日本血吸虫中国大陆株基因重组抗原Sj22.6kDa基因克隆与表达的研究

目的 :分离 Sj22.6抗原基因 ,构建 Sj22.6表达克隆。方法 :抗体筛选 Sj成虫 cDNA库 ,PCR扩增目的基因片段 ,亚克隆入表达载体 pGEX- 1λt。对重组体进行诱导表达并对表达产物进行 SDS- PAGE和 Western blot分析。结果 :PCR扩增产物为约 930 bp的 DNA条带。亚克隆入pGEX- 1λt,获得两个表达克隆 pGSj6和 pGSj24 ,特异性表达产物为 22.6k Da抗原。重组体的表达方式为分离表达。结论 :从日本血吸虫成虫 cDNA库筛选到 Sj22 .6k Da克隆化基因 ,并构建了表达克隆 pGSj2 4和 pGSj6。     

日本血吸虫磷酸丙糖异构酶Th1型表位的免疫学鉴定

目的筛选和鉴定日本血吸虫磷酸丙糖异构酶（SjTPI）的Th1型细胞表位,为构建短肽疫苗奠定基础。方法用BLAST比对并预测SjTPI的T细胞表位SjTPI-P18及其对照表位SjTPI-P9。设计并合成其编码DNA,重组入原核表达载体pET-32c（＋）后进行表达,获得纯化的重组融合蛋白rSjTPI-P18和rSjTPI-P9。用rSjTPI、rSjTPI-P18及rSjT-PI-P9刺激经照射致弱尾蚴免疫、rSjTPI加强免疫的C57BL/6和C3H/HeJ小鼠淋巴细胞,^3H-TdR掺入法检测淋巴细胞的增殖效果及细胞培养上清中IL-2水平;分别用重组rSjTPI-P18和合成SjTPI-P18刺激rSjTPI-P18、SjTPI-P18或PBS加弗氏佐剂两次免疫的C57BL/6小鼠淋巴细胞,并检测其细胞培养上清中IFN-γ及IL-4水平。结果参照曼氏血吸虫TPI T细胞表位预测的SjTPI-P18及SjTPI-P9,获得了与Trx融合表达的重组肽rSjTPI-P18及rSjTPI-P9。与rSjTPI-P9相比,rSjTPI及rSjTPI-P18均可刺激辐照致弱尾蚴免疫、rSjTPI加强免疫的C57BL/6或C3H/HeJ小鼠的淋巴细胞增殖且IL-2分泌量增加（P均〈0.05）;SjTPI-P18及rSjTPI-P18刺激经rSjTPI-P18或SjTPI-P18免疫两次的C57BL/6小鼠淋巴细胞分泌IFN-γ水平升高（P均〈0.05）,而IL-4水平较低。结论筛选和鉴定出的SjTPI-P18是C57BL/6小鼠特异的Th1型表位。     

日本血吸虫病流行区人群特异性IL-4和IL-5的应答特征

目的 观察日本血吸虫病流行区人群特异性ＩＬ－４和ＩＬ－５的应答特征。方法 选择江西省鄱阳湖中南山岛上３个毗邻的自然作为观察试区,根据烘检结果对１４～４１岁人群按年龄组随机抽样,选取烘检结果阴性的６５人,烘检阳性的６４人为研究对象。采用全血培养法,检测培养上清中血吸虫抗原特异性ＩＬ－４和ＩＬ－水平,并检测血甭中特异性ＩｇＥ抗体水平。结果 无且的ＩＬ－４和ＩＬ－５水平显著高于感染组,ＩＬ－４和ＩＬ０－     

大鼠胰岛素原基因转染肠道上皮细胞构建类胰岛B细胞系的研究

目的观察重组大鼠胰岛素原基因转染小鼠肠道上皮细胞(IEC-6)后,IEC-6的胰岛素表达情况。方法将IEC-6分为重组大鼠胰岛素原基因pCMV/proinsulin转染组(A组)、空载质粒pCMV转染组(B组)和未转染组(C组)。利用脂质体法将pCMV/proinsulin和pCMV分别转染IEC-6,用RT-PCR法检测转染后IEC-6胰岛素原基因mRNA的表达,并用超敏放免法测定转染后IEC-6的胰岛素表达水平。结果pCMV/proinsulin转染IEC-6后,IEC-6能表达胰岛素原基因mRNA。3组IEC-6表达的胰岛素水平间差别有统计学意义(P<0.05)。A组IEC-6胰岛素表达水平与B组、C组比较,差别有统计学意义(P<0.001);B组IEC-6胰岛素表达水平与C组比较,差别无统计学意义(P>0.05)。结论重组大鼠胰岛素原基因能成功转染小鼠肠道细胞并分泌胰岛素,为开展糖尿病基因治疗的研究奠定了实验基础。     

UV致弱日本血吸虫尾蚴诱导C57BL/6小鼠免疫保护作用的研究

目的 研究紫外线（UV）致弱日本血吸虫尾蚴诱导C57BL／6小鼠的免疫保护作用。方法分别观察不同UV强度（300、400和500μW／cm。照射的日本血吸虫尾蚴经腹部皮肤免疫）、不同免疫剂量（8、24和300条uV致弱尾蚴经腹部皮肤免疫）、不同免疫位点（300条UV致弱尾蚴经腹部和耳廓皮肤免疫）和不同免疫次数（100条UV致弱尾蚴经腹部皮肤免疫3次）诱导C57BL／6小鼠抗血吸虫攻击感染（40条正常尾蚴经腹部皮肤感染）的保护力。同时观察免疫后小鼠的体液免疫应答变化。结果 300、400和500μW／cm。UV照射的日本血吸虫尾蚴免疫C57BI。／6小鼠诱导产生的减虫率分别为2．72％、11．37％和10．38％；8、24和300条致弱尾蚴免疫小鼠诱导产生的减虫率分别为38．67％、7．54％和16．36oA；300条致弱尾蚴经腹部和耳廓皮肤免疫诱导小鼠产生的减虫率分别为16．36％和16．14％；100条致弱尾蚴免疫3次，诱导小鼠产生减虫率为4．88％。对300条uV照射尾蚴免疫后小鼠的体液免疫应答动态观察显示，与感染对照组相比，免疫组血清中可溶性成虫抗原（SWA）和可溶性虫卵抗原（SEA）特异的IgG于免疫后2周开始升高，正常尾蚴抗原（SCA）特异的IgG于免疫1周后开始升高，SWA和SCA特异的IgG随免疫次数的增加而升高。结论 UV致弱日本血吸虫尾蚴免疫C57BL／6小鼠能诱导其产生高水平的体液免疫应答，但保护力水平较低，提示C57BL／6小鼠为对UV致弱日本血吸虫尾蚴的低应答品系。     

日本血吸虫再感染相关基因克隆的筛选与鉴定

目的：获取编码可能指示再感染倾向的日本血吸虫特异免疫分子的ｃＤＮＡ克隆。方法：用日本血吸虫病流行区化疗后再感染人群高特异性ＩｇＧ４水平的混合血清筛选构建于表达载体λｇｔ１１的日本血吸虫成虫ｃＤＮＡ文库，以ＰＣＲ鉴定免疫筛选的阳性ｃＤＮＡ克隆插入片段选择插入片段大的克隆进行序列测定及基因数据库同源性检索。结果与结论：对ｃＤＮＡ文库中约８．６×１０４个噬菌斑进行了筛选，有１１个噬菌斑呈阳性反应，其中有可能编码日本血吸虫的线粒体蛋白的基因克隆及可能与人群日本血吸虫再感染相关的基因克隆等４个日本血吸虫基因克隆。     

日本血吸虫卵基因表达文库的构建

日本血吸虫卵基因表达文库的构建陈淑贞吴海玮张兆松（南京医科大学寄生虫学教研室，南京２１００２９）关键词日本血吸虫；虫卵；基因表达；文库作者从人工感染日本血吸虫尾蚴４５天的家兔肝脏分离日本血吸虫卵，液氮中冻存。临用时研磨成粉再加变性液匀浆。按Ｐｒｏｍｅ...     

日本血吸虫线粒体相关蛋白的特性及抗原表位的分析

目的　分析rSj338重组蛋白的氨基酸序列 ,了解该蛋白的特性 ,预测其抗原表位。方法　制备Sj338基因片段并重组入测序载体pGEM T ,对其核苷酸序列进行测定 ,分别以DNASIS和GOLDKEY软件对序列资料进行分析 ,并在BLAST网上进行同源性分析。结果　rSj338基因长 487bp ,含 1个由 45 9bp组成的开放阅读框 ,编码一由 15 3个氨基酸残基组成的多肽 ,分子量为 17 6kDa,氨基酸同源性分析发现 ,重组蛋白与人的线粒体传入受体亚单位氨基酸同源性为 46 % ,与褐鼠线粒体膜受体的前体氨基酸同源性为 44 % ,预测该蛋白的抗原表位位置为2 6～ 32、37～ 46、131～ 136和 147～ 15 1氨基酸肽段。结论　rSj338重组蛋白可能为日本血吸虫线粒体相关蛋白     

血吸虫病肝纤维化中细胞因子的网络作用

血吸虫病肝纤维化是严重危害人类健康的病理变化。近年来 ,有关其发生机制的研究发现 ,免疫应答网络的紊乱是血吸虫病肝纤维化发生的关键因素 ,尤其是当Th1类细胞因子与Th2类细胞因子的平衡失调 ,Th2类细胞因子占优势时 ,患者发生肝纤维化     

静脉吸毒人群隐孢子虫感染血清免疫学调查

目的调查静脉吸毒人群的隐孢子虫感染情况。方法采集588例静脉吸毒人群及384例健康人群血清标本,用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中隐孢子虫抗体阳性率。比较各组差异。结果588例静脉吸毒人员隐孢子虫血清阳性率为69．90％,而健康人群阳性率为29．43％,两者差异有统计学意义（P〈0．05）。女性静脉吸毒人员隐孢子虫血清阳性率为79．01％,男性为65．85％,两者差异有统计学意义（P〈0.05）。隐孢子虫感染率在不同年龄组、不同吸毒年限组和丙型肝炎抗体阳性组差异无统计学意义。结论静脉吸毒人群隐孢子虫感染率高于普通人群,其中女性吸毒人群高于男性吸毒人群。应加强对吸毒人群隐孢子虫病的防治。