溶组织内阿米巴DNA介导的基因转移新进展

近几年,DNA介导的基因转移,已被广泛用作细胞或生物体基因控制和功能分析的强有力工具。有关溶组织内阿米巴的基因结构和转录模式的报道对构建合适的转染载体是重要的。 溶组织内阿米巴的基因结构并不复杂,迄今所报道的仅2个基因有内含子,编码区在基因组内无定向地紧密相连。体外分析表明,其转录为单顺反子方式。基因间相对短的     

日本血吸虫(中国大陆株)虫卵cDNA文库的构建

应用定向完隆方法,将日本血吸虫虫卵cDNA片段重组入噬菌体载体λgtllSfi-Not的EcoRl和Notl双酶切位点之间。所构建的基因表达文库的容量为重1．07×107重组子。经含有IPTG及X-Gal的颜色选择平皿测定,初步提示重组效率达100％。日本血吸虫(中国大陆株)虫卵cDNA文库的构建@吴海玮$南京医科大学分子寄生虫学研究室@陈淑贞$南京医科大学分子寄生虫学研究室@张兆松$南京医科大学分子寄生虫学研究室     

日本血吸虫22.6 kDa重组抗原的高效融合表达及特性鉴定

目的： 大量获得纯化的日本血吸虫２２６ ｋ Ｄａ 重组抗原。方法： 用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法将其编码基因序列经改造后亚克隆入载体质粒ｐ Ｇ Ｅ Ｘ １λ Ｔ 进行表达。结果： 得到了融合表达的蛋白抗原。此融合蛋白表达量大, 用凝血酶酶切后易大量制备纯化的重组２２６ ｋ Ｄａ 抗原。结论： 以此融合蛋白免疫的小鼠抗血清进行免疫印迹试验, 表明 Ｓｊ２２６／ Ｓｊ２６ Ｇ Ｓ Ｔ 融合重组蛋白具有与 Ｓｊ２２６ 蛋白一样的免疫学活性。     

日本血吸虫22.6kDa重组蛋白对小鼠的免疫保护性研究

目的:研究日本血吸虫(中国大陆株)22.6 kDa 抗原作为血吸虫病疫苗候选分子的潜能,并探讨Sj22.6/Sj26 GST 融合蛋白作为复合疫苗的可能性。方法:用亲和层析法制备Sj22.6/Sj26 GST融合蛋白。将这两种蛋白分别免疫BALB/c小鼠后进行攻击感染试验。结果:Sj22.6 重组蛋白和Sj22.6/Sj26 GST 融合蛋白分别可诱导小鼠产生32.1% (P< 0.005) 和34.9% (P< 0.02)的成虫减虫率, 28.4% (P< 0.02)和45.1% (P< 0.005)的总减卵率。结论:rSj22.6 与Sj22.6/Sj26 GST融合蛋白均有疫苗应用价值     

日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa抗原编码基因的核酸疫苗研究

为探索日本血吸虫（中国大陆株）２２．６ｋＤａ 抗原（Ｓｊ２２．６）编码基因用作核酸疫苗的可行性,将ｐＣＭＶ／Ｓｊ２２．６基因重组质粒经肌肉注射免疫了一批ＢＡＬＢ／ｃ小鼠并进行攻击感染试验,结果表明此重组质粒能在小鼠体内持续存在、稳定表达并诱导小鼠产生特异性的抗Ｓｊ２２．６ 抗体,但未能诱导有效的保护力     

日本血吸虫线粒体相关蛋白的基因克隆及特性鉴定

[目的 ]探索研制血吸虫病疫苗的新路径 ,对日本血吸虫线粒体相关蛋白进行基因克隆及特性鉴定。[方法 ]分析本室筛选日本血吸虫成虫cDNA文库获得的 1个cDNA片段 (Sj338 2 4)的开读框序列 ,在其上下游分别设计引物A和B ,并以该cDNA片段为模板进行PCR扩增后 ,将该片段重组于pGEM T中并进行DNA测序鉴定及检索。再经酶切后将该基因片段亚克隆入表达载体pGEX 6P 1,并进行蛋白表达、纯化及抗原性鉴定。 [结果 ]该目的基因PCR产物全长共 487bp ,其开读框由 45 9bp组成 ,编码 15 3个氨基酸经残基组成的多肽。DNA序列同源性分析发现Sj338克隆基因与人及褐鼠的线粒体外膜蛋白的部分编码基因较高度同源。重组质粒pPEX 6P 1 Sj338能高效融合表达 ,理论蛋白的分子量为 17kDa。SDS PAGE和Westernblotting检测结果表明 ,重组蛋白rSj338具有良好的抗原性。 [结论 ]Sj338可能为日本血吸虫线粒体相关蛋白的基因 ,重组蛋白有望成为新的疫苗候选分子。     

用日本血吸虫病化疗后再感染人血清对成虫cDNA文库的初步筛选

为了获取日本血吸虫特异的cDNA克隆,用日本血吸虫病流行区化疗后再感染人群血清筛选构建于表达载体λt11的日本血吸虫成虫cDNA文库,再以多聚酶链反应（PCR）技术鉴定免疫筛选的阳性cDNA克隆。结果对cDNA表达库中约8．6×104个噬菌斑进行了筛选,初筛时共挑出59个可能的阳性斑,经两次复筛后,有11个噬菌斑仍呈阳性反应。以阳性噬菌斑DNA为模板,经PCR均扩增出一定大小的片段,从564bp到740bp不等。     

致弱血吸虫尾蚴免疫和早期化疗诱导宿主产生高保护性现象及其效应机制的研究

运用致弱尾蚴免疫和化学药物治疗血吸虫病,可诱导宿主产生对攻击感染的高保护力。该文综述了近年来阐明这两种高保护性现象的动物实验及其相关的效应机制的研究,以期为开拓新的疫苗发展策略和新疫苗的设计提供借鉴。     

SYBR Green荧光定量粪检PCR法检测日本血吸虫感染的敏感性研究

目的建立快速、敏感、特异的检测日本血吸虫感染的SYBR Green荧光定量PCR法,准确评估其敏感性。方法将计数的日本血吸虫虫卵掺人健康水牛粪样中,制备人工阳性粪样。采用改良QIAamp DNA Stool Kit粪样DNA提取方法,提取人工阳性粪样DNA,进行SYBR Green荧光定量PCR,建立Ct值与粪样中克粪虫卵数（EPG）的关系;提取单独（不与牛阴性粪样混合）日本血吸虫虫卵DNA与虫卵生理盐水冲洗液DNA,行定量PCR检测,以对本方法进行严格质量控制。结果每200mg粪样仅含1个虫卵时,荧光定量PCR仍呈阳性,人工阳性粪样EPG的对数与PCR的Ct值存在线性关系。结论SYBR Green荧光定量粪检PCR法检测日本血吸虫虫卵DNA敏感性高,EPG对数与PCR的Ct值存在线性关系。     

微粒子免疫检测技术在寄生虫学研究及诊断中的应用

医学实验方法的发展和应用是医学研究和疾病快速诊断的基础。微粒子免疫检测技术（MIA）主要用于定量检测特异性蛋白质,如细胞因子、病原体抗原以及核酸等大分子物质。该技术应用微粒子作为固相支持,能够对一个样品中多达100种不同的分析物进行同步检测,具有极高的灵敏度、特异性、稳定性,以及快速、多重的检测能力。近年来,作为一种检测手段,MIA越来越多地应用于寄生虫学的研究与诊断性检测中。本文就MIA的历史发展、优缺点、在寄生虫学研究及诊断中的应用和前景等做一综述。