金茵利胆胶囊的体外抗炎活性评价及其谱效关系研究

目的 评价金茵利胆胶囊的体外抗炎活性,并研究其抗炎谱效关系。方法 建立LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型,通过检测细胞上清中NO、TNF-α和IL-6等指标的含量来评价金茵利胆胶囊的抗炎活性。在此基础上,采用均匀设计法制备金茵利胆胶囊组成饮片的不同配伍样本,采用高效液相法建立均匀设计样品的指纹图谱,对均匀设计样品进行抗炎活性测定;以细胞上清液中NO、TNF-α和IL-6的抑制率为药效指标,与共有峰峰面积经灰色关联分析构建抗炎谱效关系。结果 金茵利胆胶囊提取物（0.25~1.00 mg/mL）能显著降低LPS诱导的RAW264.7细胞分泌NO、TNF-α和IL-6。经对照品比对指认出其中7个色谱峰,分别为新绿原酸（9号峰）、绿原酸（13号峰）、隐绿原酸（14号峰）、1, 3-二咖啡酰奎宁酸（16号峰）、对羟基苯乙酮（17 号峰）、柚皮苷（21 号峰）、新橙皮苷（23 号峰）。抗炎谱效关系结果表明,共有峰均具有一定的抗炎贡献度,其中共有峰峰21（柚皮苷）、峰23（新橙皮苷）与3个细胞炎症指标的关联度均大于0.74。结论：金茵利胆胶囊发挥抗炎作用是多种成分共同作用的结果,为金茵利胆胶囊抗炎药效物质基础及其质量控制提升提供参考。     

全喉切除术中保留甲状软骨膜对手术进程和术后恢复影响的探讨

目的：探讨保留甲状软骨膜对全喉切除手术进程和病人术后恢复情况的影响。方法：在甲状软骨膜下游离甲状软骨并切断其上角。不结扎和切断舌骨下肌群和喉上动脉。保留之甲状软骨膜用以加强修复咽壁黏膜。结果：本组病例较经典全喉切除术手术时间缩短30min以上。手术中出血在100ml以下。患者术后第2d下床活动，第4d开始进食流质。手术创口均一期愈合。结论：全喉切除术中保留甲状软骨膜可有效地简化手术步骤，减少创伤和出血。利用甲状软骨膜加强咽壁黏膜缝合口，进一步减少了咽漏的发生.     

一株铜绿假单胞菌中检出两种新的整合子

目的研究铜绿假单胞菌多重耐药的临床分离株RJ217中发现的两个新整合子的结构，并分析其在多重耐药性中的作用。方法用改良三相试验分析RJ217产β-内酰胺酶的情况，用常规和长片段PCR法扩增耐药基因和整合子，并对PCR产物进行序列分析。结果发现铜绿假单胞菌RJ217携带两个新的整合子，其中一个携带veb-I型超广谱β-内酰胺酶(ESBL)基因，这两个整合子的结构分别为IS10-like-veb-I-aadB-oxa10／aadA1和aadB-oxa10／aadA1。结论整合子介导的耐药基因在RJ217的多重耐药性中发挥了重要的作用。     

细胞松弛素B对内皮细胞损伤修复的影响

目的观察细胞松弛素B对内皮细胞损伤修复过程中微丝骨架系统的形态结构变化,研究阻断微丝功能对内皮细胞损伤修复的影响。方法以培养单层内皮细胞损伤模型,采用免疫荧光染色和3H-TdR掺入法,研究微丝功能对创面愈合及细胞增殖的影响。结果内皮细胞在损伤修复过程中伴随微丝特殊而有序的变化。用细胞松弛素B破坏微丝,可不同程度抑制创面的愈合及细胞增殖,并呈一定的时间-剂量依赖关系。结论微丝功能在促进内皮细胞修复过程中起重要作用,可通过直接或间接效应影响DNA合成,从而影响修复过程。     

C57BL/6小鼠胆结石形成中固醇载体蛋白2的mRNA水平和胆固醇饱和指数增高

目的观察C57BL/6鼠胆囊结石形成过程中肝固醇载体蛋白2(SCP2)mRNA水平及胆囊胆汁中胆固醇饱和指数的变化。方法C57BL/6鼠20只,分为结石组和对照组。对照组喂普通饲料,结石组采用1%的胆固醇饮食4周;RT-PCR方法检测肝SCP2 mRNA水平的变化;全自动生化仪检测胆脂,并计算胆固醇饱和指数。结果胆囊结石组肝SCP2 mRNA水平显著升高,胆汁胆固醇饱和指数亦显著增加。结论肝SCP2的表达及胆汁CSI的增高呈正相关。     

伴与不伴对立违抗性障碍的注意缺陷多动障碍儿童自我意识分析

目的:探讨注意缺陷多动障碍(ADHD)儿童伴对立违抗性障碍(ODD)的自我意识特点。方法:对湖南省六个地区进行抽样调查,共抽样9495名儿童。用二阶段流行病学调查方法后,凡符合诊断标准的儿童填写儿童自我意识量表(Children's self-concept Scale,CSCS),其中最后CSCS资料齐全者425人(对照组146人,单纯ADHD 170人,AD-HD伴ODD 109人)。结果:单纯ADHD组及ADHD合并ODD组在量表总分方面明显低于对照组(P<0.01),主要表现在行为因子、智力因子、焦虑因子、合群因子、幸福因子方面;在躯体因子这一项目上单纯ADHD组及ADHD合并ODD组得分也低于对照组(P<0.05)。ADHD合并ODD组在量表总分上要明显低于单纯ADHD组,表现在行为因子、智力因子、焦虑因子、合群因子、幸福因子方面;在躯体因子这一项目上ADHD合并ODD组得分要高于单纯ADHD组。结论:伴或不伴ODD的ADHD患儿的自我意识都明显比正常儿童差,而伴ODD的ADHD患儿自我意识又要明显比不伴ODD的ADHD患儿差。     

CCK-8上调小鼠腹腔巨噬细胞B7.1和B7.2表达并增强其协同刺激活性

目的： 探讨八肽胆囊收缩素（CCK-8）对静息巨噬细胞B7.1和B7.2表达及其协同刺激功能的影响。方法：用CCK-8（10-12-10-6 mol/L）孵育小鼠腹腔巨噬细胞一定时间，采用流式细胞术分析细胞表面B7.1和B7.2含量的变化。用免疫磁珠从小鼠脾细胞分离CD4+T细胞，按4∶〖KG-*2〗1数量比与腹腔巨噬细胞（预先用CCK-8和/或抗B7.1抗体、抗B7.2抗体、CCK1R拮抗剂CR1409、CCK2R拮抗剂CR2945孵育24 h）共同体外培养，同时加入ConA 5 mg/L，采用［3H］掺入法测定CD4+T细胞增殖反映巨噬细胞的协同刺激活性。结果：CCK-8可上调静息巨噬细胞B7.1及B7.2的表达，并增强巨噬细胞的协同刺激活性。CCK-8的作用呈剂量依赖性，最大效应剂量是在10-9-10-7 mol/L之间。抗B7.2抗体可减轻CCK-8增强巨噬细胞协同刺激活性的作用，CR1409及CR2945均能逆转CCK-8的上述作用，且CR1409的作用较CR2945更明显。结论：CCK-8通过上调巨噬细胞B7.2表达而增强其协同刺激活性，该作用由CCK1R及CCK2R介导，其中CCK1R起主要介导作用。     

重组人DcR3腺相关病毒的构建和表达

目的克隆人DcR3基因于腺相关病毒(adeno-associatedvirus,AAV)载体pAAV-IRES-hrGFP中,以获得高感染滴度及纯度的重组人DcR3腺相关病毒,为将其用于感染移植肝,研究其对大鼠移植肝的保护作用打下基础。方法用基因重组的方法构建含全长人DcR3基因的重组腺相关病毒骨架质粒,利用脂质体法将腺相关病毒载体系统共转染入病毒包装细胞AAV-293细胞中,合成重组DcR3腺相关病毒,经PEG/氯仿纯化,用SDS-PAGE鉴定其纯度,扫描电镜观察病毒颗粒形态,倍比稀释法测定重组病毒的感染滴度。并用重组病毒感染COS-7细胞鉴定DcR3的表达。结果正确构建组装重组人DcR3腺相关病毒,纯化后病毒感染滴度为1.1×1010U/mL。在重组DcR3腺相关病毒感染的COS-7细胞上清液中检测到了DcR3的表达。结论成功构建了重组人DcR3腺相关病毒,为下一步研究DcR3对大鼠移植肝的保护作用打下基础。     

先天性软骨发育不全成纤维细胞生长因子受体3基因1138位核苷酸点突变的检测

目的 验证成纤维细胞生长因子受体3(fibroblast growth factor receptor 3，FGFR3)跨膜区1138位核苷酸为先天性软骨发育不全突变热点及用变性梯度电泳方法筛查的效果。方法 对17例临床诊断为先天性软骨发育不全患者进行基因组DNA聚合酶链反应－限制性酶切片段长度多态性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)分析，并用变性梯度凝胶电泳（denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)进行其它突变位点的筛查。结果 17例患者中14例RFLP检测显示能被Sfc I酶切，提示存在1138位核苷酸G→A的转换，且均为杂合子。17例用Msp I酶切均阴性，提示无G→C的颠换。DGGE方法的筛查中，酶切阳性的14例标本均显示存在杂合型突变。3例PCR－RFLP检测阴性的标本未显示突变位点，提示在该扩增区域确实不存在突变位点。结论 FGFR3跨膜区1138核苷酸G→A的突变是软骨发育不全的主要发病机理，DGGE可作为筛查某一区域基因突变的敏感而可靠的检测手段，尤其是对杂合子的检测。     

β—内啡肽对大鼠免疫功能的影响

离体条件下,β-内啡肽(β-END)在10~(-6)-10~(-14)mol/L 可明显地促进ConA 诱导的脾淋巴细胞的转化及IL-2的产生,增加LPS 激活的腹腔巨噬细胞产生IL-1.纳络甯可阻断β-END 的这种作用.静脉注射β-END 也可增强大鼠脾淋巴细胞转化,促进IL-1和IL-2的产生.本结果提示,β-END 具有增强大鼠免疫功能的作用,这种作用可能是由阿片受体介导的。