LMP1调节鼻咽上皮与鼻咽癌组织中p27与RPLP0蛋白的表达

目的: 观察p27和核糖体磷酸化蛋白大亚基P0(RPLP0)蛋白在潜伏膜蛋白1(LMP1)阳性鼻咽癌细胞中的表达,揭示蛋白质之间的相互作用规律及临床病理学意义。方法: 采用Western blotting分析p27和RPLP0蛋白表达与LMP1表达之间的关系,S-P免疫组织化学染色检测LMP1、p27和RPLP0蛋白在30例鼻咽上皮组织和60例鼻咽低分化鳞状细胞癌中表达,并分析其临床病理学意义。结果: (1)LMP1在鼻咽上皮和鼻咽低分化鳞状细胞癌中的阳性表达率分别为73.3%和90.0%;(2)与LMP1(-)组织比较,p27蛋白在LMP1(+)的鼻咽上皮和鼻咽低分化鳞状细胞癌中表达降低,而RPLP0蛋白表达与之相反;(3)p27蛋白和RPLP0蛋白表达与鼻咽癌患者年龄、LMP1蛋白的表达、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05),患者年龄小、LMP1(-)、无淋巴结转移、TNM I期和II期时,p27蛋白表达阳性率较高,而RPLP0蛋白表达则反之(P<0.05)。结论: LMP1在鼻咽上皮和鼻咽低分化鳞状细胞癌中下调p27和上调RPLP0蛋白的表达;鼻咽癌患者年龄小、LMP1(-)、无淋巴结转移、TNM I期和II期时,p27蛋白表达阳性率较高,而RPLP0蛋白表达则与之相反。     

LMP1-CTAR3对鼻咽癌干细胞SP18生长的影响

背景：课题组前期构建了CTAR3缺失突变型LMP1（LMP1△232-351）表达载体,初步了解该活性区在LMP1发挥作用中扮演十分重要的角色。目的：观察LMP1-CTAR3对鼻咽癌干细胞SP18生长的影响。方法：采用逆病毒感染方式,建立稳定表达LMP1及CTAR3缺失突变型LMP1（LMP1△232-351）的鼻咽癌干细胞SP18细胞系,通过细胞生长曲线、软琼脂集落形成实验和平皿克隆形成实验观察LMP1△232-351对鼻咽癌干细胞SP18生长的影响,然后选用流式细胞术检测细胞周期,计算细胞增殖指数。另外,利用Western-blot检测细胞中JAK3蛋白的磷酸化水平。结果与结论：①与SP18-LMP1细胞比较,SP18-LMP1△232-351细胞生长速度减慢,增殖指数降低（P〈0.01）。②在SP18-LMP1△232-351细胞中JAK3的磷酸化水平低于SP18-LMP1细胞。结果说明LMP1-CTAR3可能通过影响SP18细胞中JAK3的磷酸化,下调细胞的增殖指数,降低促细胞增殖的能力。     

AKT-p27Kip1-Cyclin E在胃癌组织中的表达及意义

目的:探讨AKT、p27Kip1与Cyclin E表达在胃癌发生发展中的意义.方法:收集2008-01/2010-01湘潭市第一人民医院和南华大学附属南华医院的活检标本和胃癌手术切除标本,包括正常胃黏膜组织14例（胃镜活检标本）、非典型增生胃组织10例（胃镜活检标本）、胃癌组织94例、癌旁组织49例,淋巴结转移胃癌组织...     

EGCG通过降低Notch1和Jagged1表达抑制鼻咽癌干细胞SP18的增殖

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）抑制鼻咽癌干细胞SP18增殖的机制。方法采用M1Tr法检测EGCG抑制SP18细胞增殖的IC50;选用细胞生长曲线、平皿克隆形成实验和软琼脂集落形成实验观察EGCG对鼻咽癌干细胞SP18增殖的影响;采用Westernblot检测NotcM和Jagged1蛋白表达。结果EGCG抑制SP18细胞增殖的IC50值为149．02mg／L;EGCG呈浓度和时间依赖性抑制SPl8细胞的增殖（n=3,P〈0．05）;EGCG呈浓度依赖性抑制Notch1和Jagged1蛋白的表达。结论EGCG能有效抑制鼻咽癌干细胞SP18的增殖,其可能通过降低Notch1和Jagged1蛋白的表达而发挥作用。     

NF-кB介导LMP1在鼻咽癌干细胞SP18增殖中的作用

目的探讨LMP1-CTAR2影响鼻咽癌干细胞SP18增殖的作用机制。方法采用逆病毒感染方式,建立稳定表达LMP1及CTAR2的TRADD活性区突变型LMP1(LMP1TRADD)的鼻咽癌干细胞SP18细胞系(空载体pLNSX为阴性对照),通过细胞生长曲线、软琼脂集落形成实验、平皿克隆形成实验和流式细胞术观察LMP1TRADD对鼻咽癌干细胞SP18增殖的影响。同时利用Western-blot检测细胞中NF-кB P65蛋白的表达。结果 (1)SP18-LMP1细胞生长较SP-pLNSX细胞加速,增殖指数增加(n=3,P<0.01)。(2)SP18-LMP1TRADD细胞的生长速度较SP18-LMP1细胞减慢,增殖指数降低(n=3,P<0.01)。(3)SP18-LMP1TRADD细胞中NF-кB P65蛋白的表达水平较SP18-LMP1细胞降低,与SP-pLNSX细胞相似。结论 NF-кB通过介导LMP1-CTAR2胞内信号,降低SP18细胞的增殖指数,影响细胞的增殖。     

胃癌碳酸酐酶Ⅱ mRNA表达的临床病理意义

目的 探讨碳酸酐酶Ⅱ（CAⅡ）在胃癌中表达的临床病理意义。方法 采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法分析30例胃癌中CAⅡ的表达。结果 RT-PCR发现30例胃癌标本中,较其对应正常胃粘膜组织CAⅡ表达下调为50%。10例胃癌无淋巴转移中CAⅡ表达下调30%（3/10）,20例胃癌伴淋巴转移中CAⅡ表达下调60%（12/20）,两者差异有显著性（P〈0.05）。结论 胃癌中存在CAⅡ表达下调,其表达下调与胃癌的发生和转移相关。     

血管基膜衍生多功能肽抗人结肠癌作用研究

目的 研究重组血管基膜衍生多功能肽（vascular basementme mbranederived muldfunction pepude，VBMDMP）的抗人结肠癌作用。方法 体外培养人结肠癌细胞系（SW480）细胞和中国仓鼠卵巢细胞系（CHO-K1）细胞。采用MTT比色法检测重组VBMDMP对SW480细胞选择性抑制增殖作用；胎盼蓝染色细胞计数法检测重组VBMDMP对SW480细胞和CHO-K1细胞生长曲线的影响；人结肠癌（SW480）细胞裸鼠异种移植瘤模型治疗实验观测重组VBMDMP体内抗人结肠癌作用。结果 重组血管基膜衍生多功能肽具有选择性抑制体外培养人结肠癌细胞系SW480细胞增殖和生长作用，呈剂量依赖性。而对CHO-K1细胞的增殖活性影响小。重组血管基膜衍生多功能肽对SW480细胞裸鼠异种移植瘤生长具有显著抑制作用．呈剂量依赖性。1、5、10mg／kg重组VBMDMP的肿瘤生长抑制率分别为：63％，79％和83％；瘤重抑制率分别为：62％、66％和75％。10mg/4kg重组VBMDMP的肿瘤生长抑制率和瘤重抑制率均接近100mg／kg环磷酰胺（CTX），高于20ms／kg 血管生成抑制剂烟曲霉素衍生物TNP-470。结论 重组血管基膜衍生多功能肽对人结肠癌细胞增殖和生长具有显著抑制作用。     

LMP1-CTAR3调节CK19和vimentin蛋白在鼻咽上皮与鼻咽癌中的表达

目的 观察LMP1-CTAR3调节的CK19和vimentin蛋白在鼻咽上皮和鼻咽癌中的表达,揭示蛋白质之间的相互作用规律.方法 采用SP免疫组化染色检测LMP1、CTAR3、CK19和vimentin在30例鼻咽上皮组织和60例鼻咽低分化鳞状细胞癌中的表达.结果 ①LMP1在鼻咽上皮组织与鼻咽低分化鳞状细胞癌中的阳性表达率分别为73.3％和90％;②与LMP1(-)组织比较,CK19蛋白在LMP1(+)的鼻咽上皮组织与鼻咽低分化鳞状细胞癌中的表达降低(P＜0.05);③与LMP1(-)组织比较,vimentin蛋白在LMP1(+)的鼻咽上皮组织与鼻咽低分化鳞状细胞癌的表达升高(P＜0.05).结论 LMP1-CTAR3在鼻咽上皮组织与鼻咽低分化鳞状细胞癌中下调CK19蛋白和上调vimentin蛋白的表达.     

EGCG影响NF—κB入核后的周期阻滞效应

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）调节肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的胃癌SGC-7901细胞核转录因子κB（NF—κB）入核后的周期阻滞效应。方法胃癌SGC-7901细胞分4组：空白对照组（常规培养换液）、TNF-α实验组（终浓度10ng／mL的TNF—α,培养60min）、EGCG组（终浓度为60μg／mL的EGCG作用24h后再加终浓度10ng／mL的TNF-α,培养60min）、阳性对照药物组（NF—κB通路阻断剂吡咯啉烷二甲基硫脲终浓度100μmol／mL预处理细胞30min后,再加终浓度10ng／mL的TNF-α,培养60min）。Western blot方法观察EGCG作用前后NF—κB蛋白在胞浆内及核内的变化;流式细胞术检测EGCG调节NF—κB入核前后细胞周期分布的变化。结果EGCG60μg／mL作用24h可有效抑制NF—κB入核。TNF—α作为NF—κB入核促进剂可以明显促进SGC-7901细胞由G1期进入S期;EGCG或吡咯啉烷二甲基硫脲（PDTC）,分别预处理SGC-7901细胞后,再以TNF-α处理细胞,结果呈现明显的G1期阻滞效应,且该效应呈浓度依赖性。结论EGCG能够抑制TNF-α诱导的NF—κB入核,并可能通过此机制发挥诱导细胞周期阻滞的作用。     

HSP90α/β蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

目的　观察热休克蛋白90α/β（heat　shock　protein　90α/β,HSP90α/β）在胃癌组织中的表达及临床意义,为胃癌的早期诊断与分子病理分型提供有价值的实验资料。方法　采用免疫组织化学染色结合组织芯片,观察HSP90α/β蛋白质在正常胃黏膜组织、癌旁组织及胃癌组织中的表达;然后分析HSP90α/β蛋白质在胃癌组织中表达的临床意义。结果　免疫组织化学染色结果显示,胃癌组织中HSP90α/β蛋白质表达的阳性率高于正常胃黏膜组织和癌旁组织（P<0.05）;癌旁组织中表达的阳性率高于正常胃黏膜组织（P<0.05）;淋巴结转移患者组织中表达的阳性率高于无淋巴结转移者（P<0.05）;Ⅲ～Ⅳ期患者组织中表达的阳性率高于Ⅰ～Ⅱ期（P<0.05）。结论　HSP90α/β蛋白质的表达与胃癌组织的发生、分化程度、淋巴结转移及TNM分期有关,即随着胃癌组织分化程度的降低、淋巴结转移的发生及TNM分期的增加而表达升高。