浙江地区儿童感染人巨细胞病毒gH基因分型研究

目的了解浙江地区儿童感染人巨细胞病毒(HCMV)糖蛋白H(gH)基因不同型别的分布特征。方法收集2015年1月—2017年12月浙江大学医学院附属儿童医院HCMV DNA检测阳性患儿尿液样本、咽拭子样本或患儿母亲乳汁样本,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)对gH基因进行分型检测。按照年龄、样本类型、疾病类型对HCMV阳性患儿进行分组,比较各组gH基因类型分布。结果 1 232例HCMV DNA阳性样本中,gH1型766例(62.2%),gH2型373例(30.3%),gH1和gH2混合型93例(7.5%)。不同年龄、样本类型及疾病类型患儿gH基因类型分布趋势一致,无统计学差异(P 0.05)。结论浙江地区儿童感染HCMV以gH1型为主,不同年龄、样本类型及疾病类型患儿HCMV gH基因类型无差异。     

载体法筛选人巨细胞病毒截短UL54基因小干扰RNA靶位体系的建立

目的 建立载体法筛选人巨细胞病毒(HCMV)截短UL54基因(UL54S)小干扰RNA(siRNA)靶位的体系.方法 利用质粒pAVU6+27设计并构建2个小发夹RNA(shRNA)表达载体(psiUL54-1和psiUL54-2),与融合蛋白表达载体pUL54S-绿色荧光蛋白(EGFP)共转染AD293细胞.荧光显微镜观察融合蛋白荧光表达,RT-PCR法分析UL54S mRNA水平变化,流式细胞仪评价siRNA对融合蛋白的抑制作用,采用方差分析对流式细胞检测结果进行统计分析,筛选出有效的siRNA作用靶位.结果 shRNA表达载体psiUL54-2与融合蛋白表达载体pUL54S-EGFP共转染AD293细胞48 h后,pUL54S-EGFP、psiUL54-2共转染组EGFP表达量较pUL54S-EGFP、pAVU6+27共转染组下降;凝胶分析显示,psiUL54-2与pUL54S-EGFP共转染48 h后,UL54SmRNA相对表达量为19.6,明显低于pUL54S-EGFP、psiUL54-1共转染组的96.6与对照组的100.0;psiUL54-1、pUL54S-EGFP共转染48 h后对融合蛋白UL54S-EGFP表达无影响(P>0.05),但psiUL54-2、pUL54S-EGFP共转染抑制融合蛋白UL54S-EGFP的表达(19.43×104±2.29×104比27.89×104±5.50×104,P<0.01).结论 成功建立载体法筛选HCMV截短UL54S siRNA靶位体系,UL54S序列中1532～1550位点是有效的siRNA靶位点.     

婴儿人巨细胞病毒感染病原学和临床分析

目的了解婴儿人巨细胞病毒（HCMV）活动性感染的疾病诊断情况，探讨病原学结果与临床症状之间的关系。方法经血清HCMV IgM和抗凝外周血PP65抗原检测确定的HCMV活动性感染的婴儿378例，对其疾病诊断、病原学结果和临床症状之间的关系进行分析。其中107例患儿，使用套式聚合酶链反应（nPCR）加限制性长度多态性分析（RFLP）进行HCMV糖蛋白B（gB）基因分型。结果在378例HCMV感染患儿中，全身性感染和单脏器感染分别占27．78％和72．22％，肝炎、HCMV包涵体病、血小板减少性紫癜、肺炎等4种疾病分别以33．07％、27．78％、13．49％、6．35％占较大比例。≤2周HCMV包涵体病患儿的比例，明显多于3～12周（P〈0．05）和〉12周的患儿（P〈0．01）。高水平PP65阳性细胞率的患儿全身性感染率明显高于低水平PP65阳性细胞率的患儿（P〈0．01）。HCMV IgM和HCMV PP65、HCMV IgM和HCMV DNA、HCMVPP65和HCMV DNA的阳性符合率分别为31．4％、61．4％、57．1％。三项指标均阳性的患儿全身性感染的比例，明显高于一项或两项指标阳性的患儿（P〈0．01）；IgM和HCMV PP65两项阳性的患儿全身性感染的比例，也明显高于其中一项阳性患儿（P〈0．01）。107例患儿HCMV糖蛋白B（gB）基因的分型结果为gBI型53例，gBⅡ型20例，gBⅢ型18例，gBⅠ、Ⅱ混合型7例，gBⅠ、Ⅲ混合型5例，gBⅡ、Ⅲ混合型4例，未发现gBⅣ型。gBⅠ型占多数（49．53％）。结论婴儿HCMV感染临床表现多样；多种指标的检测，可提高检出率；婴儿HCMV感染，以gBⅠ型HCMV占多数。     

套式聚合酶链反应及限制酶分析检测婴儿巨细胞病毒感染

人类巨细胞病毒 (ＨＣＭＶ)感染极为普遍 ,多数是隐性感染 ,但在免疫功能尚未健全的新生儿感染后可引起严重的巨细胞包涵体病 (ＣＩＤ) ,早期诊断对指导临床治疗及预后判断很重要。我们应用ｎＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ方法 ,对 2 15例临床疑有巨细胞病毒感染的婴儿进行检测 ,现将结果报告如下。1　对象与方法1 1　对象　选自 1998年 10月～ 1999年 12月我院门诊及住院病人中早产儿、小于胎龄儿、黄疸、肝脾肿大、先天性巨结肠、先心、脑发育不良的患儿 2 15例 ,男 12 6例 ,女 89例 ,年龄为出生 2小时～ 3个月 ,测血清ＨＣＭＶ -ＩｇＭ、ＩｇＧ抗体…     

杭州市2001-2004年20363例住院儿童肺炎患者中流感病毒感染的调查

流感病毒A、B型感染除致流感外,肺炎是重要并发症,为掌握近几年杭州地区儿童流感流行,特别是肺炎患儿中流感病毒感染情况,对我院2001年1月至2004年12月住院的肺炎患儿鼻咽吸出物中的流感病毒A、B型进行了检测.     

DNA芯片及其在医学微生物检测中的应用

ＤＮＡ芯片技术是在一块面积很小的基板上有序固定大量寡核苷酸探针或ｃＤＮＡ探针而组成高密二维的阵列，利用原位杂交技术和高灵敏度的检测系统获得大量ＤＮＡ信息。它不仅可一次检测多种病毒、细菌等微生物，而且可鉴别菌株及亚型，分析耐药基因和耐药机制以及进行流行病学调查。本文主要对ＤＮＡ芯片技术的原理、方法、在微生物检测中的应用和将来的发展前景作一简要综述。     

江浙地区汉族人群非综合征性唇腭裂与PVRL 1exon 3多态性的相关研究

目的 探讨PVRL 1基因外显子3(poliovims receptor-related 1 exon 3,PVRL 1 exon 3)多态性与江浙地区汉族人群非综合征性唇腭裂(nonsyndromic cleft lip and/or palate,NSCL/P)的相关性. 方法 NSCL/P患者与双亲组成一核心家庭,共50个核心家庭(135人),应用聚合酶链反应-单链构象多态分析技术及测序的方法对NSCL/P患者PVRL 1 exon 3的多态性进行检测. 结果 测序结果与GenBank中PVRL 1 exon 3标准序列比对,未发现W185X突变,也未发现另外可信的多态性位点. 结论 非综合征性唇腭裂的发生与PVRL 1 exon 3多态性无相关性.     

脓毒症动物模型研究现状及思考

感染性疾病是导致儿童死亡的首要原因, 脓毒症则是一种全球性导致儿童死亡的重要感染性危重疾病, 病死率高, 严重威胁儿童的健康。早期诊断已成为治疗严重脓毒症的关键。脓毒症动物模型的建立有助于更好地诊断脓毒症, 从而采取干预措施, 改善脓毒症患者的预后。本文就现有脓毒症动物模型的种类及优缺点等进行综述, 并提出脓毒症动物模型的优化建议, 为实验模型的选择和优化提供参考依据, 以促进其"逆向转化"到临床的能力。     

流产死胎组织中的巨细胞病毒,弓形虫感染监测

本文通过人巨细胞病毒分离，套式聚合酶反应及限制酶切分析，弓形虫主一次ＰＣＲ，对不明原因的流产，死胎组织进行ＨＣＭＶ及弓形虫检测，结果发现，２８份流产，死胎组织中，１例死胎肺组织ＨＣＭＶ ＤＮＡ阳性，病毒分离阳性；１例胎儿，肺，脑，肝，肾，眼组织弓形虫ＤＮＡ阳性，其脑，肺，眼，肝组织经动物接种后，在小白鼠腹水中找到了弓形虫滋养体，但心，肾结果阴性。     

聚合酶链反应加限制性内切酶多态性分析快速诊断细菌感染的临床研究

目的　探讨细菌 16S 2 3SrRNA基因区间检测在临床细菌感染病原诊断中的应用价值。方法　以 16S 2 3SrRNA基因区间为靶序列 ,在其保守序列内设计共同引物 ,对临床新生儿败血症 (42例 )血标本及疑似化脑 (6例 )患儿的脑脊液标本进行PCR扩增及进一步的RFLP分析 (聚合酶链反应加限制性内切酶长度多态性分析 ) ,参照已建立的常见菌种的特异 16S 2 3SrRNA基因区间图谱以诊断病原菌 ,同时用血培养法作为对照。结果　 42例新生儿败血症血培养 15例阳性 ,阳性率为 35 7% ;2 7例PCR检测阳性 ,阳性率为 6 4 3 % ,PCR阳性率明显高于血培养 (P <0 0 1)。血培养阳性的 15例中 14例PCR检测阳性 ,两者菌种相符。 15例正常对照组的血标本其血培养及PCR检测均阴性。 6例脑脊液标本 ,其中 1例培养为表皮葡萄球菌 ,经PCR检测也为葡萄球菌 ;2例培养阴性 ,经PCR检测图谱分析为葡萄球菌 ;1例培养为新型隐球菌的脑脊液标本PCR检测阴性 ;另 2例培养及PCR检测均阴性。结论　运用PCR RFLP法检测细菌 16S 2 3SrRNA基因区间具有特异、敏感、快速、准确的特点 ,为临床细菌感染的病原诊断提供新的方法。