小鼠成牙关键调控基因的筛选与功能验证实验研究

  目的  筛选小鼠成牙关键基因,并验证关键基因对羊膜上皮细胞（WISH）成牙诱导分化的能力。  方法  通过免疫组化染色、实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测骨形成蛋白4（BMP4）、成纤维细胞生长因子8（FGF8）、音猬因子（SHH）、淋巴增强因子（LEF1）4种分子蛋白和基因在小鼠早期牙胚发育过程〔小鼠胚胎发育第10.5天(E10.5)、E11.5、E14.5〕中的时空差异化表达,筛选可能的成牙关键基因;非牙源性上皮WISH成骨诱导培养3周,采用茜素红（ALZ）染色与RT-qPCR检测碱性磷酸酶（ALP）观察骨向分化能力;通过胚层重组实验进行组织重组,将BMP4蛋白加入重组组织块,并移植于小鼠肾被膜下,观察验证关键基因的蛋白能否诱导非牙源性上皮成牙分化。  结果  免疫组化染色和RT-qPCR结果证实E10.5胎鼠BMP4蛋白和基因在第一、第二腮弓上皮存在差异性表达,且从E10.5~E14.5其表达与成牙能力从上皮向间充质的转移一致;FGF8蛋白和基因虽在第一、第二腮弓上皮存在差异性表达,但其表达与成牙能力的转移不一致;LEF1、SHH蛋白和基因在第一、二腮弓上皮不存在差异表达,且与成牙能力的转移不一致,因此,筛选出BMP4基因为可能的成牙关键基因。WISH成骨诱导3周,ALZ染色阳性,并形成钙结节,RT-qPCR检测ALP mRNA表达升高;胚层重组实验结果显示,加入外源性的BMP4蛋白可使第二腮弓间充质分别与第二腮弓上皮及WISH均有牙齿样结构形成。  结论  BMP4、FGF8、SHH、LEF1的蛋白和基因在小鼠牙胚早期发育过程中呈时空特异性表达;BMP4的蛋白和基因在第一、二腮弓上皮差异表达,且其蛋白可使与第二腮弓间充质重组的非牙源性上皮获得成牙能力。BMP4为可能的成牙关键基因。     

大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对牙龈卟啉单胞菌唾液酸酶活性及其毒力基因表达影响研究

目的    探讨大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对牙龈卟啉单胞菌（P. gingivalis）唾液酸酶活性及其毒力基因表达的影响。方法    使用不同质量浓度的大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（0.2、0.5、2、5、10 mg/mL）处理P. gingivalis W83（实验组）,用未加药物的P. gingivalis W83作对照（对照组）,采用荧光法检测大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对P. gingivalis唾液酸酶活性的作用。5 mg/mL大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷作用于P. gingivalis W83,Real-time PCR法检测毒力基因fimA、fimR、fimS、kgp、rgpA和rgpB的表达情况。结果    大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对P. gingivalis唾液酸酶活性产生了抑制作用,当其质量浓度为0.2、0.5、2、5、10 mg/mL时,对唾液酸酶活性的抑制率分别为11.4%、32.23%、40.21%、73.54%、84.31%。与对照组比较,实验组（5 mg/mL大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷处理）的fimA、fimR、fimS、kgp、rgpA和rgpB基因表达均下降,差异均有统计学意义（均P < 0.05）。结论    大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷可有效抑制P. gingivalis唾液酸酶活性,其抑制作用会降低细菌毒力基因表达,有望成为预防及治疗牙周炎的新型药物。     

骨性Ⅲ类错正颌手术前、后面部软、硬组织变化比率的三维研究

目的 研究骨性Ⅲ类错畸形患者面部软、硬组织三维方向上变化的相关性,以及手术前、后软、硬组织的变化比率,以期更好地对术后软组织外貌进行预测。方法 对20例骨性Ⅲ类错畸形成人患者分别于术前2周及术后3个月进行颅面CT扫描和三维重建及面部软组织3D摄影成像,将采集的数据导入Dolphin软件,转换为三维面像数字化模型,建立三维测量坐标系(轴面、矢状面及冠状面),筛选19个软、硬组织标记点并进行测量、对比和配对,共12对。读取标记点的三维坐标（X、Y、Z）,进行手术前、后的定点对比测量,采用 SPSS 22.0 软件包对测量数据进行统计学分析。结果 12对软、硬组织标志点在X轴即左右方向仅Pn/A、Gn'/Gn及Me'/Me存在相关性,在Y轴即上下方向仅Gn'/Gn存在相关性,在Z轴上所有软、硬组织配对点均存在相关性。除UL'/UI及UL/SPr外,均为高度相关。手术前、后,下颌的软、硬组织测量标志点的变化比率大于上颌。结论 骨性Ⅲ类错畸形患者双颌手术前、后软、硬组织的变化主要集中于Z轴即前后向的变化,各软、硬组织配对标志点间呈线性相关关系,且下颌软、硬组织位移比率大于上颌。     

STAT3反义寡聚核苷酸对人脑胶质瘤细胞系U251细胞侵袭和凋亡的影响

目的 探讨敲低信号转导及转录活化因子3(STAT3)表达对人胶质瘤细胞系U251细胞功能的影响及相关作用机制. 方法 脂质体介导STAT3反义寡聚核苷酸转染人胶质瘤细胞系U251细胞,同时设无义序列组和空白对照组,48 h后MTT检测STAT3反义核苷酸对U251细胞增殖的影响,流式细胞仪检测各组细胞周期、细胞凋亡的变化,Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力,Western blotting检测STAT3和磷酸化STAT3(pSTAT3)蛋白、尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达水平. 结果 与空白对照组、无义序列组比较,STAT3反义核苷酸组细胞的相对存活率降低,G1/G0期细胞比例、细胞凋亡增加,Transwell实验显示滤膜细胞数明显减少,STAT3、pSTAT3、uPAR和Bcl-2蛋白的表达降低、Bax蛋白表达增加,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 反义STAT3可能通过调节相关基因表达抑制U251细胞侵袭能力并诱导其调亡,STAT3可作为胶质瘤基因治疗的有效靶点.     

甲氯酚酯联合纳络酮抢救急性重度酒精中毒临床分析

随着人们生活及工作方式的改变,酒精中毒时有发生.我们应用甲氯酚酯联合大剂量纳络酮治疗急性重度酒精中毒72例,取得较好的临床疗效.现将结果报道如下. 对象与方法 1.对象:收集我院急性酒精中毒诊患者156例,均在中毒后30 ～ 90分钟内就诊.入选标准:(1)有明确过量饮酒史;(2)呼吸、呕吐物中有酒精气味;(3)中毒程度均为重度,表现为昏睡、昏迷等症状;(4)无其他合并症.排除标准:排除外伤、药物、化学性气体及其他中枢神经系统疾病引起的昏睡、昏迷.将156例患者随机分为3组,联合治疗组72例,男性49,女性23例,年龄17～62岁,平均年龄(37.1±4.2)岁;纳络酮治疗组45例,男性38例,女性7例,年龄19 ～ 56岁,平均年龄(38.8±3.9)岁;甲氯酚酯治疗组39例,男性31例,女性8例,年龄18～59岁,平均年龄(40.7±5.2)岁.     

胰腺中段切除术在胰腺疾病中应用(附17例报告)

目的 探讨胰腺中段切除术在治疗胰腺颈体部疾病的可行性及临床应用价值.方法 回顾分析西安交通大学第一附属医院2006年6月～2012年3月17例胰腺颈体部疾病患者实施胰腺中段切除术的临床资料,胰岛细胞瘤4例(2例为无功能性),黏液性囊腺瘤4例,浆液性囊腺瘤3例,实性假乳头状瘤3例,非侵袭性胰管内乳头状粘液癌2例(病理科已核实),外伤胰腺颈体部横断伤1例.结果 17例均行胰腺中段切除,胰体空肠Roux-en-Y吻合14例,胰头、胰体空肠双吻合3例,术后胰瘘5例(29.4％),出血2例(11.8％),经非手术治疗后痊愈.随访时间5个月-2年,1例因腹腔转移多器官衰竭术后5个月死亡;1例术后8个月因心脑血管疾病死亡;其余均存活,且随访期血糖监测正常,无其它并发症.结论 对于胰腺颈体部良性或低度恶性肿瘤,胰腺中段切除术是一种比较理想的手术方式,该术式能最大程度保留胰腺组织,维持胰腺的内、外分泌功能,维持上消化道连续性,可获得满意的治疗效果.