SARS-CoVS基因的克隆及其shRNA表达载体的构建

目的构建绿色荧光蛋白与SARSCoVS基因的融合表达载体pEGFPC1S及针对SARSCoVS基因的shRNA表达载体pshRNAS,以观察shRNA对SARSCoVS蛋白表达的影响。方法人工合成SARSCoVS基因片段及其shRNA引物,两端设计酶切位点,分别与载体pEGFPC1和pTZU6+1连接,转化大肠杆菌DH5а和JM109,酶切及测序鉴定。结果酶切电泳显示pEGFPC1S插入片段大小为1416bp,测序结果显示pshRNAS中插入的shRNA引物序列正确。结论成功构建融合表达载体pEGFPC1S及针对SARSCoVS基因的shRNA表达载体pshRNAS。     

生物信息学预测小鼠转铁蛋白受体B细胞表位

目的：预测小鼠转铁蛋白受体（transferrin receptor, TfR）的B细胞表位,为构建以TfR抗体为脑转运载体的疫苗提供基础。方法：以小鼠转铁蛋白受体基因序列为基础,按Chou-Fasman和Gamier-Robson方法预测其编码蛋白的二级结构,按Kyte-Doolittle方法预测其亲水性,Emini方法预测其表面可能性以及按Jameson-Wolf方法预测其抗原指数。结果：Chou-Fasman和Gamier-Robson方法发现90 - 110, 120 - 145, 160 - 180, 240 - 250, 265 - 275, 290 - 304, 336 - 350, 375 - 383, 426 - 435, 504 - 517, 590 - 602, 613 - 630, 710 - 718这些区域可能为α螺旋的中心区域。用Kyte-Doolittle、 Emini、 Jameson-Wolf方法分别对小鼠TfR的B细胞表位进行预测,结果显示其共有区域为30 - 50, 100 - 115, 145 - 157, 310 - 320, 355 - 360, 440 - 445, 510 - 535, 655 - 660, 690 - 695, 705 - 710。根据抗原表位设计原则筛选出5段符合要求的抗原表位氨基酸序列：DGDNSH, AETEETDKS,NTYTP,MDKNKF,KHPVDGKSLYRDSNWISKV,它们可能为小鼠转铁蛋白受体的B细胞优势表位区域。结论：该结果有助于确定小鼠转铁蛋白受体的B细胞表位以及构建药物-载体复合物,发挥其脑药物转运载体的功能。     

人乳头瘤病毒基因分型检测在宫颈病变中的应用价值

目的研究不同程度的宫颈病变患者经必要治疗后的HPV转阴率,以探讨HPV分型检测在临床诊断和判断预后的应用价值。方法入选病例为2007年11月～2009年11月妇科门诊符合条件的妇女5 000例,利用核酸分子快速导流杂交基因分型技术进行21种HPV-DNA亚型检测,阳性者在知情同意下行TCT及阴道镜下定位活检。根据细胞和病理组织学诊断有无宫颈病变及其病变程度分组:①正常或炎症组:宫颈组织或细胞学正常或炎症者;②低度鳞状上皮内瘤变(LSIL)组:包括CINI和HPV感染;③高度鳞状上皮内瘤变(HSIL)组:包括浸润癌(Cancer)、CINⅢ、CINⅡ。对≥CINⅡ或CINⅠ无随访条件者予手术治疗或物理治疗,术后随访于3、6、12个月均行HPV-DNA、TCT、电子阴道镜检查,必要时再活检。结果宫颈癌根治术31例、子宫切除术87例、LEEP术334例、物理微波治疗256例,共治疗708例,随访3、6、12个月,在HSIS组、LSIL值,正常与炎症组累计HPV-H转阴率分别为86.4%(254/294)、91.9%(194/211)、95%(193/203),p<0.01。宫颈病变的多重感染组HPV转阴率明显低于单一感染组;全宫切除术后HPV感染的转阴率较LEEP、微波治疗组高;LEEP术后HPV转阴率与病变级别有关,宫颈病变越高级,治疗后HPV转阴率越低。术后6个月内HPV转阴者TCT及电子阴道镜检查均未发现阳性结果。结论手术与物理治疗可有效促使HPV转阴与病灶消除,病变级别越高,病毒清除越难;感染HPV-H以及多重感染者,手术与物理治疗后转阴率下降。持续不转阴预示病灶残留或复发。HPV-DNA分型检测可作为临床上宫颈癌及癌前病变常规筛查计划指标,用于CINⅡ、CINⅢ治疗后病灶残留或复发的预测以及预示发展状况的可靠指标之一,值得推广应用。     

β-链蛋白在Wnt信号转导途径中的作用

Wnt/ β-链蛋白通路参与调控胚胎正常发育和细胞增殖与分化等重要生理过程。正常组织细胞中 ,该信号通路的上下游调节分子 Axin、APC、GSK3β等通过自稳调节方式 ,使胞浆内 β-链蛋白保持低浓度状态。多种肿瘤细胞有 β-链蛋白的异常活化 ,目前出现了几种针对异常活化的 Wnt信号通路的新型抗肿瘤基因治疗措施     

重组腺病毒IκBαM在裸鼠体内对人肝癌细胞HepG2的凋亡作用

细胞核因子κB(NFκB)是一种广泛存在于细胞中的具有多向性调节作用的蛋白质分子,其活性受到一个强抑制物核因子κB抑制物(IκB)的抑制,在外界刺激剂的作用下,IκB发生磷酸化并降解,核因子κB转入核内与靶基因κB的基序结合,增强其表达[1,2]。Kucharczak等[3]证实核因子κB在肿瘤增殖和抗凋亡中扮演重要角色。核因子κB抗凋亡机制的发现,使困惑人们多年的肿瘤细胞抗凋亡作用机制的研究有了突破性进展,这可能对解决目前治疗肿瘤的难题(肿瘤细胞的耐受性)提供有力的武器。IκBα是IκB家族3个成员之一,刺激激活后在32位和36位丝氨酸末…     

乙型肝炎病毒包装信号ε研究进展

本文就乙型肝炎病毒包装信号ε(epsilon)的结构、变异、功能和研究意义作了综述。     

干扰素α抗病毒活性的实验研究

目的比较不同亚型干扰素α（IFNα2b、IFNα2a、IFNαIb）对JAK-信号转导活化转录因子（STAT）通道中重要信号传导分子STAT1、STAT2、干扰素α受体（IFNAR）、蛋白激酶（PKR）、核糖核酸酶L（RNaseL）表达的影响，研究其抗病毒活性的差别，并评价IFNα抗病毒活性的关键性信号传导分子。方法1000U／ml的不同亚型IFNα分别作用于HepG2细胞后，用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）方法检测HepG2细胞内STAT1、STAT2、IFNAR、PKR、RNase L mRNA表达水平。用western blot方法检测细胞内STAT1及IFNAR蛋白表达水平。结果RT-PCR的实验结果：（1）IFNα1b处理组IFNAR、STAT1、STAT2 mRNA的表达水平较IFNα2b组高，两组比较差异无统计学意义。IFNα1b、IFNα2b处理组IFNAR、STAT1、STAT2 mRNA水平明显较IFNα2a组高，差异均有统计学意义，，值分别为5．26、15．6、4．67，P值均〈0．05。（2）IFNα1b、IFNα2b、IFNα2a处理后的PKR表达水平相似，3组比较差异无统计学意义。（3）RNaseL表达量极少，无法比较不同处理组间RNase L mRNA表达水平的差异性。Western blot实验结果：（1）IFNα1b处理组IFNAR、STAT1蛋白水平较IFNα2b处理组高，两者比较差异无统计学意义，IFNα1b、IFNα2b处理组IFNAR、STAT1蛋白水平较IFNα2a处理组明显升高，差异有统计学意义，F值分别为17．7、20．1，F值均〈0．05。结论IFNα2b、IFNα2a、IFNα1b均可促进JAK—STAT信号通道中STAT1、STAT2、IFNAR mRNA及蛋白表达，IFNα1b和IFNα2b作用较强，IFNα2a作用较弱。初步表明，IFNα1b、IFNα2b的抗病毒活性较IFNα2a强，IFNAR、STAT1、STAT2可作为评价IFNα抗病毒活性的关键性指标，而PKR、RNaseL能否作为评价指标有待进一步的实验证实。     

腹腔镜下两种子宫切除术式临床研究

目的：探讨腹腔镜下筋膜内子宫切除术（CISH）和腹腔镜辅助下阴式子宫切除（LAVH）的效果。方法：自2005年1月至2006年2月对我院收治的188例腹腔镜下子宫切除术（其中CISH98例，LAVH90例）进行对照研究，观察两组手术时间、出血量、术后体温、肛门排气、阴道血性分泌物持续时间、阴道残端愈合情况、参加社会活动时间及性生活恢复及满意度等。结果：两组的手术时间、出血量、术后病率、肛门排气、术后阴道血性分泌物持续时间及性生活恢复时间均存在显著差异（P〈0．005），CISH组明显优于LAVH组，两住院时问两组无明显差异。结论：腹腔镜筋膜内子宫切除术在许多方面优于腹腔镜辅助下阴式子宫切除术，而且CISH在保持宫颈及盆底的正常结构的同时，又切除了宫颈癌的好发部位，预防宫颈癌的发生。     

多房棘球绦虫elp基因在真核细胞COS7中的表达

目的　构建中国四川株多房棘球绦虫 elp基因真核表达载体 ,为核酸疫苗研究奠定基础。　方法　应用 RT-PCR方法从多房棘球绦虫续绦期幼虫 RNA获得 elp基因的编码序列 ,定向克隆于 p GEM- 11zf( +)。经酶切鉴定及测序后将目的基因亚克隆于真核表达载体 pc DNA3.1( +)。重组真核表达载体 pc D- EL P鉴定后 ,纯化无内毒素的重组质粒 ,电穿孔方法转染哺乳动物细胞 COS7。RT- PCR、dot- EL ISA和免疫组化方法鉴定目的基因在 COS7细胞中的表达。　结果　琼脂糖凝胶电泳、酶切及序列分析证实多房棘球绦虫 elp基因编码区已成功地克隆于真核表达载体 pc DNA3.1( +)。RT- PCR、dot- EL ISA和免疫组化证实 ,重组质粒在哺乳动物细胞 COS7中能够表达多房棘球绦虫 EL P抗原。　结论　成功地构建了中国四川株多房棘球绦虫 elp基因的真核表达载体 ,该载体在 COS7哺乳动物细胞中能表达 EL P抗原 ,为多房棘球绦虫 elp基因疫苗研究奠定了基础。