人恶性胶质瘤细胞SHG-44经诺帝诱导分化后形态学改变及差异表达蛋白的质谱分析

目的:观察人恶性胶质瘤细胞SHG-44经去甲二氢愈创木酸类似物--诺帝诱导分化后形态学的改变,并分析差异表达蛋白.方法:分别用100、200 μmol/L诺帝诱导SHG-44细胞分化,观察处理后24、48、72 h细胞形态学的改变,并与未受刺激的空白对照组相比较;提取200μmol/L诺帝处理后的SHG 44细胞以及空白对照组细胞总蛋白进行双向电泳,用PDqest7.1软件比较两者间的差异表达蛋白,离子飞行时间质谱仪分析高丰度表达的差异蛋白.结果:200 μmol/L诺帝处理后SHG-44细胞的形态学改变较100 μmol/L更为明显;处理72 h时细胞分化最为明显.与空白对照组SHG-44细胞相比,经200 μmol/L诺帝诱导后,双向电泳发现了23个差异蛋白点,其中21个蛋白点表达下调,2个蛋白点表达上调.质谱分析高丰度表达的差异蛋白分别为:未知蛋白、增殖相关基因A、解链蛋白Up1、交替拼接因子ASF-3、cofiln 1、真核转录启动因子5A、β半乳糖苷酶结合凝集素、Pi类谷光苷肽-S-转移酶.结论:诺帝能诱导人恶性胶质瘤细胞SHG-44分化,并呈一定的时效及量-效依赖性,分化后的差异蛋白涉及到细胞增殖、分化、凋亡及基因转录调控等多个方面.     

去甲二氢愈创木酸诱导体外恶性胶质瘤细胞凋亡的研究

目的：观察去甲二氢愈创木酸（nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44细胞凋亡的影响,并探讨其发生的可能机理。方法：采用MTT（methy thiazolyl tetrazolium)法检测细胞增殖抑制的情况。利用光镜和电镜观察及TUNEL法检测体外培养细胞的凋亡情况,用免疫组织化学,原位杂交和图像分析等方法检测bcl-2基因mRNA和蛋白的表达水平。结果：（1）一定浓度（100μmol/L）的NDGA处理SHG-44细胞不同时间后,在NDGA抑制细胞增殖的同时,也可诱导此细胞发生凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞数增加越明显;（2）免疫组化染色结果表明,一定浓度的NDGA处理细胞不同时间后,出现SHG-44细胞bcl-2蛋白表达水平降低,且随着作用时间的延长,这种趋势更加明显,与细胞凋亡的发生呈负相关;（3）原位杂交结果显示;NDGA处理细胞不同时间后,出现SHG-44细胞bcl-2基因mRNA的表达水平降低,结果与免疫组化检测一致。结论：NDGA可诱导SHG-44细胞的凋亡,这种作用可能与其下调bcl-2基因的表达有关,确切机制有待进一步深入研究。     

病理学精品课件的制作体会

着眼于教育信息化的发展趋势和社会对高素质人才的需求,在病理教学中以学生为核心,以优质课堂设计为指导,通过优化整合教学内容、精心集成教学素材、精致美工制作精品课件以优化教学进程、增强教学效果、提高教学质量；充分发挥教师的主导作用与学生的主体作用,打造优质课程,创设一流教学文化.     

跨学科专业组织《干细胞生物学》课程教学的实践与思考

干细胞生物学是近几年生物医学领域的一门新兴前沿学科,通过跨学科组织从事干细胞生物研究的专家教员队伍开展《干细胞生物学》选修课教学,面向全校多专业高年级学员实施,受到广泛好评。课程的开展一方面有助于拓展学生知识视野,促进其创新思维培养;同时体现了教研结合相长,医学人文教育也有机融入于教学过程。     

应用AP-PCR法分析去甲二氢愈创木酸对胶质瘤细胞基因组甲基化状态的影响

背景与目的:应用甲基化敏感性AP-PCR法探讨去甲二氢愈创木酸(NDGA)诱导人恶性胶质瘤细胞系SHG-44细胞分化过程中基因组甲基化状态改变.材料与方法:用甲基化敏感性AP-PCR方法检测SHG-44细胞基因组甲基化状态.结果:经NDGA处理后,胶质瘤细胞基因组甲基化水平增高.结论:甲基化敏感性AP-PCR为基因组甲基化状态检测所优选.     

TNF在犬严重烧伤早期脑水肿中的变化及意义

目的 探讨严重烧伤早期血浆TNF的变化与脑水肿形成的关系。方法 犬52只分为对照组（n=6)和单烧组（n=6)、乳酸钠液组（n=20)及葡萄糖液组（n=20)。将致伤组犬制成50％TBSAⅢ度创面，于伤前及伤后6、12、18、24h动态测定各组犬血浆TNF值并与脑病理组织学及含水量变化对比分析。结果 严重烧伤早期脑水肿模型（葡萄糖液组）伤后TNF水平和脑含水量呈持续升高，伤后24h达峰值。电镜下伤后6h后毛细血管内皮细胞及血管周围胶质细胞终足肿胀，神经细胞出现空泡状现象，毛细血管内皮细胞，神经细胞及轴突呈不同程度的缺血性改变。随着观察时间的延长，这种改变逐渐明显，以伤后24h表现最为显著。结论 TNF的变化对严重烧伤脑水肿的发生发展有一定的影响。     

乳腺癌pS2蛋白表达的临床意义

目的 探讨乳腺癌pS2蛋白表达与临床病理因素的关系，评估其作为乳腺癌预后判断和内分泌治疗指标的价值。方法 采用免疫组化法检测75例乳腺癌组织中pS2蛋白及雌激素受体(Estrogen receptor，ER)、孕激素受体(Progesterone receptor，PR)的表达，分析pS2蛋白阳性表达与病人年龄、月经状况、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移、病理类型和ER、PR的关系。结果 pS2蛋白表达阳性率为33．3％，其表达与病人年龄和病理类型有关，与肿瘤大小无关，绝经前较绝经后、腋窝淋巴结有转移者较无转移者pS2阳性率高，但无统计学差异。pS2蛋白表达与ER、PR有关，但并不完全一致。结论 乳腺癌pS2蛋白的表达与部分临床病理因素有关，能在一定程度上反映病人的预后。pS2阳性表达可能是乳腺癌内分泌治疗的合理指征，但pS2不能取代ER、PR的检测。     

诺帝对永生化人宫颈上皮细胞HPV16E6基因抑制作用的初步研究

目的:研究诺帝(Nordy)对永生化人宫颈上皮细胞(H8细胞)HPV16E6基因的抑制作用和机制.方法:免疫细胞化学SP法检测诺帝作用前后H8细胞E6蛋白和p53蛋白表达;免疫细胞化学SP法检测增殖细胞核抗原MCM5表达,RT-PCR检测诺帝作用前后HPV16E6 mRNA的表达情况.结果:免疫细胞化学显示,E6和p53蛋白在对照组细胞内呈阳性表达,阳性物分别位于胞浆和胞核,经100μmol/L诺帝处理72h后,H8细胞E6蛋白和p53蛋白表达明显减弱,与对照组相比,差异有显著性.MCM5蛋白在对照组细胞内呈强表达,呈棕黄色分布于胞核内,经100μmol/L诺帝处理96h后,MCM5的表达明显下降.用浓度10μmol/L诺帝处理H8细胞72小时后,H8细胞的HPV16E6 mRNA表达量与对照组表达量无明显差异,而较高浓度的诺帝(50μmol/L,100μmol/L,200μmol/L)处理H8细胞72小时后,H8细胞的HPV16E6 mRNA表达量相比对照组有明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:诺帝具有一定抑制HPV16病毒的作用,主要表现在抑制HPV16E6基因的mRNA表达,进而影响E6基因的转录,导致病毒E6蛋白和p53蛋白表达降低,降低永生化细胞MCM5表达,抑制细胞的增殖活性.     

乙醛脱氢酶1在结直肠癌中的表达及临床意义

目的检测乙醛脱氢酶1(ALDH1)在结直肠癌中的表达,探讨其与结直肠癌临床病理特征的关系。方法收集西南医院2006-2010年送检的结直肠癌组织及正常结直肠组织标本各75例,取结直肠癌与正常结直肠组织标本各70份,采用免疫组织化学法检测其ALDH1的表达,采用Real time RT-PCR、Western blotting检测其余各5例结直肠癌及正常结直肠组织中ALDH1的表达情况。结果免疫组织化学染色表明,ALDH1主要表达于结直肠癌肿瘤细胞和正常结直肠黏膜上皮细胞的胞质内,且在正常结直肠组织的阳性表达率(83%)显著高于结直肠癌组织(37%,P=0.000)。ALDH1 mRNA在正常结直肠组织的表达水平是结直肠癌组织的1.4~17倍。Western blotting检测结果显示,ALDH1在正常结直肠组织中的表达是结直肠癌组织的1.02~3.99倍。统计分析显示,ALDH1的表达与结直肠癌患者的年龄、性别以及肿瘤部位、浸润深度、分化程度、淋巴结转移、Dukes’分期等无相关性(P>0.05)。结论 ALDH1在正常结直肠组织中的表达显著高于结直肠癌组织,其表达与结直肠癌患者的临床病理特征之间无显著相关性。