创伤弧菌脓毒症大鼠肝组织CD14和促/抗炎细胞因子基因表达及抗生素干预研究

目的 探讨创伤弧菌脓毒症大鼠肝组织内毒素受体CD14和促/抗炎细胞因子(TNF-α/IL-10)的基因表达及抗萧药物头孢哌酮钠联用乳酸左旋氧氟沙星的干预效应.方法 注射创伤弧菌构建创伤弧菌脓毒症模型及药物干预模型,RT-PCR检测大鼠肝组织CD14、TNF-α和IL-10的基因表达水平.结果 与正常对照组(NC组)相比,创伤弧菌脓毒症组(VV组)感染细菌2、6、9、12、16 h的CD14mRNA和TNF-α mRNA表达量均明显升高(P<0.05),IL-10 mRNA表达昔在感染后9、12、16 h也明显升高(P<0.05).创伤弧菌脓毒症联用抗生素干预组(AA组)CD14 mRNA表达在感染后9 h,TNF-αmRNA表达在感染后9、12 h,IL-10 mRNA表达在感染后9、12、16 h仍明显高于NC组(P<0.05).与相同时间点的VV组相比,从组感染后9、12、16 h的CD14 mRNA表达量,16 h的TNF-α mRNA和IL-10mRNA表达最均明显降低(P<0.05).结论 创伤弧菌脓毒症大鼠肝组织CD14 mRNA表达在脓毒症早期即达高峰,脓毒症过程中表现为持续增高,脓毒症早期肝组织TNF-α mRNA明显升高,脓毒症中后期肝组织IL-10 mRNA才逐渐增多.及早使用头孢哌酮钠和乳酸左氧氟沙星可明显减低创伤弧菌脓毒症大鼠肝组织CD14 mRNA、TNF-α mRNA和IL-10 mRNA表达水平.头孢哌酮钠联用乳酸左氧氟沙星可显著减少创伤弧菌脓毒症肝组织的内毒素受体的表达,有利于机体致炎/抗炎平衡恢复.     

抗菌药物对酒精性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症肝组织Toll样受体及促炎性细胞因子的影响

目的 探讨抗菌药物对酒精性肝病大鼠创伤弧菌(VV)所致脓毒症肝组织Toll样受体(TLR)和促炎性细胞因子的影响.方法 将制威酒精性肝病模型的66只SD大鼠随机分为酒精性肝病对照组(A组)、酒精性肝病抗菌药物对照组(AA组)、酒精性肝病VV脓毒症模型组(AV组,共4组)和酒精性肝病VV脓毒症抗菌药物治疗模型组(AVA组,共5组),并设正常对照组(N组),同时采用RT-PCR技术检测各组大鼠不同时点肝组织内TLR4、髓样分化蛋白-2(MD-2)、IL-1β和IL-6 mRNA表达及其动态变化.结果 AV组大鼠在染菌后各时点肝组织TLR4、MD-2、IL-1β和IL-6mRNA表达水平均较N组和A组升高(均P＜0.05或0.01),AVA组肝组织TLR4、MD-2、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平均较同时点AV组降低(均P＜0.05或0.01).结论 酒精性肝病大鼠VV脓毒症肝组织TLR4、MD-2、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平均随脓毒症病情进展而增高,而应用足量抗菌药物则可通过显著降低肝组织TLR4、MD-2、IL-1β和IL-6mRNA的表达水平,从而对酒精性肝病W脓毒症大鼠发挥明显的治疗作用.     

创伤弧菌脓毒症的临床和实验研究

创伤弧菌脓毒症是由创伤弧菌引起的致死性疾病,主要见于慢性肝病患者。创伤弧菌是一种嗜盐的革兰阴性条件致病菌,自然存活于热带和亚热带海水中,可寄生于滤食海生动物体内。慢性肝病患者常因接触海水或生食带菌的贝壳类海鲜而感染致病,该病起病急,进展迅速,多于24-48h内进展为感染性休克和多脏器功能不全,     

二巯丙磺钠对急性百草枯中毒大鼠肺损伤的保护作用

百草枯(PQ)急性中毒是临床上常见的农药中毒之一,可引起"百草枯肺",早期可表现为急性肺损伤或急性呼吸窘迫综合征,病死率高达40%～80%.研究表明,过度炎症反应是导致急性PQ中毒肺损伤主要机制之一,也是卣草枯急性中毒快速死亡的主要原因[1].     

镇静药物急性中毒86例分析

目的:研究我院急诊科收治的镇静药急性中毒患者的流行病学特点,探讨其预防和治疗对策。方法:采用回顾性研究方法,对1997年5月至2007年2月本院急救中心接诊的86例镇静药急性中毒患者的基本情况、诊疗经过、预后等项目进行统计分析。结果:86例镇静药急性中毒患者,男女比例为1∶1.46。中毒年龄主要集中于20～39岁年龄段(占39.5%),其中女性多于男性(女59.3%、男40.7%)(P﹤0.05)。就诊时间分布特点呈无规律性波动,12月、1月、2月高发,占全年的38.4%。中毒患者职业排在前2位的是待业人员、农民,文化程度以小学最多。自杀者占急性中毒的81.4%。药物进入人体途径以消化道为主。中毒药物前3位依次是安定、氯氮平、舒乐安定。病情重度40例(46.5%),中度24例(27.9%)。治疗花费2000元以内35例(40.7%),5000元以上24例(27.9%)。81例(94.2%)治愈出院,5例(5.8%)放弃治疗。行药物检测的20例(23.3%)。洗胃62例(72.1%),所有病人均予补液,45例(52.3%)使用利尿剂,39例(45.3%)予抗感染治疗,55例(64.0%)予醒脑治疗,使用解毒剂26例(30.2%),血液透析15例(17.4%),机械通气11例(12.8%)。结论:就诊的镇静药急性中毒病人中,女性多于男性,年龄以20～39岁者居多,中毒病人职业中待业、务农分别居第1、2位,文化程度以小学居多,患者中毒时间在12月、1月、2月相对呈一高峰,患者病情以中、重度为主,经过适当、及时的治疗,大多数病人都能抢救成功。     

创伤弧菌脓毒症大鼠脑组织转位蛋白的表达及抗菌药物的干预

目的 探讨创伤弧菌脓毒症大鼠脑组织转位蛋白(TSPO)基因和蛋白表达及促/抗炎因子的蛋白表达,并观察抗菌药物头孢哌酮钠联合左氧氟沙星的干预效应.方法 SD大鼠100只,随机(随机数字法)分为健康对照组(A组,n=10)、创伤弧菌脓毒症组(B组,n=40)和抗菌药物干预组(C组,n=40),抗菌药物对照组(D组,n=10).大鼠左后肢皮下注射创伤弧菌(6×108 cfu/ml,0.1 ml/100 g)制作脓毒症大鼠模型,腹腔注射头孢派酮钠180 mg/kg和左氧氟沙星18 mg/kg进行干预,以RT-PCR、Western blotting、免疫组化、ELISA等方法观察大鼠染菌后6、12、24、48 h脑组织TSPO表达、促/抗炎因子水平及电镜的特点.结果 与A组比较,B组大鼠脑组织TSPO表达水平6h即明显增高(P＜0.05),24 h达峰值.C组大鼠12、24、48 h脑组织TSPO表达水平均明显低于相同时间点B组大鼠(P＜0.05).B组大鼠脑组织各时间点TNF-α、IL-6、IL-10水平均比A组明显升高(P＜0.05),其中TNF-α在6h达峰值,IL-6 12 h达峰值,IL-10则48 h达峰值.与B组相同时间点比较,C组大鼠6、12、24 h时点脑组织TNF-α水平明显下降(P＜0.05),12、24、48 h时间点脑组织IL-6水平亦明显下调(P＜0.05),而IL-10水平在各时间点均较B组明显升高(P＜0.05).免疫组化法观察B组大鼠脑组织TSPO蛋白棕黄色颗粒密集较多,C组棕黄色颗粒较B组减少;电镜下B组大鼠脑组织神经元细胞核溶解消失,细胞及细胞器肿胀明显,C组大鼠脑组织神经元细胞核部分溶解,形态尚存,细胞及细胞器水肿减轻.结论 创伤弧菌脓毒症大鼠脑组织TSPO的表达随着脑组织炎症、病理进展逐渐增高,能敏感反映脑损伤的变化.使用头孢哌酮钠和左氧氟沙星能有效减轻脑组织炎症损伤,降低TSPO的水平.     

血液灌流治疗肝硬化患者阿维菌素急性中毒一例

病例 患者男,48岁,农民,因"口服阿维菌素,意识不清5.5 h"人院.患者入院前6h口服阿维菌素(浓度1.6％)约30 ml,0.5 h后意识不清,伴肢体抽搐,至当地医院洗胃后病情无好转,遂转至我院.患者既往有乙型肝炎病史18年,乙型肝炎后肝硬化病史5年,5年前曾行经颈静脉肝内门体分流术.5年来多次因"肝性脑病"住院治疗.入院查体:体温36.8℃,血压90/50 mm Hg,呼吸26次/min,脉搏122次/min,中度昏迷,瞳孔直径3.5 mm,双侧对称,对光反射迟钝,双肺呼吸音粗,未闻及干湿罗音,心率122次/min,心律齐,各瓣膜区未闻及杂音,腹平软,肝肋下未及,脾肋下3 cm,浅反射及病理征未引出.辅助检查:血糖3.8 mmol/L,血钙2.09mmol/L,血钾4.43 mmol/L,钠147 mmol/L,氯104 mmol/L,肌酸激酶33 U/L,肌酸激酶同工酶23 U/L,肌钙蛋白0.79 μg/L,血氨172 μmol/L.凝血酶原时间19.4s,活化部分凝血酶原时间43.9 s,国际标准化比值1.62,D-二聚体2.16 mg/L.血常规:白细胞15.14×109,中性粒细胞0.845,血红蛋白126 g/L,血小板72×109.血气分析:pH 7.201,氧分压:110.2 mm Hg,二氧化碳分压:17.1 mm Hg,碱剩余-18.8 mmol/L,碳酸氢根6.7mmol/L.肝功能:丙氨酸转氨酶活力35 U/L,天冬氨酸转氨酶活力57 U/L;总蛋白65.0g/L,白蛋白32.6g/L,总胆红素28 μmol/L,直接胆红素15 μmol/L.肾功能:尿素4.9mmol/L,肌酐80 μmol/L,尿酸348.μmol/L.心电图示,窦性心动过速,ST-T改变.CT示,右肺上叶及两肺下叶散在性炎症.入院诊断:急性阿维菌素中毒,乙型肝炎后肝硬化失代偿期,肝性脑病,肺部感染.     

双黄连注射液对大鼠急性乌头碱中毒脑损伤的干预研究

目的探讨双黄连注射液对大鼠急性乌头碱中毒脑损伤的干预作用。方法将200只SD大鼠分为空白对照组、双黄连对照组、乌头碱中毒组,双黄连干预A组,双黄连干预B组,每组40只。乌头碱中毒组及双黄连干预组以20μg/kg乌头碱一次性尾静脉注射染毒,注射后2-3 min内给双黄连干预组注射双黄连（A组30 mg/kg、B组60 mg/kg）;空白对照组及双黄连对照组按体质量予尾静脉注射等量生理盐水（2 ml/kg）后,给双黄连对照组注射双黄连（60 mg/kg）。给药后1、6、12、24 h用高效液相法测定脑组织谷氨酸（Glu）、γ氨基丁酸（GABA）,采用TUNEL法检测神经元凋亡情况。结果与空白对照组相比,乌头碱中毒组Glu含量、神经元凋亡数目显著升高,大鼠脑皮质GABA含量在染毒后1 h明显下降（P均均〈0.05）。与乌头碱中毒组相比,双黄连干预A、B组GABA含量明显升高,Glu含量明显降低,脑皮质凋亡细胞数目显著降低（P〈0.05）。各组相比,乌头碱中毒组在注射乌头碱后12 h时脑额叶皮质光病理学损伤最为明显,双黄连干预A、B组脑皮质损伤较乌头碱中毒组有所改善。结论双黄连可显著抑制兴奋性递质Glu含量提高GABA含量,拮抗神经细胞凋亡,从而起到一定程度的拮抗急性乌头碱所致脑损害。     

脓毒症大鼠肺高迁移率族蛋白B1的表达及意义

目的 观察创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织HMGB1表达和肺损伤的动态变化,并探讨HMGB1在创伤弧菌脓毒症肺损伤中作用.方法 温州医学院生命科学院实验室,清洁级SD大鼠60只,随机分为正常组(A组,n=10)和创伤弧菌脓毒症组(B组,n=50),采用大鼠左下肢皮下注射创伤弧菌悬液(浓度为6×108cfu/mL,剂量为0.1 mL/100 g)制作大鼠创伤弧菌脓毒症模型),B组于染菌后1、6、12、24、48 h后活杀(各时间点n=10),采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)分别检测大鼠肺组织HMGB1基因与蛋白的表达,检测肺含水分数和光镜观察肺组织病理变化,数据采用单因素方差分析,并用LSD法进行组间两两比较,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 B组染菌后12 h(1.161±0.358,P=0.013)、24 h(1.679±0.235,P=0.000)及48 h(1.258±0.274,P=0.004)大鼠肺组织HMGB1 mRNA表达量较A组(0.652±0.177)明显增高(P＜0.05),并于24 h达到高峰;与A组(0.594±0.190)比较,B组HMGB1蛋白表达量于感染后6 h(1.408±0.567,P=0.026)(P＜0.05)逐渐增加,24 h达到高峰(2.415±1.064,P=0.000);与A组(0.699±0.054)比较,B组大鼠肺含水分数于感染后6 h(0.759±0.030,P=0.001)、12 h(0.767±0.023,P=0.000)、24 h(0.771±0.043,P=0.000)和48 h(0.789±0.137,P=0.000)明显增大(P＜0.05),呈逐渐递增趋势;感染后12 h,大鼠肺内血管明显充血,间质水肿并伴炎性浸润,且逐渐加重,到48 h肺泡腔塌陷明显,肺泡间隔分界不清.结论 大鼠创伤弧菌脓毒症可导致肺脏损伤,HMGB1的表达增加可能是创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织损伤的机制之一.

Abstract：

Objective To observe the dynamic changes of high mobility group protein B1 ( HMGB1 )expression in the lung of rats with Vibrio vulnificus sepsis so as to unravel the role of HMGB1 in lung injury.Methods Sixty rats of clean grade were randomly divided into normal control group ( A group, n = 10) and Vibrio vulnificus sepsis group (B group, n =50). Sepsis model was made in rats with subcutaneous injection of Vibrio vulnificus with concentration of 6 × 108 cfu/ml in dose of 0. 1 ml/100 g into left lower limb.The rats of group B were sacrificed 1 h, 6 h, 12 h, 24 h and 48 h after infection for taking lung tissues to detect the water content of lung and to observe the histopathological changes in lung under light microscope.The expression of HMGB1 mRNA and the level of HMGB1 protein in the lungs were detected by RT-PCR and Western blot, respectively. Data were analysed with ANOVA and LSD method for comparison between groups, and P ＜0.05 was considered statistically significant. Results Compared with the group A (0.652±0. 177), the expressions of HMGB1 mRNA in lung of rats of group B were significantly higher in 12 hours (1. 161 ±0.358, P=0.013), 24 hours (1.679 ±0.235, P =0.000) and 48 hours (1.258 ±0.274, P=0.004) and reached the peak in 24 h. Compared with group A (0.594 ±0. 190), the level of HMGB1 protein in rats of group B 6 h after infection ( 1. 408 ± 0. 567, P = 0. 026) was significantly increased (P＜0.05), and it reached peak in 24 h (2.415 ± 1.064, P =0.000) after infection. Compared with group A (0.699 ± 0.054), the lung water contents in rats of group B were significantly increased in 6 h (0.759±0.030, P=0.001), in 12 h (0.767 ±0.023, P =0.000), in 24 h (0.771 ±0.043, P=0.000) and in 48 h (0.789 ±0.137, P=0.000) after infection. Compared with group A, the pathological changes in the lung of rats in group B showed clearly marked pulmonary vascular congestion, interstitial edema and inflammatory cell infiltration, and those changes became more and more serious until alveolar sacs entirely collapsed and the boundaries of the alveolar septa could not be clearly identified in 48 h. Conclusions Vibrio vulnificus sepsis leads to the lung injury of infected rats, and the increase in the expression of HMGB1 mRNA in lung might be one of the mechanisms of lung injury in rats with Vibrio vulnificus sepsis.