描图像进行数字化处理和分析.结果共筛选出显著表达差异基因234种,其中217种基因表达水平下调,17种基因表达上调;下调基因主要为EB病毒编码核蛋白（EBNA-3）、信号蛋白（COP9）,上调的基因主要是酪氨酸激酶（JAK2）、热休克蛋白（HSPs）、还原型辅酶烟胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）等.结论本研究筛选出的基因可能为进一步探讨卵巢癌肿瘤细胞耐药机制提供新的途径.     

表没食子儿荣素没食子酸酯对慢性阻塞性肺疾病模型小鼠糖皮质激素敏感性的影响

目的探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型小鼠糖皮质激素敏感性的影响及作用机制。方法取小鼠肺泡上皮细胞系MLE12细胞及COPD模型小鼠肺泡灌洗液(BALF),将MLE12细胞及BALF分离细胞分为对照组、烟草提取物(CSE)组、地塞米松(Dex)+CSE组、EGCG+CSE组、EGCGⅠ+Dex+CSE组、EGCGⅡ+Dex+CSE组和EGCGⅢ+Dex+CSE组。对照组不作任何处理;CSE组给予(3%)刺激6 h;Dex+CSE组给予Dex(10 nmol/L)刺激1 h,然后给予CSE刺激6 h;EGCG+CSE组给予EGCG刺激6 h后,再给予CSE刺激6 h;EGCGⅠ+Dex+CSE组和EGCGⅡ+Dex+CSE组和EGCGⅢ+Dex+CSE组分别给予10μl、50μl、100μl EGCG刺激5 h后,再给予Dex刺激1 h,然后给予CSE刺激6 h。收集MLE12细胞上清液,检测炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达量。检测BALF细胞总数及肺泡巨噬细胞数和中性粒细胞数。将MLE12细胞分为对照组、CES组、CSE组+EGCGⅠ组、CSE组+EGCGⅡ组CSE组+EGCGⅢ组,使用Western印迹检测组蛋白去乙酰化酶(HDAC)-2的表达水平。结果 EGCGⅡ+Dex+CSE组和EGCGⅢ+Dex+CSE组IL-1β、IL-6、TNF-α的表达降低(P0.05);使用50、100μl作用后,COPD模型小鼠BALF中的细胞总数明显降低(P0.05),巨噬细胞数明显增加(P0.05),中性粒细胞数明显减少(P0.05),EGCG I+CSE组和EGCGⅡ+CSE组和EGCGⅢ+CSE组中HDAC-2表达量增加。结论 EGCG能够通过活化HDAC-2,增强COPD患者糖皮质激素的敏感性,有效减轻COPD炎症过程,为COPD的治疗提供新的思路。     

大脑中动脉狭窄或闭塞致缺血性卒中预后影响因素分析

目的筛查大脑中动脉狭窄或闭塞致缺血性卒中预后良好的影响因素。方法共109例大脑中动脉狭窄或闭塞致缺血性卒中患者,记录性别、年龄、发病至MRI检查时间、既往史[脑卒中和(或)短暂性脑缺血发作、冠心病、心房颤动和吸烟史、饮酒史]、收缩压和舒张压、血糖、血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、血浆同型半胱氨酸、入院时和出院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、随访3个月时改良Rankin量表(mRS)评分,行MRI和三维时间飞跃MRA检查,获得大脑中动脉狭窄率、FLAIR成像血管高信号(FVH)评分、FVH-扩散加权成像(DWI)不匹配比例、DWI-Alberta脑卒中计划早期CT评分(ASPECTS),单因素和多因素前进法Logistic回归分析筛查大脑中动脉狭窄或闭塞致缺血性卒中预后良好的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线确定FVH评分和DWI-ASPECTS评分预测预后良好的临界值。结果根据mRS评分分为预后良好(mRS评分≤2分)组(24例)和预后不良(mRS评分2分)组(85例)。Logistic回归分析显示,舒张压(OR=0.924,95%CI:0.869~0.983;P=0.013)、FVH评分(OR=2.008,95%CI:1.404~2.873;P=0.000)和DWI-ASPECTS评分(OR=1.955,95%CI:1.336~2.862;P=0.001)是大脑中动脉狭窄或闭塞致缺血性卒中预后良好的独立影响因素。ROC曲线显示,FVH评分曲线下面积为0.768(95%CI:0.656~0.880,P=0.000),DWI-ASPECTS评分曲线下面积为0.721(95%CI:0.608~0.834,P=0.001);FVH评分预测预后良好的临界值为4.50分,其灵敏度为0.625、特异度为0.824、Youden指数为0.449,DWI-ASPECTS评分预测预后良好的临界值为6.50分,其灵敏度为0.750、特异度为0.671、Youden指数为0.421。结论大脑中动脉狭窄或闭塞致缺血性卒中预后的独立影响因素包括舒张压、FVH评分和DWI-ASPECTS评分,其中,FVH评分预测预后良好的价值更高。     

骨肉瘤复发性因素的教学研究

目的 探讨在临床医学专业见习生带教过程中结合骨肉瘤复发性因素进行教学的效果。方法 选取陆军军医大学临床医学专业见习生102名,随机分为两组,对照组应用常规教学,研究组联合应用骨肉瘤复发性因素教学。观察比较两组见习生对不同教学模式的自身应用效果评价、满意程度评价情况、理论考核及技能考核评分情况。结果 研究组的自身应用效果评分均高于对照组,满意程度评价情况优于对照组,理论知识及实际操作能力得分均显著高于对照组,上述指标组间比较,差异均有统计学意义（P均＜0.05）。结论 对临床医学专业的见习带教生应用骨肉瘤复发性因素分析模式进行带教,让见习生从根本上了解骨肉瘤复发的影响因素,可显著提高见习生对疾病理论知识及操作技能方面的掌握程度,同时还可显著提高见习生对带教的满意度。     

湿痒洗剂治疗肛门湿疹疗效观察

目的:观察清热利湿类中药治疗肛门湿疹的临床疗效。方法:采用湿痒洗剂(苦参、蛇床子、地肤子、蒲公英、金银花、土茯苓、白藓皮、百部、五倍子、黄柏、明矾、紫草、花椒等)治疗本病60例,并设对照组,观察瘙痒、渗液、皮损等情况。结果:两组患者局部的瘙痒、创面分泌物以及生长情况较疗前明显好转,差异有统计学意义。治疗组均优于对照组。结论:本方法对本病有清热利湿,祛风止痒的功效。     

机会性筛查人群中高危型人乳头瘤病毒与宫颈病变相关性的分析

目的 研究第二代杂交捕获法(HC2)高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)检测阳性样品中HPV与宫颈病变的相关性.方法 随机抽取HC2阳性患者602名(344名行细胞学检查),采用PCR-反向点杂交(RDB)法对HPV分型并分析HPV型别与细胞学的相关性.结果 602例患者PCR阳性率94.5%;HPV分型检出率依次为HPV16、52、58、56、39等;HC2检测谱外单独感染24例;HPV16、HPV16/18与ASCUS、LSIL、HSIL有明显相关性.结论 机会性筛查人群中最常见HPV型别依次为HPV16、52、58;HC2检测的假阳性率为4.0%;HPV16与宫颈病变程度相关.     

交锁髓内钉顺行和逆行置入治疗肱骨干骨折：18例优劣比较

背景：交锁髓内钉治疗肱骨干骨折避免了因钢板置入而导致的应力遮挡和桡神经损伤等并发症,符合现代微创骨科的观点,是一种生物学内固定方法。 目的：探讨顺行和逆行置入交锁髓内钉治疗肱骨干骨折的临床意义。 方法：采用Russell-Taylor交锁髓内钉治疗18例肱骨骨折,其中顺行置钉10例,逆行置钉8例。术后定期行X射线片检查和肩关节功能评价。 结果与结论：获得随访14例,顺行置钉8例,逆行置钉6例,随访时间8~15个月。14例均获骨性愈合,愈合时间3~9个月。顺行置钉肩关节功能：优5例,良2例,可1例;逆行置钉肩关节功能：优5例,良1例。顺行和逆行置入交锁髓内钉都可用于肱骨干骨折的治疗,具有减少桡神经损伤,减少创伤,固定牢靠等优点,顺行置钉易致肩袖损伤,逆行置钉因需开长槽,易致骨质劈裂,故临床上选择何种方式,需具体情况具体分析。     

Xbp-1基因重组神经干细胞移植对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的影响

背景：将转染Xbp-1基因的神经干细胞移植至脑损伤病变部位,不但确保了Xbp-1基因的稳定及持续表达发挥抗凋亡的作用,也可促进移植后神经干细胞的存活与分化能力。 目的：验证Xbp-1基因对移植大鼠脑缺血损伤处神经干细胞的分布、分化、抗凋亡作用及神经功能恢复的影响。 方法：选取成年SD大鼠采用线栓法建立大脑中动脉阻塞模型,并随机分成4组干预：对照组(不作处理)、PBS移植组、神经干细胞移植组、Xbp-1-神经干细胞移植组。于干预后7,14,28 d进行NSS评分,并取脑制备组织切片,免疫荧光染色观察神经干细胞在脑内的存活与分布情况。移植后第28天使用TUNEL染色检测缺血区域神经细胞凋亡情况,Western blot检测Bcl-2表达水平。 结果与结论：移植后7,14,28d Xbp-1-神经干细胞移植组NSS评分显著低于其他3组(P < 0.05);神经干细胞可以成功迁徙到脑缺血区域并成活、分化为成熟神经细胞,Xbp-1基因修饰后的神经干细胞成活、增殖以及分化能力均强于普通神经干细胞(P < 0.05);与其他3组比较,Xbp-1-神经干细胞移植组脑缺血区域神经细胞凋亡数量明显减少,Bcl-2水平升高 (P < 0.05)。证实了Xbp-1基因修饰可以增加神经干细胞存活、迁徙能力,并通过抗内质网应激显著降低移植后大鼠缺血模型的NSS评分,促进其神经功能恢复。     

腺病毒介导转录因子X盒结合蛋白1转染海马神经干细胞：影响神经干细胞增殖及在缺氧环境下的凋亡

背景:随着胚胎和成体神经干细胞的成功分离、培养、及体外定向诱导分化等技术的成熟,移植神经干细胞用于治疗各种缺血性脑血管病、帕金森病、脊髓损伤、阿尔茨海默病成为可能。但移植后干细胞的存活与缺血缺氧区细胞凋亡密切相关。xbp-1是在内质网应激的未折叠蛋白反应阶段表达的一种重要的效应转录因子,被证实对细胞生存、分化及抗凋亡有重要的作用。 目的:将基因XBP-1通过重组腺病毒转染胚鼠海马神经干细胞,并观察其是否可以促进干细胞增殖以及在缺氧环境下是否具有抗凋亡作用。 设计、时间及地点: 随机、对照设计,在吉林大学第一医院神经内科实验室,2008年9月到2009年11月完成。 材料:E16SD孕鼠（孕15天）由吉林大学动物实验中心提供,重组腺病毒包装xbp-1基因及增强绿色荧光蛋白（EGFP）由广州易超医学试剂科技公司代为完成。β-actine、grp78、xbp-1、bcl-2、bax、EDEM抗体购自santa cruz公司,二抗、BSA购自武汉意德公司,DMEM/F12高糖培养基、胎牛血清购自长春博德生物技术有限责任公司,凯基Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒购自南京凯基生物科技发展有限公司,CoCl2购自sigma公司,lipo2000其他试剂为国产分析纯化。 方法: 取El6 SD大鼠胚鼠的海马组织进行神经干细胞的分离、克隆、nestin免疫荧光检测,以及传代和扩增。将重组腺病毒Ad-XBP1-EGFP质粒转染胚鼠海马神经干细胞,得到基因修饰后的胚鼠海马神经干细胞,通过细胞计数和MTT比色法检测细胞增殖情况。再用CoCl2诱导胚鼠海马神经干细胞缺氧模型,收取蛋白,通过western blot检测内质网应激和凋亡相关蛋白的表达变化,流式细胞仪检测干细胞凋亡情况。 主要结果检测: MTT技术检测细胞增殖,western blot检测蛋白质表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡。 结果: XBP-1基因修饰后的胚鼠海马神经干细胞与对照组细胞相比,细胞增殖速度明显增加。在缺氧条件下内质网应激标志物如grp78表达增加,xbp-1靶基因EDEM表达水平上升,促凋亡分子bax水平下降,抗凋亡分子bcl-2水平上升。通过流式细胞术检测提示细胞凋亡减轻。 结论: 重组腺病毒可以成功将XBP-1基因导入胚鼠神经干细胞中,转染后的NSCs增殖速度加快。缺血缺氧下,XBP-1基因在NSCs中过表达,可以引起grp78和EDEM表达增加、bax水平下降、bcl-2水平上升,细胞凋亡率下降,抗凋亡作用较为明显,为干细胞移植治疗神经系统损伤提供了实验理论基础。     

三联手术配合黄芪治疗直肠脱垂60例

目的:观察直肠粘膜四点结扎、消痔灵点状注射加肛门成形术配合口服中药黄芪治疗直肠脱垂的临床疗效。方法:治疗组60例采用直肠粘膜四点结扎、消痔灵点状注射加肛门成形术为主,并配合口服中药黄芪2周;对照组60例仅采用直肠粘膜四点结扎、消痔灵点状注射加肛门成形术。结果:治疗组总有效率为98.33﹪,对照组为76.67﹪,两组比较,治疗组疗效明显优于对照组(P?0.05)。结论:直肠粘膜四点结扎、消痔灵点状注射加肛门成形术配合口服中药黄芪能提高直肠脱垂的临床疗效。