丹参酮对肥厚心肌L-型钙电流的影响

目的心肌肥厚是导致心力衰竭、心律失常和猝死的高危因素.丹参酮已被证实能够有效地拮抗心肌肥厚的发生,但是对于其能否改变肥厚心肌上存在的电生理异常尚不清楚.方法本实验拟通过膜片钳和胞内钙测定技术,观察比较丹参酮和卡托普利对"一肾一夹"手术导致的肥厚心肌细胞膜上动作电位时间、L-型钙通道电流和胞内钙离子浓度的影响,来阐明丹参酮预防心脏肥厚发生心律失常可能的电生理基础.结果丹参酮可以显著的缩短肥厚心肌细胞中存在的动作电位时间延长(P＜0.001)、降低膜电容和ICa,L峰值幅度(P＜0.001),但不影响ICa,L密度,并能够显著减少胞内钙离子浓度.结论丹参酮能够在抗心肌肥厚的同时通过减少钙内流、缩短动作电位时间,起到预防心律失常的作用.     

丹参酮Ⅱ_A对血管紧张素Ⅱ所致主动脉内皮细胞游离钙离子及产生一氧化氮的影响

目的通过观察猪主动脉内皮细胞在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下时,不同浓度和不同作用时间的丹参酮ⅡA(TSN)对血管内皮细胞分泌一氧化氮(NO)及其内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的影响、细胞内游离钙离子浓度的变化,探讨TSN对血管内皮细胞的保护作用。方法采用硝酸还原法、免疫组织化学法,首先分别检测不同浓度(10-8~10-6mol/L)和不同作用时间(1、6、24h)的AngⅡ对培养的猪主动脉内皮细胞产生NO及其eNOS蛋白质表达的影响;然后比较在10-6mol/L的AngⅡ作用的不同点(0h点为A组、6h点为B组)加入不同浓度(10、50mg/L)TSN,分别检测作用1、6、24h后内皮细胞的NO生成和eNOS的蛋白质表达变化。用激光共聚焦扫描显像系统检测内皮细胞内游离钙离子浓度([Ca2 ]i)水平的变化。结果(1)随着AngⅡ浓度的增加、作用时间的延长,内皮细胞NO的产生及eNOS的表达呈顺序下降(P<0·01),表现出剂量、时间依赖性的负性作用。(2)TSN可抑制AngⅡ对内皮细胞分泌NO及eNOS表达的负性作用(P<0·01),但尚不能恢复到空白对照组水平(P<0·05);此作用与TSN的浓度无明显关系(P>0·05)。在TSN作用1、6h,A组的抑制效应明显强于B组(P<0·05);随着作用时间延长至24h,两组间差异无显著性(P>0·05)。(3)AngⅡ可引起主动脉内皮细胞[Ca2 ]i显著升高(P<0·01),TSN可部分抑制AngⅡ诱导的内皮细胞[Ca2 ]i升高(P<0·05)。结论TSN可抑制AngⅡ对血管内皮细胞分泌NO以及细胞eNOS蛋白质表达的负性作用,可能通过多种途径对血管内皮细胞及其功能起到保护作用。     

丹参酮ⅡA对猪主动脉内皮细胞受血管紧张素Ⅱ作用时产生NO及eNOS基因表达的影响

目的 探讨丹参酮ⅡA对血管内皮细胞的保护作用。方法 采用硝酸还原酶法、逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）和免疫组织化学法，分别检测不同作用时间（1h、6h、24h）的血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）以及在AngⅡ作用的不同时间点（0h点为A组、6h点为B组）加入丹参酮ⅡA对培养的猪主动脉内皮细胞产生NO及其内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的蛋白和mRNA表达。结果 （1）随着AngⅡ作用时间的延长，血管内皮细胞NO的产生及eNOS的表达呈显著下降（P〈0．01），表现出时间依赖性的负性作用。（2）丹参酮ⅡA可抑制AngⅡ对内皮细胞分泌NO及eNOS基因表达的负性作用（P〈0．01）。（3）在丹参酮ⅡA作用1h、6h，A组的抑制效应明显强于B组（P〈0．05）；随着作用时间延长至24h，两组比较差异无显著性。结论 丹参酮ⅡA可抑制AngⅡ对血管内皮细胞分泌NO以及细胞eNOS基因表达的负性作用；     

丹参酮ⅡA对大鼠肥厚心肌NO产生及eNOS基因表达的影响

目的：研究丹参酮Ⅱ_A(TSN)对腹主动脉缩窄大鼠肥厚心肌一氧化氮合酶及蛋白激酶C的影响，探讨丹参酮Ⅱ_A逆转高血压左心室肥厚的分子生物学机制。方法：SD大鼠行腹主动脉缩窄术建立高血压左室心肌肥厚模型，术后4周将手术大鼠随机分为手术组、TSN低、高剂量组(10，20 mg·kg^-1·d^-1，腹腔注射)、缬沙坦组(10 mg·kg^-1·d^-1，灌胃)，每组8只；另有8只作为假手术组。用药8周后检测各组尾动脉压，取左心室组织检测左心室质量指数(LVMI)、心肌纤维直径(MFD)；硝酸还原法测定心肌组织NO的含量，逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Western blotting)分别检测eNOS的基因表达水平和蛋白激酶C(PKC)的活性。结果：①TSN低、高剂量组的血压仍显著高于假手术组和缬沙坦组(P<0.01)。②TSN低、高剂量组和缬沙坦组的LVMI，MFD虽然高于假手术组(P<0.05)，却显著低于手术组(P<0.01)。③ TSN低、高剂量组和缬沙坦组的NO含量以及eNOS蛋白、mRNA表达水平明显高于手术组(P<0.01)，TSN两组的eNOS上调超过缬沙坦组(P<0.05)。④ 手术组的PKC蛋白水平显著升高(P<0.01)，TSN低、高剂量组PKC水平明显低于缬沙坦组(P<0.05)。结论：丹参酮Ⅱ_A对心肌肥厚的逆转作用是非血压依从性的，丹参酮Ⅱ_A通过抑制PKC蛋白的表达、促进心肌局部NO的产生及eNOS基因表达，起到阻止、逆转高血压心肌肥厚的发展。     

丹参酮ⅡA抑制腹主动脉缩窄高血压大鼠心肌肥厚的作用及分子生物学机制

 目的研究丹参酮ⅡA(TSN)对腹主动脉缩窄大鼠肥厚心肌血管紧张素1型受体(AT1R)、一氧化氮合酶(eNOS)及蛋白激酶C(PKC)基因表达的影响,探讨丹参酮ⅡA抑制高血压左心室肥厚的分子机制。方法SD大鼠行腹主动脉缩窄术建立高血压左室心肌肥厚模型,术后4周将手术大鼠随机分为手术组、TSN低、高剂量组(10,20 mg·kg^-1·d^-1,ip)、缬沙坦组(10 mg·kg^-1·d^-1,ig),每组8只;另有8只作为假手术组。用药8周后检测各组尾动脉压,取左心室组织检测左心室质量指数(LVMI)、病理切片HE染色测量心肌纤维直径(MFD);采用硝酸还原法测定心肌组织NO的含量、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测AT₁R mRNA的表达水平、免疫印迹法(Western blotting)分别检测eNOS的蛋白水平和PKC的活性。结果①TSN低、高剂量均对血压没有影响,仍显著高于假手术组和缬沙坦组(P<0.01)。②TSN低、高剂量组和缬沙坦组的LVMI、MFD虽然高于假手术组(P<0.05),却显著低于手术组(P<0.01)。③TSN低、高剂量组和缬沙坦组的NO含量以及eNOS蛋白表达水平明显高于手术组(P<0.01),TSN两组的eNOS上调超过缬沙坦组(P<0.05)。④TSN低、高剂量都可使肥厚心肌的AT₁R mRNA和PKC蛋白水平明显下调(P<0.01),对PKC的下调作用超过缬沙坦组(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA对心肌肥厚的抑制作用是非血压依从性的,其对高血压心肌肥厚的抑制作用可能与抑制AT₁R的mRNA和PKC蛋白的表达量、促进心肌局部NO的产生及eNOS蛋白的表达有关。     

Effect of Sodium Tanshinone ⅡA Sulfonate on Phosphorylation of Extracellular Signal-regulated Kinasel/2 in Angiotensin Ⅱ-induced Hypertrophy of Myocardial Cells

Objective： To observe the effects of sodium tanshinone ⅡA sulfonate （STS） on angiotensin Ⅱ （Ang Ⅱ）-induced hypertrophy of myocardial cells through the expression of phosphorylated extracellular signal-regulated kinase （p-ERK1/2）. Methods： In the primary culture of neonatal rat myocardial cells, the total protein content in myocardial cells was determined by coomassie brilliant blue and the protein synthesis rate was measured by [3H]-Leucine incorporation as indexes for hypertrophy of myocardial cells. The expression of p-ERK1/2 was determined using Western blot and immunofluorescence labeling. Results： （1） The total protein and protein synthesis rate increased significantly in contrast to the control group after the myocardial cells were stimulated by Ang Ⅱ （1 μ mol/L） for 24 h; STS markedly inhibited the increment of the total protein level induced by Ang Ⅱ and the syntheses of protein. （2） After pretreatment of myocardial cells with Ang Ⅱ （1 μmol/L） for 5 min, the p-ERK1/2 protein expression was increased, with the most obvious effect shown at about 10 min; pretreatment of myocardial cells with STS at different doses （2, 10, 50μmol/L） for 30 min resulted in obvious inhibition of the expression of p-ERK1/2 stimulated by Ang Ⅱ in a dose-dependent manner. （3） After the myocardial cells were stimulated by AngⅡ （1 μ mol/L）, the immunofluorescence of ERK1/2 rapidly appeared in the nucleus. The activation and translocation process of ERK1/2 induced by Ang Ⅱ was blocked distinctly by STS. （Conclusion： STS inhibited the myocardial cell hypertrophy induced by Ang Ⅱ, and the mechanism may be associated with the inhibition of p-ERK1/2 expression.     

丹参酮Ⅱ A对肥厚心肌细胞内C-jun氨基末端激酶活性的影响

目的:在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,观察丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的肥大心肌细胞C-jun氨基末端激酶(C-junN-terminalkinases,JNKs)表达的影响。方法:采用相差显微镜测量心肌细胞直径大小,3H-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率作为心肌细胞肥大的指标,用细胞免疫荧光标记和蛋白质印迹法(westernblot)检测心肌细胞核内磷酸化JNKs(JNK-P)的表达代表JNKs活性。结果:AngⅡ诱导心肌细胞肥大,其导致的心肌细胞直径、蛋白合成速率、细胞内JNK-P蛋白含量均明显高于对照组(P<0.05或P<0.01),丹参酮ⅡA对此有一定的抑制作用(P<0.05),其效果与AngⅡ受体阻滞剂氯沙坦相似。结论:丹参酮ⅡA对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大有一定的抑制作用。其作用机制可能与丹参酮能抑制AngⅡ1型受体激活,阻止Ca2 内流,阻断丝裂原活化的蛋白激酶通路,抑制JNKs的磷酸化和向核内移位有关。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大反应中磷酸化MAPK的作用

目的 主要从丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）激活及失活的角度研究丹参酮ⅡA磺酸钠（STS）对血管紧张肽Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌肥大反应中的作用。方法 培养新生大鼠心肌细胞，考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量、[^3H]-亮氨酸掺入法测定蛋白合成速率作为心肌肥大指标；用Western blot测定磷酸化MAPK蛋白（p44MAPK、p42MAPK）表达。结果 ①AngⅡ（1μmol／L）处理24h，心肌细胞[^3H]-亮氨酸掺入率、蛋白含量明显增加，STS能明显抑制AngⅡ介导心肌细胞[^3H]-亮氨酸掺入率、蛋白含量的增加。②用AngⅡ（1μmol／L）处理心肌细胞5min，磷酸化MAPK蛋白（p44MAPK、p42MAPK）表达即开始增加，10min左右时最明显。以AngⅡ（1μmol／L）处理心肌细胞10min，磷酸化MAPK蛋白（p44MAPK、p42MAPK）表达为标准，预先以STS（2、10、50μmol／L）处理心肌细胞30min。发现STS可明显抑制Angi诱导的心肌细胞磷酸化MAPK蛋白表达。③预先以不同浓度STS处理心肌细胞30min，发现STS对AngⅡ诱导的心肌细胞磷酸化MAPK蛋白表达的抑制作用存在剂量依赖性。结论 STS可以抑制AngⅡ诱导的心肌肥厚，其机制与抑制磷酸化MAPK表达有关。     

丹参酮ⅡA对肥厚心肌信号转导系统蛋白激酶B通路的影响

目的：探讨丹参酮ⅡA对压力超负荷性心肌肥厚大鼠的细胞信号转导系统中蛋白激酶B（Akt）的影响。方法：健康雄性成年大鼠48只，采用胸主动脉部分缩窄术复制心肌肥厚模型大鼠40只，随机分为模型组（M组），缬沙坦组（X组）各8只，丹参酮组（D组）24只，另8只设为假手术组（S组）。术后2周，X组大鼠给予缬沙坦10mg／kg灌胃；D组大鼠按丹参酮5、10和20mg／kg剂量各8只腹腔注射；S及M组大鼠给予同等容量无菌注射用水腹腔注射。各组治疗均每日1次。8周后检测各组大鼠左室心肌质量指数（LVMI），左心室后壁（LVPw）及室间隔（IVS）厚度，比较心肌纤维横径（MFD），心肌组织中p—Akt，p-Gsk3β信号转导蛋白的量。结果：与S组比较，M组、X组和D组的大鼠左室心肌质量指数，左心室及室间隔厚度及心肌纤维横径均增加，p—Akt及PGsk3β升高（均P〈0．05），与M组比较，X组和D组各项检测指标均下降；X组与D组间比较差异无显著性意义；D组中各剂量丹参酮治疗的大鼠间比较差异无显著性意义。结论：丹参酮ⅡA可以通过作用于蛋白激酶B（Akt）信号通路，防止心肌肥厚。