补肾化痰活血法对多囊卵巢综合征排卵障碍相关调节因子影响的研究进展

对补肾化痰活血法影响多囊卵巢综合征排卵障碍相关调节因子的研究进行综述,指出目前存在的问题,并对未来的研究方向进行展望。     

补肾活血方对大鼠子宫内膜细胞病理形态学及凋亡的影响

目的：探讨补肾活血方治疗子宫内膜异位症的细胞凋亡机制。方法：以雌性8～12周龄Wistar大鼠建立大鼠子宫内膜异位症模型,随机分为模型组、中药低剂量组、中药高剂量组及西药组,每组6只,共干预4周。采用光镜、电镜、TUNEL法检测药物干预前后模型大鼠异位及在位子宫内膜的病理形态学及凋亡细胞的阳性率。结果：①与模型组比较,各治疗组均有不同程度抑制异位内膜生长的作用,并可观察到异位内膜组织中典型的细胞凋亡形态学变化：细胞核固缩,染色质凝集,核破裂及凋亡小体形成等,其中以中药高剂量组及西药组的改变最明显,其次为中药低剂量组。②对在位子宫内膜进行镜下观察发现：中药组与正常的子宫内膜结构基本相同,表现为腺体及间质生长良好,腺上皮及黏膜上皮呈高柱状,间质密集,而西药组呈萎缩性改变,腺上皮萎缩,黏膜上皮呈扁平状,间质减少。③与模型组和中药低剂量组比较,中药高剂量组、西药组大鼠异位子宫内膜细胞平均凋亡指数升高,差异有统计学意义（P〈0.01）。与西药组比较,中药高剂量组异位子宫内膜细胞平均凋亡指数升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。西药组大鼠在位子宫内膜细胞平均凋亡指数较模型组、中药低剂量及中药高剂量组明显升高,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：子宫内膜异位症的发生与细胞凋亡能力的下降有关;补肾活血方能促进异位内膜细胞发生凋亡,使异位病灶萎缩、消退,而对在位子宫内膜无不良影响。     

温肾活血汤改善子宫内膜容受性的临床研究

目的探讨温肾活血汤联合克罗米芬(clomiphene citrate,CC)治疗排卵障碍性不孕症的临床疗效及其改善子宫内膜容受性的作用机制。方法将129例排卵障碍性不孕症患者随机分为A组(CC)、B组(温肾活血汤+CC)、C组(阿司匹林+CC),每组43例,治疗1～3个月经周期,观察排卵率、LUFS发生率、周期妊娠率,以及HCG注射日子宫内膜类型及内膜厚度。结果 B组A+B型内膜率显著高于A组及C组(P<0.05);B组内膜平均厚度显著高于A组(P<0.05)。周期排卵率:B组>C组>A组,但各组间差异无统计学意义;LUFS发生率:B组C组>A组,B组显著高于A组(P<0.05)。结论温肾活血汤能显著提高CC促排卵治疗后的临床妊娠率,降低LUFS的发生率,改善子宫内膜容受性,其效果好于CC组和阿司匹林联合CC组。反证了CC促排卵后符合"宫寒不孕"的理论。     

养血解毒方对银屑病角质形成细胞紧密连接的调节作用

目的:观察银屑病样小鼠皮损紧密连接蛋白中水闸蛋白(claduin-1,claudin-7),闭锁蛋白(occludin)的表达,明确养血解毒方对银屑病表皮通透屏障的修复作用,为养血解毒方治疗银屑病提供科学依据。方法:将C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、甲氨喋呤组、养血解毒方组,制备甲氨喋呤溶液、养血解毒方水煎剂对应灌胃干预,同时小鼠背部剃毛后给予咪喹莫特涂抹诱导银屑病样皮损模型。每日拍照记录皮损形态并对严重程度指数(PASI)评分;水油测试笔检测皮损表皮含水量;苏木素-伊红(HE)染色观察其病理改变、测量表皮厚度;免疫荧光法检测增殖相关的核抗原(Ki67);免疫组化法检测表皮兜甲蛋白(loricrin),真皮中CD3^+T淋巴细胞浸润和紧密连接蛋白claduin-1,claudin-7,occludin的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测皮损中claudin-7,occludin的表达。模拟银屑病皮损微环境,建立白细胞介素-17(IL-17,1 mg·L^-1)刺激的角质形成细胞(Hacat)模型,制作养血组分、解毒组分、养血解毒方喷干粉进行干预。采用细胞增殖毒性检测试剂盒-8(CCK-8)法检测药物对Hacat细胞的毒性;细胞免疫荧光法检测药物对角质形成细胞claudin-1,claudin-7,occludin表达的干预作用。结果:与模型组比较,养血解毒方可显著减轻小鼠银屑病样皮损表现,降低PASI评分及皮损表皮厚度(P<0.01),增加皮损区表皮水分含量(P<0.01),减少表皮ki67,loricrin的异常表达和真皮CD3+T细胞浸润(P<0.01),并增加紧密连接蛋白claudin-1,claudin-7,occludin的表达(P<0.05),增加紧密连接结构的完整性;体外研究发现,与模型组比较,养血解毒方组和养血组分组明显升高紧密连接蛋白claudin-1,claudin-7,occludin的表达(P<0.05);与模型组比较,解毒组分组蛋白表达水平无统计学差异。结论:养血解毒方通过调节角质形成细胞间紧密连接的表达抑制其异常的增殖分化过程,进一步恢复破坏的表皮通透屏障,可能是其治疗银屑病的作用机制之一。其中养血解毒方的养血组分对调节紧密连接的修复起主要作用。     

消瘤方对子宫内膜异位症模型大鼠子宫内膜细胞Wnt通路的影响

目的:探讨消瘤方对子宫内膜异位症模型大鼠子宫内膜细胞Wnt通路的影响。方法:雌性8~12周龄SD大鼠,采用自体移植法手术造模成功后,随机分为模型组、西药组、消瘤方高剂量与低剂量组;另设正常组、假手术组为对照。模型组和假手术组灌胃0.9%Na Cl溶液,西药组灌胃丹那唑混悬液,消瘤方高、低剂量组灌胃不同剂量(55.0、27.5 g·kg-1·d-1)的消瘤方药液,连续给药4周。剖腹观察子宫内膜组织种植及生长情况,并采用Western-blot法检测药物干预后模型大鼠在位及异位子宫内膜细胞Wnt7a、β-catenin蛋白表达的变化。结果:模型组异位内膜组织生长良好,中药高剂量与西药组异位内膜组织萎缩,而各组在位的子宫内膜组织肉眼观察无明显变化;与模型组比较,中药高剂量组和西药组在位、异位内膜细胞中Wnt7a、β-catenin蛋白的表达水平下降(P0.05),且均优于中药低剂量组(P0.05)。结论:消瘤方可促进子宫内膜细胞凋亡,并可抑制Wnt通路的关键调节因子。     

补肾法结合西药治疗妊娠合并重度卵巢过度刺激症1例

1病例讨论 患者,30岁,月经稀发10年,诊断为多囊卵巢综合症,原发不孕。因“停经37d,下腹胀10d”于2009年8月5日入院,LMP：2009年6月30日。月经周期第7～11d开始每天服用克罗米芬100mg,B超监测卵泡未见发育,故予月经第14d起隔日肌注HMG150u,连用4次,月经周期第21d查B超提示：左侧卵巢优势卵泡3～4个,     

熊果酸联合顺铂对卵巢癌干细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的:观察熊果酸（ursolic acid,UA）联合顺铂(DDP)对卵巢癌干细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响及其作用机制。方法:通过体外无血清悬浮培养人卵巢癌SKOV3干细胞并进行细胞鉴定。实验分为SKOV3干细胞组、熊果酸组、熊果酸联合顺铂组。MTT法检测干细胞的增殖,Transwell实验检测干细胞侵袭与迁移能力,采用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测干细胞凋亡。Real-time PCR检测上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关标记分子Vimentin、N-cadherin、E-cadherin、Fibronectin、Twist的mRNA表达情况,Western-blot检测E-cadherin、Vimentin、Twist蛋白表达情况。结果:熊果酸对SKOV3干细胞增殖有显著抑制作用,呈剂量依赖性（P＜0.05）;流式细胞术显示熊果酸组、熊果酸联合顺铂组均可提高SKOV3干细胞的凋亡率,与SKOV3干细胞组相比有统计学差异（P＜0.05）;熊果酸组、熊果酸联合顺铂组可有效抑制SKOV3干细胞的侵袭和迁移能力（P＜0.05）;Real-time PCR测定熊果酸组、熊果酸联合顺铂组作用SKOV3干细胞后EMT基因表达水平,结果显示Fibronectin、Twist、Vimentin、N-cadherin表达降低,E-cadherin表达升高（P＜0.05）;Western-blot结果显示熊果酸组、熊果酸联合顺铂组可上调E-cadherin蛋白的表达,下调Vimentin、Twist蛋白的表达;与熊果酸组相比,熊果酸联合顺铂组对干细胞凋亡率更高,迁移和侵袭能力更低,E-cadherin表达更高,Vimentin和Twist表达更低,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论:熊果酸对卵巢癌干细胞有抑制增殖、侵袭和迁移,诱导凋亡的作用,联合顺铂作用效果更优,其机制可能与逆转EMT有关。     

缺氧条件下缺氧诱导因子-1α抑制剂YC-1对人卵巢癌Skov3干细胞耐药的逆转作用

目的:探讨缺氧诱导因子-1α抑制剂YC-1在缺氧条件下逆转人卵巢癌干细胞Skov3耐药的机制。方法:选用人卵巢癌Skov3细胞通过无血清悬浮培养法富集肿瘤干细胞。分别于常氧及缺氧条件下检测不同浓度顺铂干预Skov3贴壁细胞及干细胞后测定顺铂对于两种细胞的抑制作用,及缺氧后干性指标、耐药指标ABCG2及HIF-1α的表达。当给予HIF-1α抑制剂YC-1后,测定顺铂对Skov3干细胞的抑制作用。并且检测干细胞干性指标、ABCG2及HIF-1α的mRNA表达。结果:悬浮培养的Skov3干细胞的干性指标CD44、NANOG、OCT-4及耐药指标ABCG2较贴壁细胞升高,且缺氧培养后,随着HIF-1α表达的升高,CD44、NANOG、OCT-4及ABCG2的表达也明显升高,P<0.05。干细胞的耐药性高于贴壁细胞,且缺氧培养耐药性增加。当给予YC-1后,干细胞耐药性下调,HIF-1α出现抑制,同时其干性指标CD44、NANOG、OCT-4、耐药ABCG2明显下调,P<0.05。结论:YC-1在缺氧条件下通过抑制HIF-1α下调ABCG2的表达逆转Skov3干细胞耐药。     

增免抑瘤颗粒剂对卵巢癌荷瘤小鼠肿瘤生长及细胞凋亡的影响

目的研究增免抑瘤颗粒剂(ZMYL)对卵巢癌皮下移植瘤的抑制作用,并从细胞凋亡途径探讨其作用机制。方法建立卵巢癌荷瘤小鼠模型,随机分为5组:对照组、紫杉醇组、ZMYL高、中、低剂量组,每组8只。给予相应干预措施。给药10天后处死荷瘤小鼠,称取瘤重计算抑瘤率,电镜观察瘤组织超微结构,TUNEL法检测凋亡指数,实时荧光定量PCR法检测细胞凋亡促进及抑制因子Bax、Bcl-2 mRNA表达。结果①紫杉醇及ZMYL各组均能抑制移植瘤增殖,ZMYL高、中、低剂量组的抑瘤率分别为34.64%、31.60%、30.03%。②病理检查ZMYL各组与紫杉醇组肿瘤细胞均有典型凋亡形态学改变。③与对照组比较,紫杉醇组及ZMYL高、中、低剂量组有诱导肿瘤细胞凋亡作用,差异有统计学意义(P<0.05)。④与对照组比较,紫杉醇组及ZMYL高、中剂量组能上调移植瘤内Bax mRNA表达和下调移植瘤内Bcl-2 mRNA表达,差异有统计学意义(P<0.05)。其中ZMYL高剂量组上调Bax及下调Bcl-2表达的作用强于ZMYL中剂量组,差异有统计学意义(P<0.05);ZMYL中剂量组上调Bax以及下调Bcl-2表达的作用强于ZMYL低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ZMYL颗粒剂具有一定的抑制卵巢癌细胞增殖的作用,其机制与上调Bax、下调Bcl-2 mRNA表达、促进肿瘤细胞凋亡有关。     

增免抑瘤方对顺铂耐药卵巢癌裸鼠耐药相关基因HIF-1α、Glut1、MDR1、P-gp表达的影响

目的研究增免抑瘤方(ZMYL)对顺铂耐药卵巢癌裸鼠耐药调控基因HIF-1α、Glut1、MDR1、P-gp表达的影响。方法采用顺铂耐药人卵巢癌细胞株COC1/DDP构建裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为对照组,中药高、中、低剂量组,顺铂组(DDP),联合组(DDP联合中药),各组给予相应干预措施共3周。定期测量瘤体最大、最小径线,绘制肿瘤生长曲线,给药结束后处死裸鼠,剥取瘤体计算瘤重及抑瘤率,免疫组化测定瘤体HIF-1α、Glut1的表达,定量RT-PCR测定瘤体MDR1、P-gp的表达。结果①抑瘤率:联合组抑瘤率最高,达(59.26±6.86)%,与其他各组比较差异均有统计学意义(P<0.01);中药各剂量组均有一定的抑瘤作用,抑瘤率低于顺铂组(P<0.01)。②免疫组化结果:联合组HIF-1α的表达最低(P<0.01);中药高、中剂量组HIF-1α的表达较顺铂组降低(P<0.01);低剂量组与之比较差异无统计学意义(P>0.05)。联合组以及中药高剂量组Glut1的表达低于顺铂组(P<0.01);中剂量组与之比较差异无统计学意义(P>0.05);低剂量组高于顺铂组(P<0.05),但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。③定量RT-PCR结果:顺铂组MDR1、P-gp的表达较对照组升高(P<0.01);联合组以及中药各剂量组MDR1、P-gp的表达较顺铂组降低(P<0.01)。结论增免抑瘤方辅助化疗可逆转耐药卵巢癌裸鼠对顺铂的耐药性,增强其抑瘤作用;其作用机制可能通过下调瘤体内缺氧标记物Glut1、HIF-1α的表达,下调多药耐药基因MDR1、P-gp的表达,从缺氧介导的"药泵"耐药机制途径改善卵巢癌化疗耐药。