大鼠肝星形细胞、枯否细胞的同步分离培养与鉴定

目的:建立经济、简便的同步分离培养肝星形细胞及枯否细胞的方法。方法:应用胶原酶和蛋白酶对大鼠肝脏进行原位灌流、消化,获得大鼠肝脏非实质细胞,经18%(W/V)的Nycodenz密度梯度离心,一步分离肝星形细胞及枯否细胞;肝星形细胞处在界面,枯否细胞则处在界面下;台盼蓝染色鉴定细胞活力;Desmin免疫细胞化学染色鉴定肝星形细胞;溶菌酶免疫细胞化学染色鉴定枯否细胞。结果:该方法分离的肝星形细胞和枯否细胞的纯度达95%左右。肝星形细胞得率(3.0±0.5)×107/肝,枯否细胞得率(4.0±0.5)×106/肝。结论:应用Nycodenz一步密度梯度离心法可以很好的同时分离肝星形细胞和枯否细胞。     

慢性乙型肝炎及肝硬化患者肝脏微循环改变

为探讨慢性乙型肝炎（慢乙肝）及肝硬化患者的肝脏微循环状态。对141例慢乙肝、12例肝硬化患者和2例正常人的肝组织进行HE染色,光镜观察,并对其中53例慢乙肝和2例肝硬化患者的肝组织进行了电镜观察。结果显示,正常人的肝窦腔通畅,无狭窄和闭塞,无红细胞聚集现象。慢乙肝患者86.52%有肝窦腔狭窄,60.28%肝窦腔内见红细胞聚集,34.04%肝窦腔内有血栓形成;电镜观察见94.34%的患者肝窦内皮细胞窗孔减小减少,33.96%有基底膜形成,24.53%狄氏腔内出现胶原纤维。肝硬化患者肝组织结构紊乱,肝腺泡消失,假小叶形成。提示慢乙肝患者存在肝脏微循环障碍,肝硬化时肝脏微循环结构丧失。     

顺铂等化疗药物对胃癌细胞株端粒酶活性的调节作用

目的：研究常用化疗药物对SGC－7901人胃癌细胞株端粒酶活性的调节作用,探讨端料酶作为化疗敏感性指标的可行性。方法：选择顺铂、丝裂霉素C、阿霉素及5－氟尿嘧啶和甲酰四氢叶酸处理胃癌细胞,采用半定量TRAP－银染法检测药物处理前后的端粒酶活性,流式细胞学检测细胞周期和细胞凋亡。结果：顺铂、丝裂霉素C和阿霉素在诱导SGC－7901细胞凋亡的同时,下调端粒酶活性,且抑制作用呈时间依赖关系,5－氟尿嘧啶和甲酰四氢叶酸对端粒酶活性无明显抑制作用。结论：观测细胞株端粒酶的活性变化可作为化疗药物敏感性的指标,可合理选择新的化疗药物。     

自分泌一氧化氮在氟尿嘧啶诱导人肝癌细胞凋亡中的作用研究

目的 :观察肝细胞Bel74 0 2自分泌一氧化氮 (NO)在 5 -氟尿嘧啶 (5 FU)诱导人肝癌细胞凋亡过程中的作用 ,进一步揭示 5 FU的作用机理 ,同时寻找提高 5 FU的临床疗效的辅剂。方法 :人肝癌细胞Bel74 0 2按常规条件培养于含 10 %小牛血清的无L 精氨酸 (L Arg)的DMEM (dulbecco’smodifiedeagle’smedium)培养液中。在 5 FU作用下 ,采用免疫组化法观察诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)的表达情况 ,并在其底物L Arg存在的前提下 ,采用酶法测定硝酸盐 /亚硝酸盐 ,反映NO的生成 ,并证明其作用。用电镜观察凋亡细胞的形态 ,流式细胞仪进行凋亡细胞的定量。用L Arg的竞争性拮抗剂L NAME(Nω nitro l argininemethylester)对研究结果进行验证。应用病理彩色图文分析系统对免疫组化结果进行光密度定量分析。采用方差分析和t检验进行统计学分析。结果 :在 5 FU的作用下 ,iNOS表达增强 ,5 FU组 (0 1687± 0 0 1968) ,对照组 (0 10 4 9± 0 0 12 66) ,P <0 0 5 ,在其底物L Arg存在的前提下 ,内源性NO的浓度为 (73 0± 10 2 ) μmol/L(P <0 0 5 ) ,有显著性提高 ;人肝癌Bel74 0 2细胞株的凋亡率显著性增高为 (17 85± 0 78) % ,细胞坏死率和残渣率显著减少分别为 (32 99± 0 83) %、(3 18± 1 0 1) %。L NAME     

反流性食管炎60例治疗体会

观察不同作用机制的药物组合治疗反流性食管炎(ＲＥ)的疗效,以寻求临床适用的最佳方案。1　临床资料11　一般资料　60例经内镜检查证实的ＲＥ患者,均符合1999年8月烟台会议通过的反流性食管炎诊断标准(试行)。年龄15～77岁,平均456岁,有轻重不等的临床症状。将患者随机平均分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3组。12　方法　3组患者分别接受不同的药物治疗。Ⅰ组给予兰索拉唑治疗,30ｍｇ,1次ｄ,清晨口服;Ⅱ组给予西沙比利+雷尼替丁治疗,西沙比利10ｍｇ,4次ｄ,餐前30ｍｉｎ及晚10点服药;Ⅲ组给予西沙比利+雷尼替丁加达喜治疗,西沙比利与雷尼替丁的服法同Ⅱ组,胃…     

肝癌患者血浆PGE_2含量与T细胞亚群和NK细胞活性的关系

本文应用放免法、间接免疫荧光法和乳酸脱氢酶释放法分别测定４５例原发性肝癌患者血浆ＰＧＥ２、Ｔ细胞亚群和ＮＫ细胞活性的变化，并观察消炎痛栓剂对部分患者所测结果的影响。同时以４０例肝炎后肝硬化、３０例正常人作为对照。结果：肝癌患者血浆ＰＧＥ２含量和ＣＤ８＋细胞显著增高，两者呈密切的正相关；ＣＤ４＋／ＣＤ８＋细胞比值和ＮＫ细胞活性显著下降，与ＰＧＥ２呈负相关；消炎痛治疗使肝癌患者血中ＰＧＥ２含量基本降至正常，部分恢复Ｔ细胞亚群比例和ＮＫ细胞活性。提示高水平ＰＧＥ２是肝癌患者细胞免疫功能抑制的原因之一；消炎病可望用于肿瘤的辅助治疗。     

原发性肝细胞癌中iNOS与p16、Bax的表达及其与细胞凋亡的关系

目的：探讨在原发性肝细胞癌（HCC）中一氧化氮化酶（iNOS）的表达对p16、Bax表达的影响凋亡的关系。方法采用免疫组化的方法对HBsAg均阳性的49例HCC患者的iNOS、p16、Bax表达进行定位和半定量分析。采用TUNEL法测检测细胞凋亡。结果iNOS和Bax以棕黄色颗粒着色于细胞质和（或）细胞膜中，细胞核阴性，间质细胞着色不明显。p16以棕黄色着色于细胞核中，细胞中偶见。细胞凋亡细胞核着色，细胞阴性。p16、Bax的表达及细胞的凋亡与iNOS的表达有关。结论iNOS表达可诱导抑癌基因p16、Bax的表达和细胞凋亡的发生，从而影响HCC的分化，故在诱导HCC中iNOS的表达，有望提高肝细胞癌的临床治疗效果。     

HBV携带者中抗-TB治疗所致肝损伤的临床分析

目的研究HBV携带者中结核杆菌(TB)感染者抗-TB治疗所致肝损伤的临床及组织学特点.方法105例结核杆菌(TB)感染者,其中HBV携带者45例,非HBV携带者60例,均进行抗-TB治疗6mo～8mo;前2mo四联用药,异烟肼、利福平、吡嗪酰胺及乙胺丁醇,后4mo～6mo两联用药,异烟肼和利福平.男选择60例HBV携带者,无结核杆菌感染,未用药,作为对照组.所有病例均在治疗前检查肝功能、HBV标记物、腹部B超检查,HBV标记物阳性的,进行HBVDNA滴度测定.治疗后,每2wk～4wk复查上述指标肝功能异常者,再复查1次,谷丙转氨酶(ALT)仍高于正常上限1.5倍以上者作为观察对象,部分做肝穿刺行组织学检查.肝功能异常者,ALT≥3倍正常值的,暂停用抗-TB治疗,其中HBVDNA滴度高于1000ng/L的,给予拉米扶啶治疗加保肝治疗,其余的仅给予保肝治疗.结果结核杆菌(TB)感染者合并HBV携带者(A组)、TB感染者不合并HBV携带者(B组)、单纯HBV携带者(C组)肝功能异常者发生率分别为44.4%,13.3%,16.6%;发病年龄A组较B组年轻,P<0.05;e抗原转阴率,A组为20%,C组为10%;HBVDNA滴度增高时易出现肝功能异常;A组肝组织损伤较B,C两组严重;给予拉米扶啶治疗的10例患者肝功能正常后,再给予抗-TB治疗仅1例出现轻度肝功能异常.结论HBV感染可增加抗-TB药物治疗的肝毒性,尤其在HBVDNA滴度较高时(>1000ng/L),加用抑制HBV复制的药物可减少肝损伤的发生率;抗-TB治疗后HBeAg转阴率略增加,可能与肝细胞损伤后病毒ccDNA负荷量减少有关.     

CagA+幽门螺杆菌与胃黏膜上皮细胞凋亡的分子研究

目的：观察CagA^ Hp对胃黏膜上皮细胞凋亡的影响，进而探讨CagA^ Hp增加胃癌发生危险性的机制。方法：以TUNEL染色法研究30例CagA^ Hp阳性患者Hp根除前后胃黏膜上皮细胞凋亡的情况；通过免疫组织化学法和RT－PCR检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果：CagA^ Hp阳性患者胃黏膜上皮细胞凋亡指数为13．42％，Hp根除后，胃黏膜上皮细胞凋亡指数降为4．8％，较治疗前明显减少（P＜0．01），而CagA^ Hp仍为阳性患者胃黏膜上皮细胞凋亡指数无明显减少（P＞0．05）；bcl-2蛋白表达阳性的CagA^ Hp阳性患者Hp根除后，胃黏膜上皮细胞bcl-2蛋白表达阳性明显增多（P＜0．01），且胃黏膜上皮细胞bcl-2的mRNA表达明显增强（P＜0．01），而CagA^ Hp仍为阳性患者胃黏膜上皮细胞bcl-2蛋白表达和mRNA表达无明显增强（P＞0．05）；bax蛋白表达阳性的CagA^ Hp阳性患者Hp根除后，胃黏膜上皮细胞bax蛋白表达阳性明显减少（P＜0．01），且胃黏膜上皮细胞bax的mRNA表达明显减少（P＜0．01）；而CagA^ Hp仍为阳性患者胃黏膜上皮细胞bax蛋白表达和mRNA表达无明显减少（P＞0．05）。结论：诱导胃黏膜上皮细胞凋亡是CagA^ Hp参与胃癌发生的机制之一，CagA^ Hp通过下调bcl-2的表达、促进bax的表达诱导胃黏膜上皮细胞凋亡。