SARS冠状病毒灭活疫苗研究初报

目的研制出安全、有效、质量可控的SARS冠状病毒灭活疫苗;同时,制备能用于SARS被动免疫和治疗用的异源高效价特异性抗体,用于SARS的免疫防治.方法采用细胞培养法,从非典型肺炎患者标本中分离获得病毒株,通过电镜、血清学以及RT-PCR技术进行病毒鉴定.运用细胞规模化培养技术大量制备SARS冠状病毒.用温度灭活法和甲醛灭活法对SARS冠状病毒进行灭活处理,筛选灭活条件.将不同类型和不同剂量的佐剂与灭活病毒加以配伍,优化SARS灭活疫苗;同时,以小鼠、兔、猴等为实验对象,进行灭活疫苗的免疫原性评价.用灭活疫苗免疫马,获取异源(马)高免血清,并进行应用效果评价.结果从分离得到的SARS冠状病毒中,优选出适合疫苗制作的SARS病毒株2株-F69和Y3,初步建立了大规模培养SARS病毒的技术体系,病毒TCID50达到106以上.确定了SARS病毒的灭活方法,优选出灭活疫苗的佐剂,并已生产出一定量的SARS灭活疫苗.将灭活疫苗初步用于小鼠、兔等的免疫接种,对其体液免疫和细胞免疫效果进行了初步检测.结论试验研制的SARS灭活疫苗具有较强的免疫原性,设计的灭活疫苗生产技术路线是可行的,进一步的研究工作结束后,可望进行规模化开发生产.     

量子点荧光标记应用于生物学的研究进展

量子点标记作为一种新型的荧光标记方法，应用于生物学领域的研究有其不可比拟的优势，短短数年在生物化学、细胞生物学、免疫化学等学科的研究中显示了它的巨大发展潜力。本就量子点优于传统有机荧光染料的性质、量子点标记近年来在生物领域中的研究进展和应用前景作一阐述。     

空肠弯曲菌共同抗原单克隆抗体的研制及其在细菌检验中的应用

应用B淋巴细胞杂交瘤技术,建立了5株稳定分泌抗空弯菌共同抗原(CA)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,其中4株的McAb针对CA中的耐热抗原成分,1株的McAb针对CA中的不耐热抗原成分。应用32种其它细菌对这些McAb的特异性检查表明,除与幽门弯曲菌发生交叉反应外,均为阴性反应。应用不同地区、不同来源的516株空弯菌对这些McAb进行检查,结果均为阳性反应。应用BA-ELISA、间接-ELISA对909份实际标本进行了检测,结果均与常规培养法无显著差异,可在28小时内报告结果。这表明本文研制的McAb对空弯菌的鉴定与检测具有特异、敏感和对本菌覆盖率高的特点,可用于人、兽空弯菌的鉴定与检验。     

人溶菌酶基因在毕赤酵母中的表达及其活性检测

目的用PCR技术特异扩增人溶菌酶基因hLYz cDNA序列,克隆至质粒pMD18一T中,获得重组质粒pMD18-T-hLYZ。方法采用EcoRⅠ／NotⅠ双酶切及PCR确认正确后,将人溶菌酶基因cDNA目的片段亚克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9k中,通过电穿孔法转化毕赤酵母菌GS115,获得重组质粒pPIC9k-hLYZ,采用EcoRⅠ／NotⅠ双酶切法及DNA测序证明cDNA序列完全正确,在毕赤酵母菌中诱导表达产物经SDS-PAGE电泳分析,结果表明表达产物与预期大小的hLYZ蛋白分子量一致,采用微球菌溶解法进行抑菌活性测定。结论证实具有明显的抑菌作用。     

McAb—Dot—ELISA对空肠弯曲菌快速鉴定的研究

应用本室研制的抗空肠弯曲菌共同抗原的单克隆抗体。以Dot-ELISA 对空肠弯曲菌进行快速鉴定.通过对实验条件的优选,确定了Dot-ELISA 的工作程序.对两种参考菌株(Pcnner.Loir)、人及10种动物来源的476株空肠弯曲菌进行了鉴定,结果均为阳性反应。可在3h 内报告结果.与11种其它细菌的试验结果表明,除与幽门弯曲茵发生弱阳性反应外,与另外其它10种细菌均为阴性反应.为空肠弯曲菌的鉴定提供了一种特异、快速的方法.     

表达HIV-1 gag-gp120嵌合基因酵母工程菌的构建及表达条件的优化

目的：构建表达HIV-1gag-gp120嵌合基因的酵母工程菌，并优化表达条件。方法：将gag-gp120嵌合基因插入到酵母表达载体pHILS1中，构建了表达质粒pHILGP。线性化质粒电转化毕赤酵母菌GS115后进行整合，通过PCR及表达产物的SDS-PAGE和ELISA等方法筛选 阳性酵母工程菌，并优化表达条件。结果：成功构建表达融合蛋白的酵母工程菌，表达量为13%左右。表达蛋白能与HIV-1阳性血清发生反应，但其相对分子质量（Mr）比预计计算的值要小。最佳表达条件为：BMMY培养基，85%溶解氧，培养时间3d，1%甲醇诱导浓度。结论：表达的融合蛋白具有很好的抗原特异性，存在于上清中，这有利于目的蛋白的分离纯化。     

猪胸膜肺炎放线杆菌单克隆抗体的制备与鉴定

目的：建立抗血清1型猪胸膜肺炎放线杆菌（APP-1）脂多糖（LPS）的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为今后建立该菌的分型诊断技术奠定基础。方法：腹腔注射APP-1标准株的甲醛固定抗原免疫BALB/c小鼠,ELISA检测血清中LPS抗体滴度并选择值最高的小鼠用于细胞融合,且于融合前3天加强免疫1次。常规方法进行融合,HT、HAT培养液选择培养融合后的细胞,ELISA检测细胞培养上清中的LPS抗体,阳性杂交瘤细胞用有限稀释法克隆传代。结果：获得3株稳定分泌抗APP-1LPS抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,其小鼠腹水单克隆抗体效价1∶16000～1∶32000。结论：已成功建立3株稳定分泌抗APP-1LPS抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,其产生的单克隆抗体与呼吸道其它常见致病菌及APP-3,5,7,9,型无交叉反应。