重庆单中心2009至2011年急性呼吸道感染住院患儿2种甲型流感病毒检出情况及临床特征分析

目的了解重庆地区急性呼吸道感染住院患儿新型甲型H1N1流感病毒（S-OIVs）与季节性甲型流感病毒（IVA）检出情况及临床特征。方法收集2009年6月至2011年5月重庆医科大学附属儿童医院呼吸科急性呼吸道感染住院患儿鼻咽抽吸物（NPA）,采用荧光定量PCR技术检测S-OIVs和季节性IVA基因组RNA,分析流行特点和临床特征,并采用Logistic回归分析急性呼吸道感染进展为重症肺炎的危险因素。 结果共收集NPA标本1 074份,经PCR检测IVA阳性105份(9.8%),其中1.4%（15/1 074）为S-OIVs,8.4%（90/1 074）为季节性IVA。2种病毒阳性病例男女比例、年龄分布和平均住院天数差异均无统计学意义（P>0.05）。①S-OIVs在2009年夏季高发(11/15,73.3%),季节性IVA在2009年夏季(26/95,27.4%)、2010年夏季(22/95,23.2%)和2011年春季(25/95,26.3%)检出率明显高于其他各季节。②2种病毒阳性患儿临床症状、外周血WBC计数、CRP水平相当,S-OIVs阳性患儿重症毛细支气管炎1例（6.7%）,季节性IVA阳性患儿重症肺炎14例（15.6％）。③15份S-OIVs阳性标本中,单纯S-OIVs感染3份,合并其他病毒感染9份,痰培养阳性7份。90份季节性IVA阳性标本中,单纯季节性IVA感染21份,合并其他病毒感染42份,痰培养阳性10份。④心脏基础疾病（OR=13.60）、发生喘息（OR=6.82）和合并腺病毒感染（OR=6.21）为季节性IVA感染患儿进展为重症肺炎的危险因素。 结论重庆单中心急性呼吸道感染住院患儿S-OIVs检出率低于季节性IVA。S-OIVs和季节性IVA感染患儿均以下呼吸道感染为主。心脏基础疾病、喘息症状和合并腺病毒感染有可能是季节性IVA感染患儿进展为重症肺炎的危险因素。     

静注丙种球蛋白治疗新生儿重症细菌感染抗体水平变化及用法初探

能增加新生儿患败血症风险的两个最重要的免疫缺陷是抗体缺陷和吞噬细胞数量及质量的异常。国外报道丙种球蛋白效果好。本文用国产静脉丙种球蛋白(Intravenous immunoglobulin IVIG)配合抗生素治疗重症细菌感染新生儿,观察血清抗体水平的变化并探讨其用法。     

地塞米松和甲基泼尼松龙对哮喘儿童外周血Th1/Th2类细胞因子平衡的影响

目的：观察支气管哮喘儿童外周血单个核细胞（PBMC）中CD4^4T细胞中两个功能性亚群（Th1/Th2)的功能状态及地塞米松和甲基泼尼松龙对其的影响。方法：15例哮喘及14名健康儿童，取静脉血，密度梯度离心 法分离PBMC，分别用10^-8mol/L地塞米松和甲基泼尼松龙体外干预培养48h后，用ELISA法测定培养上清中的干扰素－γ（IFN－γ）、白细胞介素－4（IL－4）和IL－10的浓度。结果：地塞米松和甲基泼尼松龙均可明显抑制哮喘儿童PBMC分泌-γ(P值分别为0．004和0．002）和IL－4（P值分别为0．002和0．001）；若以IFN－γ／IL－4表示Th1/Th2间的平衡，则甲基泼尼松龙（P＜0．05）可恢复Th1/Th2平衡；地塞米松和甲基泌尼松龙都不曩IL－10的分泌。结论：地塞米松和甲基泼尼松龙均可抑制IFN－γ和IL－4的产生，但甲基泼尼松龙抑制作用更强，从而可恢复哮喘儿童体内Th1/Th2平衡。     

急性期过敏性紫癜患儿外周血单个核细胞凋亡观察

目的　了解急性期过敏性紫癜（ＨＳＰ）患儿是否存在淋巴细胞凋亡延迟。方法　用荧光染色法及流式细胞技术（ＦＡＣＳ）检测经抗ＣＤ３ 单克隆抗体刺激培养的外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）产生凋亡细胞的百分率。结果　与正常儿童比较，急性期ＨＳＰ患儿ＰＢＭＣ的凋亡细胞百分率显著下降，存在淋巴细胞凋亡延迟现象。结论　推测ＨＳＰ患儿的淋巴细胞凋亡延迟可能为ＨＳＰ的发病机制之一。     

新生儿感染IgG亚类探讨

本文观察18例新生儿败血症及11例新生儿皮下坏疽IgG亚类变化,两组患婴的四种血清IgG亚类均低于对照组(p<0.01或<0.05)。体外用pwm诱导B细胞产生lg可见两组患婴除lgM如lgG_3,外,IgG_1、lgG_2及lgG_4,明显低于对照组(p<0.01或p<0.05)。患婴的PBMC对T细胞丝裂原PHA的增殖反应减弱,CD_4/CD_8比值下降。本文结果表明新生儿感染时T细胞功能系乱可致B细胞抗体生成能力下降。     

环孢菌素A对儿童过敏性紫癜T细胞功能状态的干预作用

目的观察环孢菌素A(CsA)对儿童过敏性紫癜(HSP)T细胞功能状态的干预作用.方法采用流式细胞技术及ELISA法检测PBMC细胞膜上CD40L表达及PBMC培养上清中细胞因子水平.结果CsA在体外具有纠正HSP患儿PBMC异常表达CD40L的作用(P＜0.05),并抑制TH2类细胞因子(IL-4、IL-5、IL6)的过度产生,使TH1类细胞因子(IL-2、IFN-γ)的释放进一步减少(P＜0.05).结论CsA具有显著抑制HSP患儿T细胞功能作用,尤其是对T细胞亚群(TH1)细胞的功能抑制更强.     

大鼠发育早期接触变应原对Th1/Th2亚群功能及哮喘发生的影响

目的探讨妊娠期母鼠及其子代接触尘螨点刺液（Derp）对发育后期个体Th1/Th2平衡及哮喘发生的影响。方法Wistar大鼠根据母体妊娠期及新生早期是否接触Derp随机分为对照组、母Derp-仔Derp-组（母鼠和其子代均未接触Derp）、母Derp＋仔Derp＋组（母鼠和其子代均接触Derp）和母Derp＋仔Derp-组（母鼠接触Derp,其子代未接触Derp）,分别皮下注射Derp或生理盐水,30d龄时除对照组外,其余3组以卵白蛋白（OVA）为变应原致敏并雾化吸入,诱发哮喘发生。取血浆检测OVA特异性IgE抗体、收集外周血单个核细胞（PBMC）用ELISA法检测培养上清中细胞因子IL-4和IFN-γ水平,行支气管肺泡灌洗记录支气管肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸性粒细胞的计数,留取肺组织行病理学检查。结果母Derp＋仔Derp＋组在哮喘建模后PBMC培养上清中IFN-γ水平显著低于母Derp-仔Derp-组,IL-4水平显著升高,IL-4/IFN-γ比值升高,OVA特异性IgE、BALF中嗜酸性粒细胞计数显著高于母Derp-仔Derp-组;母Derp＋仔Derp-组与母Derp-仔Derp-组IL-4和IFN-γ水平差异均无统计学意义,OVA特异性IgE水平虽有增高,但差异不具统计学意义,BALF中嗜酸性粒细胞计数差异无统计学意义。母Derp＋仔Derp＋组Th2优势显著高于母Derp＋仔Derp-组。结论胎鼠对于Derp跨胎盘的致敏作用可通过母体妊娠期间的免疫来完成,这一过程会根本上导致Th2优势免疫的发生,增加了变态反应性疾病的危险性。     

维生素A缺乏对大鼠肾脏ABCA1介导的脂质外流途径的影响

目的 探讨维生素A缺乏(vitaminA deficiency,VAD)大鼠模型肾脏脂质代谢状况及相关分子机制.方法 从孕期开始,给予Wistar大鼠正常饮食(正常对照组,维生素A含量为4000 IU/kg的饲料), VAD饮食(VAD组,维生素A含量为400 IU/kg的饲料),持续至8周后VAD组继续补充维生素A (VAS组,维生素A含量为6500 IU/kg的饲料) 15 d,每组6只.免疫组化分析肾脏载脂蛋白B100 (Apo-B100)、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(adenosine triphosphate binding cassette A1,ABCA1)表达,Real-time PCR技术检测肾脏ABCA1、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、肝X受体α(LXRα)、视黄醇X受体α/β (RXRα/β) mRNA水平. 结果免疫组化分析,第8周VAD组肾脏Apo-B100水平(14.27±0.05)明显高于正常对照组(8.25±0.49)(P<0.05);与第8周正常对照组(37.44±0.46)比较,VAD组肾脏ABCA1表达(24.53±0.86)降低(P<0.05).Real-time PCR检测,与正常组比较,第8周VAD组肾脏ABCA1表达上调,VAD组RXRα/β、LXRα mRNA水平降低,差异有统计学意义(P<0.05), 而PPARα mRNA水平无明显改变(P>0.05);以上改变随维生素A补充即恢复至正常水平.结论 VAD可致PPARα/RXRs-LXRα/RXRs-ABCA1介导的脂质外流途径受损而导致大鼠肾脏脂质沉积增多,但及时补充维生素A能有效使肾脏脂质代谢恢复正常.     

小鼠STAT4，STAT6基因shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

目的:构建并鉴定小鼠信号转导子和转录激活因子4(STAT4),信号转导子和转录激活因子6(STAT6)具有发夹结构小干扰RNA(shRNA)表达质粒.方法:根据STAT4和STAT6基因mRNA序列,在体外分别合成有小发夹结构的2条STAT4特异性寡核苷酸序列,2条STAT6特异性寡核苷酸序列,退火后与线性化pGenesil-3质粒连接,转化感受态细胞DH5α,扩增,纯化得到所需质粒.同时设计构建分别针对小鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的干扰质粒作为阳性对照,不具有基因同源性的非特异性基因的质粒作为阴性对照序列.通过酶切后琼脂糖凝胶电泳和基因测鉴定纯化质粒分子量及插入片段的序列.结果:经限制性酶切和测序鉴定分析证实基因插入正确,与设计的序列完全相符.结论:成功构建了针对小鼠STAT4,STAT6基因的发夹结构小干扰RNA表达载体.为今后利用基因沉默技术从转录后水平抑制STAT4,STAT6的研究奠定基础.     

反义硫代修饰寡核苷酸体外抗甲型流感病毒感染的效应研究

目的 在感染甲型流感病毒(influenza A virus,IFAV)的人气道上皮细胞(9HTEO)中观察与IFAV PB1、M2、NS、PB2、HA基因瓦补的反义硫代修饰寡核苷酸(ASODN)的抗病毒活性.方法 细胞外体系观察没计的ASODN效率,筛选对IFAV有效的3个ASODN进行9HTEO的抗病毒效应.倒置显微镜下观察IFAV的敛细胞病变作用和ASODN的细胞保护作用.MTT方法测细胞存活率,空斑试验、RT-PCR、Westem blot、免疫荧光检测ASODN特异性抗病毒效应,MTT法检测ASODN对细胞的保护作用.结果 IFAV感染复数(MOI)在0.1以上时,培养5 d后IFAV感染的9HTEO细胞全部死亡.设计的ASODN能够提高感染细胞的存活率,且呈量效依赖关系.空斑试验、RT-PCR、Western blot、免疫荧光试验证实在细胞水平、基因转录水平、蛋白水平针对IFAV PB1、M2、NS基因mRNA转录起始点保守序列没计的ASODN具有特异性抗IFAV作用.结论 ASODN具有较明显的抗病毒活性,为进一步研究和开发新型抗IFAV药物提供了实验依据.为高致病性禽流感(H5N1)的基因治疗提供了新的思路和理论依据.