MTT法检测RAW264.7细胞活力及可能因素分析

目的 通过MTT法检测RAW264.7细胞活力并绘制生长曲线,探讨MTT作用环节中的可能影响因素,优化实验方案.方法 以对数生长期的RAW264.7细胞为实验对象,分别用正常培养和脱离血清培养法,记录在不同时间点的OD值.并在加入DMSO后,分别在6、12、24和48 h及3、15和30d进行OD值测量.结果 加入DMSO后不同时间点的MTT法检测结果,随着时间的延长,结果差异越来越大,超过3d后影响较大,与对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).3d内,与对照组比较,差异没有统计学意义(P＞0.05).结论 ①验证、测量并绘制RAW264.7的生长曲线;(②加盖后影响透光度,增大了OD值,影响了实验结果;③随着DMSO时间的延长以第3天为限,否则影响实验结果.     

氟暴露患者外周血中MCM3的表达及肝肾功能变化

背景：前期研究发现MCM3与氟中毒相关,但其在氟中毒早期暴露者中的表达情况尚不清楚。 目的：分析氟暴露患者及对照人群外周血中MCM3 mRNA的表达量。 方法：选取饮水型氟中毒轻度患者(暴露组)、对照人群(非暴露组)各11例,采用SYBRGreen1嵌合荧光法实时定量PCR检测外周血单个核细胞中MCM3 mRNA的表达,同时测定两组肝肾功能指标。 结果与结论：暴露组及非暴露组MCM3 mRNA表达量分别为0.573 60±0.102 59、0.550 0±0.171 81,两组差异无显著性意义(P > 0.05)。所测的肝肾功能指标在两组中差异无显著性意义。结果显示轻度氟暴露对患者外周血单个核细胞中MCM3 mRNA表达无显著影响。氟对暴露者肝、肾功能的影响需要选取更多的指标综合分析。     

组织胚胎学实验教学实践与思考

把握好组织胚胎学的实验教学工作是提高教学质量的重要环节。在实验教学过程中我们通过加强实验教学的集体备课,统一实验教学的认识,编写自用实验教学教材,突出图片教学、学生绘图与实验考核等教学方式,以促进实验与理论教学的有机结合,提高学生的实践学习能力。     

温通活血乳膏对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞TNF-α、IL-6、NF-κB表达的影响

目的观察温通活血乳膏对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞TNF-α、IL-6、NF-κB表达的影响。方法将RAW264.7细胞随机分为正常对照组、LPS组、空白对照组、温通活血乳膏浓缩液高、中、低剂量组(250、50、10μg/m L)。样品与细胞共同孵育24 h后,进行相关检测。结果不同剂量温通活血乳膏对细胞生长均无抑制作用,细胞活力正常。与LPS组比较,温通活血乳膏组能显著抑制NO、ROS产生及TNF-α、IL-6水平(P0.05,P0.01),并均呈量效关系;也能显著抑制LDH释放(P0.05),但量效关系不明显。RAW264.7细胞经LPS刺激后,p65、p-p65、IKK、p-IKK细胞核区可见明显的绿色荧光表达,与细胞核蓝色叠加,其核内荧光强度显著高于正常对照组(P0.01);经温通活血乳膏干预后,p65蛋白荧光强度显著降低(P0.01)。结论温通活血乳膏能有效抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞释放炎症因子,具有一定抗炎作用,其机制可能与抑制p65蛋白核转位有关。     

人体组织学数字化切片视听课程的构建及探索

正互联网时代的迅猛发展和普及,使现代教育面临了前所未有的冲击和考验~([1])。如何改变既往的教学模式、教学目标和教学手段,以适应当前网络时代对教育教学的要求,是当今医学教学工作者需要思考的课题。作为一门重要的医学基础课程,人体组织学因其内容庞杂,结构抽象,长期以来都是医学生学习的硬伤。为适应学生学习的个性化要求,结合多媒体和网络技术,本教研室构建了基于数字化切片技术的人体组织学数字化网络视听课程,在全景扫描数字化切片的基础上,采用人声讲解,视     

慢性氟中毒大鼠软骨的损害及COLIXA3蛋白、表达的实验研究

目的 探讨不同程度的氟中毒是否影响染氟大鼠软骨组织中COLIXA3蛋白的表达.方法 选用3～4周龄健康雄性Wistar大鼠40只,按体质量随机分为5组,每组8只,分笼饲养,期间分别自由饮用含氟化钠0(对照)、25、50、100、150mg/L的蒸馏水,饲喂6月后建立氟中毒大鼠模型.应用光学显微镜分析实验大鼠骨组织的病理形态学变化过程.并采用免疫组织化学技术检测大鼠股骨干骺端COLIXA3蛋白的表达情况.结果 大鼠骨组织HE染色显示,各染氟组股骨干骺端出现不同程度软骨骨化,骨密度增加,具有硬化性氟骨症病变.对照组软骨组织未见明显异常.大鼠软骨细胞COLIXA3免疫组织化学染色结果为阳性,胞浆内可见有棕黄色颗粒,25、50、100 mg/L组在软骨组织中COLIXA3蛋白表达(23.3±4.5、41.2±5.6、26.4±7.5)增强.其中50、100 mg/L组表达与对照组(6.1±3.5)相比明显增加,组间比较差异有统计学意义(P均<0.05).150 mg/L组COLIXA3蛋白(13.3±4.2)较前面3组表达减弱,仍高于对照组,组问比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 动物模型中,大鼠病理学为单纯性骨硬化表现.低剂量氟促进,高剂量抑制大鼠软骨细胞的增生.随着染氟时间的延长,外环境中氟浓度过高时,对软骨细胞就表现为氟离子的直接毒性作用.氟化物影响染氟大鼠软骨组织中COLIXA3蛋白的表达,低剂量氟可以促进COLIXA3蛋白的表达,随剂量增加氟的促进作用减弱.

Abstract：

Objective To explore whether different degrees of fluorosis influence the expression of cartilage COLIXA3 protein in fluorosis model rats. Methods Forty male Wistar rats 3 to 4 weeks old were randomly divided into 5 groups according to body mass, and these rats were fed with distilled water containing sodium fluoride(NaF) of 0(control), 25, 50, 100 and 150 mg/L for 6 months, respectively, in order to establish the animal model of drinking water type fluorosis. Pathomorphologieal changes of the osseous tissues of rats were analyzed under light microscope and transmission electron microscope, and the expression of COLIXA3 protein of femur metaphysis was examined by immunohistochemistry. Results HE staining showed different degrees of femoral metaphyseal ossification of cartilage in each experimental group, bone density increased, with sclerotic lesions of skeletal fluorosis. The control group showed no abnormal cartilage. Electron microscopy showed that the experimental groups with varying degrees of cartilage cell swelling, cell matrix fades, 50 mg/L group .showed hyperplasia, and 100,150 mg/L groups were observed with organelles decreased, part of the disintegration of the cartilage cell lacunae, lmmunohistochemical staining of rat chondrocytes COLIXA3 was positive, cytoplasm with brown granules, cartilage COLIXA3 protein expression(23.3 ± 4.5, 41.2 ± 5.6, 26.4 ~ 7.5) in the 25, 50 and 100 mg/L groups enhanced. Compared to the control group (6.1 ± 3.5), the expression of 50 and 100 mg/L groups was significantly increased, and the differences were statistically significant(all P < 0.05). The expression(13.3 ± 4.2)of COLIXA3 protein in 150 mg/L group was decreased compared with the previous three, but is still higher than that of control, and the difference was not statistically significant(P > 0.05). Conclusions There has pathological changes of sclerosing skeletal fluorosis in animal model. Low-dose fluoride promotes while high-dose inhibits cartilage cell proliferation. When fluorine concentration in external environment is too high and with extended exposure to fluoride, direct toxic effects of fluoride on cartilage cells is observed. Fluorine affects and promotes the expression of COLIXA3 protein in cartilage. Low-dose fluoride can promote COLIXA3 protein expression, as the dose increases (over 100 mg/L), the effect decreases.     

氟中毒患者COLIXA3基因多态性观察

目的 观察氟中毒患者COLIXA3基因多态性,探讨COLIXA3基因在地方性氟中毒发病机制中的作用.方法 在山西省忻州市,选取51例饮水型氟中毒患者作为病例组,28例健康居民作为对照组,用Dean法检测氟斑牙,X线拍片检测氟骨症,PCR法扩增血清COLIXA3第5外显子103位点基因产物,测序后分析该基因位点的基因型.结果 病例组51例患者中检出轻度氟斑牙10例,中度氟斑牙14例,重度氟斑牙15例,对照组无氟斑牙检出.病例组51例患者均有不同程度氟骨症表现,以骨质硬化型损害为主,占86.27％(44/51),且轻度氟骨症患者均为骨质硬化型损害,而中度和重度氟骨症患者表现为骨质硬化型和混合型损害;对照组未见氟骨症发生.病例组COLIXA3基因第5外显子103位点AA、Aa、aa 基因型分布频率[96.08％( 49/51)、3.92％(2/51)、0.00％(0/51)]与对照组[96.43％(27/28)、3.57％(1/28)、0.00％(0/28)]比较,差异无统计学意义(x2=0.94,P＞ 0.05).结论 COLIXA3基因第5外显子基因多态性与氟中毒的发生未见明显关联.     

NaF对RAW264.7细胞活力的影响

目的观察不同浓度NaF（0mg/L、2 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、60 mg/L、80 mg/L）在不同时间（24 h、48 h、72 h）,对RAW264.7细胞活力及破骨活性的影响。方法 RAW264.7细胞浓度为5×104个/ml接种24孔板,每孔加2 ml培养基;按NaF浓度和时间分组,作MTT,用酶标仪测吸光度值,判断细胞活力;免疫组织化学法测定破骨细胞内基质金属蛋白酶9（MMP-9）和组织蛋白酶K的表达。结果 NaF浓度变量和时间变量交互作用对细胞活力（吸光度值）造成显著的影响,细胞活力随NaF浓度升高依次呈梯度样显著降低;NaF浓度为20 mg/L时,RAW264.7细胞活力未见明显抑制;随着NaF作用时间延长,RAW264.7细胞活力依次呈显著升高趋势;MMP-9表达随氟剂量增高而增强,组织蛋白酶K表达各组未见差异。结论 NaF对RAW264.7细胞活力的抑制是暂时性的,随着时间的延长NaF对RAW264.7细胞活力的抑制作用减弱;氟通过提高破骨细胞内MMP-9的表达来增强破骨细胞骨吸收活性。     

盆底重建术治疗盆腔器官脱垂的治疗效果评价

目的:评价应用网片盆底重建术治疗盆腔器官脱垂的临床疗效。方法:选择2008年以来新疆维吾尔自治区人民医院盆腔器官脱垂行网片盆底重建术患者80例,以POP-Q分期作为客观疗效评价指标,以盆腔器官脱垂生活质量问卷(P-QOL)量表作为主观治愈指标。结果:手术均顺利完成,术后恢复良好,无1例血管损伤、尿道损伤、膀胱及直肠损伤。术后3个月定期随访,无感染、无复发、无性生活障碍,补片侵蚀发生1例经治疗后好转,肛门坠胀感1例,穿刺处及大腿区疼痛1例,术后早期尿频、尿急、排尿不尽2例。结论:网片盆底重建术用于盆腔器官脱垂的治疗安全、有效,术后并发症少,值得推广,仍需长期随访。     

应用双变量输注方案实施急性超容血液稀释的可行性评价

目的:探讨应用双变量输注方案实施急性超容血液稀释(AHHD)对机体的影响,并评价其临床应用的安全性及可行性。方法:受试对象为32例在全麻下实施择期手术的耳鼻喉科病人,ASAⅠ~Ⅱ级,随机分为AH-HD组(n=16)和对照组(n=16)。全麻后AHHD组按照胶体液双变量输注方案实施AHHD,分别于AHHD前、AHHD后0 min、20 min4、0 min、手术出血基本停止时(或决定输入同种异体血时)及手术结束时采动、静脉血,分别测定红细胞压积(Hct)、血红蛋白(Hb)、肝肾功能、凝血功能、动脉血气、静脉血气及血乳酸含量。分别记录各采血时点的心率、有创动脉血压、中心静脉压、体温。根据公式计算动脉血氧含量(CaO2)、混合静脉血氧含量(C-νO2)、摄氧率(ERO2)。结果:血液稀释完成后,实测Hb、Hct分别为(90.7±10.8)g/L和(26.7±3.2)%,较基础值分别下降34.5%和32.6%,基本达到靶目标值。CaO2与C-νO2与基础值比较分别降低了20.7%、20.5%,差异有统计学意义(P<0.05),其实测值超过正常值数倍以上。ERO2轻度增加,混合静脉血氧饱和度(S-νO2)、体温、碱剩余(BE)与pH均轻度降低,差异无统计学意义。心率、血压、中心静脉压均在正常范围内波动。围术期未见肺水肿及心衰的临床征象。结论:合理应用双变量输注方案实施AHHD可达到血液稀释的预期目标,并可满足其有效性、安全性和可行性。