基于差异蛋白质组学解析一贯煎对大鼠肝硬化形成的影响

目的：基于差异蛋白质组学探讨一贯煎干预肝硬化的部分效应机制。 方法：48只Wistar雄性大鼠随机分为正常组（n=12）及造模组（n=36）,采用50％四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）-橄榄油溶液1 mL/kg腹腔注射（2次/周,共9周）制备大鼠肝硬化模型。于开始造模后3周和6周分别随机处死6只大鼠,作药物干预前的动态观察,其余24只模型大鼠于开始造模后第7周首日随机分为模型组（n=12）及一贯煎干预组（n=12）。大鼠于第9周末全部处死取材。双向凝胶电泳（two-dimensional gel electrophoresis,2-DE）分离肝组织总蛋白,基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱及数据库查询鉴定差异表达蛋白质;差异蛋白质铜/锌超氧化物歧化酶（Cu/Zn superoxide dismutase, Cu/Zn SOD）和DJ-1表达采用蛋白印迹法及免疫组织化学方法进行验证。 结果：获得分辨率高、重复性好的肝组织2-DE图谱,经质谱鉴定的50个差异蛋白质中,与氧化应激相关的5个蛋白质分别是Cu/Zn SOD、DJ-1、谷胱甘肽合成酶、谷胱甘肽S-转移酶Yb-1亚基、醛酮还原酶7,A2。与正常组大鼠比较,模型组肝组织Cu/Zn SOD、DJ-1、谷胱甘肽S-转移酶及醛酮还原酶7,A2的表达均显著降低,其中Cu/Zn SOD、醛酮还原酶7,A2在造模3周、6周及9周后呈梯级下降,而DJ-1、谷胱甘肽S-转移酶于造模3周、6周及9周后均呈低水平表达;谷胱甘肽合成酶表达显著升高。治疗结束后与模型组比较,一贯煎组Cu/Zn SOD、DJ-1、谷胱甘肽S-转移酶及醛酮还原酶7,A2表达均明显增高,谷胱甘肽合成酶表达显著降低。蛋白印迹法及免疫组织化学验证了Cu/Zn SOD、DJ-1在蛋白表达水平的差异,与蛋白质组学结果基本一致。 结论：抗氧化应激功能降低是CCl4致大鼠肝硬化的重要病理环节,提高抗氧化应激功能相关蛋白的表达可能是一贯煎治疗CCl4所致大鼠肝硬化的主要效应机制。     

类固醇激素依赖型溃疡性结肠炎缓解期IL-23表达的研究

目的 探讨IL-23在缓解期类固醇激素依赖型溃疡性结肠炎患者结肠组织中表达的病理意义.方法 采用Western blot分析及免疫组化SABC法检测15例缓解期激素依赖型溃疡性结肠炎患者炎症修复区结肠组织IL-23的蛋白表达情况,予统计学软件统计分析,并以30例缓解期的一般溃疡性结肠炎患者(15例SASP维持治疗,15例强的松维持治疗)炎症修复区结肠组织及10例正常结肠黏膜组织为对照组.结果 与正常对照组比较,SASP维持治疗及强的松维持治疗缓解期一般溃疡性结肠炎患者炎症修复区结肠组织IL-23的蛋白表达均轻度升高(P>0.05),而缓解期激素依赖型溃疡性结肠炎患者炎症修复区结肠组织IL-23的蛋白表达显著高于一般溃疡性结肠炎组(P<0.01).结论 IL-23的过度表达可能在溃疡性结肠炎类固醇激素依赖发病机制中起关键作用.     

外消旋聚丙交酯与人胚半月板细胞构建复合物的研究

目的: 研究外消旋聚丙交酯(PDLLA)作为半月板组织工程支架材料应用的可行性.方法: 采用胶原酶阶段消化法获取人胚半月板纤维软骨细胞,碱性成纤维细胞生长因子(Bfgf)作用于第3代细胞,并用MTT比色法得出最佳效应浓度,扩增后的细胞种植于多聚赖氨酸修饰前、后的PDLLA上,在光镜、荧光显微镜、扫描电镜下观察PDLLA的亲水性、细胞吸附性和细胞增殖情况.结果: Bfgf扩增人胚半月板细胞的最佳效应浓度为50 μg/L(P＜0.05);PDLLA亲水性及细胞吸附性欠佳,予多聚赖氨酸修饰后明显改善,细胞在PDLLA上生长良好,3周时已有大量细胞生长.结论: 50 μg/L 的Bfgf可用于体外大量扩增人胚半月板细胞;PDLLA经多聚赖氨酸修饰后可表现出良好的亲水性、细胞吸附性和体外生物相容性,可作为半月板组织工程细胞培养支架材料用.     

Effect of Qi-tonifying and Stasis-eliminating Therapy(益气活血法)on Expression of Vascular Endothelial Growth Factor and Its Receptors FIt-l,FIk-1 in the Brain of Intracerebral Hemorrhagic Rats

Objective:To investigate the effects and mechanism of qi-tonifying and stasis- eliminating(QTSE)therapy on the expression of vascular endothelial growth factor(VEGF)and its receptors Fit-1 and FIk-1 in the brains of intracerebral hemorrhagic(model)rats.Methods:One hundred and eighty Sprague-Dawley rats were randomly divided into six groups:the normal group (n=5),the sham-operative(SO)group(n=35),the model group(n=35),the QTSE group(n=35),the QT group(n=35)and the SE group(n=35).All the rats except those in the normal group and SO group were established into an intracerebral hemorrhage(ICH)model by intracerebral injection of collagenase typeⅦand the latter three were orally administered with Buyang Huanwu Decoction (补阳还五汤,a classical recipe for QTSE)or with some of its components for qi-tonification and for stasis-elimination,respectively.To the other three groups,normal saline solutions were given instead.Behavioral tests were carried out in the animals randomly chosen from each group on days 1, 2,4,7,14,21 and 28 after modeling.The expressions of VEGF,FIk-1 and Fit-1 were determined by immunohistochemistry and the number of vascular segments with positive expression in the injured brain area of the rats was calculated.Results:From day 7 onwards,the asymmetric forelimb use rate in the QTSE group recovered more significantly than that in the other model groups.In the model group,the expressions of VEGF,FIk-1 and Fit-1 appeared on day 1 and reached a peak on day 21, then weakened gradually.In the QTSE group,as compared with the other model groups,a higher level of VEGF expression was shown from day 7(P<0.01)and a higher level of Fit-1 expression was shown from the 7th day to the 21st day(P<0.01).Conclusion:QTSE therapy can up-regulate the expressions of VEGF and its receptors(FIk-1 and Fit-1)and improve the recovery of kinetic function in the ICH rats,which may be correlated with its action in modulating vascular regeneration to promote the reconstruction of microvascular networks in the damaged areas.     

健胃愈疡颗粒对乙酸性胃溃疡复发大鼠作用的蛋白质组学研究

目的分析健胃愈疡颗粒（JWYY）对乙酸性胃溃疡复发大鼠蛋白质表达谱的影响,寻找JWYY抗胃溃疡复发作用的相关蛋白。方法采用二维凝胶电泳（2-DE）分离JWYY处理组和JWYY未处理组大鼠胃组织的总蛋白,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质量指纹图,NCBInr及SWISS-PROT数据库搜索鉴定蛋白质。结果所获2-DE图谱分辨率高、重复性好,质谱分析共鉴定了12个差异蛋白质点,其中JWYY处理组有8个蛋白质点表达上调,4个蛋白质点表达下调,大多数蛋白与溃疡复发的形成、生长、凋亡及免疫等环节相关。结论JWYY抗胃溃疡复发作用可能与多种蛋白直接或间接相关,这些蛋白质的鉴定及进一步研究有助于抗溃疡复发药物新型靶标的发现。     

健胃愈疡颗粒对幽门螺杆菌阳性消化性溃疡患者的抗炎作用

目的从炎症角度探讨健胃愈疡颗粒对幽门螺杆菌(Hp)阳性消化性溃疡(PU)患者的作用及其机制。方法46例Hp阳性PU患者随机分为中药组和西药对照组,分别给予健胃愈疡颗粒和西药常规治疗,治疗前后采用HE染色观察胃窦炎症程度、免疫组化法检测胃黏膜核因子κB(NF-κB)、β-防御素2蛋白表达。结果健胃愈疡颗粒能显著减轻Hp阳性PU患者胃窦慢性炎症和活动性程度(P<0.01或P<0.05),抑制NF-κB的活化,下调NF-κB、β-防御素2的上增性表达(P<0.01或P<0.05)。结论健胃愈疡颗粒可能通过抑制NF-κB的激活,下调β-防御素2的过度表达,在促进PU愈合过程中发挥抗炎作用。     

健胃愈疡颗粒对胃溃疡复发大鼠胃组织核因子-κBmRNA及其蛋白表达的影响

目的 观察胃溃疡复发大鼠胃组织的炎症反应、核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）mRNA及其蛋白表达和健胃愈疡颗粒的干预作用。方法 先后复制大鼠乙酸性胃溃疡及其复发模型,设假手术组、模型组、奥美拉唑组、健胃愈疡组。观察各组大鼠胃组织慢性炎症细胞和中性粒细胞计数、NF-κB mRNA及其蛋白表达的情况。结果 灌胃16天和92天时,模型组大鼠胃组织慢性炎症细胞和中性粒细胞计数、NF-κB mRNA及其蛋白表达均较假手术组显著增加（P〈0．01）,健胃愈疡组慢性炎症细胞和中性粒细胞计数、NF-κB mRNA及其蛋白表达均显著低于模型组（P〈0.05或P〈0．01）,与奥美拉唑组比较差异无显著性。NF-κB mRNA及其蛋白表达均分别与慢性炎症细胞和中性粒细胞计数密切相关（P〈0．01）。结论 NF-κB可能在调节大鼠乙酸性胃溃疡愈合及其复发的炎症反应中发挥重要作用。健胃愈疡颗粒可能通过抑制胃组织NF-κB的活化和表达抑制炎症反应,这可能是其抗溃疡复发机制之一。     

老年人五脏虚证基本证型主要症状Delphi法专家调查

目的?通过专家调查，探讨老年人五脏虚证基本证型具有特征性、代表性的主要症状。方法?基于文献总结及专家意见调查，制订“老年人五脏虚证证候框架”调查表。运用Delphi法遴选31名专家对老年人五脏虚证基本证型主要症状开展3轮函询调查。专家按照0~10分对量表每个条目的重要程度打分。通过均数及其变异系数评价专家意见集中程度，并通过协调系数对专家意见协调程度进行评价。结果?三轮调查的专家积极系数分别为83.9%、96.2%、100.0%，各条目必要性的协调系数分别为0.308、0.469、0.631（P<0.001），平均变异系数分别为0.197、0.162、0.090；第三轮调查的专家权威系数9.35；专家对老年人五脏虚证基本证型主要症状的集中意见分别为心气虚证5项、心阳虚证7项、心血虚证8项、心阴虚证6项、肺气虚证8项、肺阴虚证7项、脾气虚证6项、脾阳虚证7项、肝血虚证4项、肝阴虚证8项、肾阴虚证7项、肾阳虚证9项、肾气虚证5项、肾精虚证9项。结论?老年人五脏虚证包含14种基本证型，47种具有特征性、代表性的症状。     

全国名中医蔡淦教授治疗消化性溃疡经验

介绍蔡淦教授治疗消化性溃疡的经验。认为消化性溃疡属于内疡范畴,可用健脾益气、托毒生肌法治疗;其病程迁延日久,多呈寒热失调,虚实夹杂之征,治则上应虚实并治,遣方用药应以平为期;强调辨证辨病相结合,中医治疗以辨证论治为基础,结合西医辨病,临床上灵活运用治病专药;注重变症丛生,随症治之,务重其标;同时三因制宜,精准用药;重视中西医结合治疗,具有较好的远期疗效;此外饮食调养至关重要,应倍重食养,防变防复。并举验案1则。     

建立并优化胃溃疡复发大鼠蛋白质组分析的双向凝胶电泳技术

目的:建立并优化白细胞介素1β致大鼠乙酸性胃溃疡复发模型大鼠蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术。方法:实验于2005-04/2006-02在中南大学湘雅医院中西医结合研究所实验室、卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室完成。①选用成年SD大鼠60只,雌雄不拘。按随机数字表法分为2组:对照组、模型组,每组30只。采用乙酸复制胃溃疡动物模型及白细胞介素1β复制胃溃疡复发动物模型,正常对照组施予相同的饮食方案。②两组大鼠于复发模型建立成功后24h禁食,48h后处死,收集胃组织,在组织样品离体后立即以冰盐水冲洗以去除组织液和血细胞,并于30min内入液氮速冻,采用化学和高速机械法进行胃组织裂解。采用AmershamBiosciences公司专门针对蛋白质组学研究中的蛋白质抽提方法设计的2DQuantKit定量试剂盒,从而实现准确的蛋白质定量。为了尽量可能多分离蛋白质,选择pH值范围(pH3￣10)的固相线性24cm干胶条和125g/L的均匀SDS聚丙烯酰胺凝胶,采用初始电压为2.5W/胶电泳30min,然后以17W/胶恒功率电泳,直至溴酚蓝指示线到达凝胶底边处停止电泳。结果:以固相pH梯度-IPG胶条(pH3～10)进行第一向等电聚焦,以SDS均一胶(12.5%)的垂直电泳为第二向,成功地得到了两组大鼠胃组织斑点分布均匀、数目较多的双向凝胶电泳图谱。结论:通过对蛋白质双向凝胶电泳的建立及技术的优化,获得了适合于研究胃溃疡复发蛋白质组差异表达。