反义核酸技术应用研究的最新进展

本文综述了１９９４年度反义核酸在抗肿瘤、抗病毒、调节免疫功能、基因功能、细胞凋亡、发育和遗传、神经系统、受体研究和Ⅰ－Ⅱ期临床试验研究中的重要进展。     

一种新的稳定反义核酸的方法

反义核酸(ASON)特异地结合和干扰与RNA和(或)DNA互补序列的能力,对控制细胞和病毒基因的表达提供了一个很有价值的工具。但由于它们在血清和细胞中能很快被3'外切核酸酶降解,所以用于治疗是不稳定的。为了防止ASON被各种核酸酶降解,已有人在低聚物里对磷酸二酯主链进行化学修饰,以提高ASON对酶的稳定性,但磷被替代修饰后产生一个新的手性中心(New center of     

人骨髓成骨细胞培养法的改良及其体外成骨能力

目的：探讨简便、易行的人达成骨细胞体外培养方法,研究骨髓基质在体外培养条件下的成骨能力。方法：抽取人骨髓组织,梯度离心后置于含１００ｍＬ／Ｌ小牛血清的ＤＭＥＭ培养液中,培养２４小时换液,稳定伟代后改用含地塞米松和β－甘油磷酸钠的条件增大２液,用倒置显微镜观察、组织化学染色、四环素荧光标记等方法进行观察。结果：传代细胞４天～５天即可传代,在条件培养液中２ＷＫ形成多层结构,并聚集成黑色结节。培养细胞Ａ     

ASODN对白细胞抗原I类基因表达的影响

目的 为观察针对乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｘ基因特异性反应核酸（ＡＳＯＤＮ）对２２１５细胞表面白细胞抗原Ｉ类基因（ＨＬＡ－Ｉ）表达的影响。方法 人工合成互补于ｘ基因关键区的三段反义核酸，用流式细胞仪检测ＡＳＯＤＮ对２２１５细胞表面ＨＬＡ－Ｉ表达的影响，细胞原位杂交观察作用细胞内ＨＬＡ－ＩｍＲＮＡ含量变化，同时用ＰＡＰ－ＥＬＩＳＡ法检测作细胞上清中ＨＢｘＡｇ的含量，结果 三段ＡＳＯＤＮ均能抑制ＨＢｘＡｇ     

佐剂CpG ODN对HBV基因疫苗诱导抗体产生的影响

目的 探讨人工合成的ＣｐＧ ＯＤＮ作为佐剂对乙肝病毒基因疫苗诱导小鼠产生抗ＨＢｓ的影响。方法 构建编码乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）表面抗原蛋白Ｓ的重组真核表达质粒ｐＣＲ３．１－Ｓ作为ＨＢＶ基因疫苗,人工合成含ＣｐＧ ｍｏｔｉｆ的硫代磷酸寡核苷酸作为佐剂,以ＢＡＬＢ／ｃ小鼠作为实验动物进行免疫接种,采用ＥＬＩＳＡ法检测免疫小鼠的抗ＨＢｓ应答。结果 与生理盐水作为佐剂组相比较,应用ＣｐＧ ＤＯＮ组小鼠产生更     

应用S基因转染的Sp2/0细胞作为靶细胞研究HBV基因疫苗的细胞免疫应答

构建编码ＨＢｓＡｇ 蛋白的重组真核表达质粒ｐＣＲ３－１Ｓ作为ＨＢＶ 基因疫苗, 免疫接种Ｂａ１ｂ／ｃ 小鼠。以重组质粒ｐＣＲ３－１Ｓ转染的Ｓｐ２／０ 细胞作为靶细胞, 采用５１Ｃｒ ４ｈ 释放法, 体外检测免疫小鼠的淋巴细胞杀伤功能。结果显示, 与空载体对照组相比较, ＨＢＶ基因疫苗可诱导Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠产生ＨＢＶ 特异性细胞毒性Ｔ 细胞应答（ Ｐ＞ ０－０５） , 提示以Ｓｐ２／０ 基因转染的细胞作为靶细胞, 检测免疫Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠淋巴细胞的杀伤功能是可靠的。     

放大内镜结合窄带成像技术和醋酸-靛胭脂染色联合多层螺旋CT对早期胃癌及癌前病变的诊断效能及临床意义

目的 分析放大内镜结合窄带成像技术（ME-NBI）和醋酸-靛胭脂染色联合多层螺旋CT对早期胃癌及癌前病变的诊断效能及临床意义。方法 选取2019年2月-2022年3月于该院就诊的202例疑似早期胃癌及癌前病变患者作为研究对象,所有患者均进行ME-NBI、醋酸-靛胭脂染色和多层螺旋CT检测;采用受试者操作特征曲线（ROC curve）,分析不同检查方法对早期胃癌及癌前病变的诊断价值,以胃癌病理结果为金标准,采用四格表,分析ME-NBI、醋酸-靛胭脂染色联合多层螺旋CT和三者联合对早期胃癌及癌前病变的诊断价值。结果 ME-NBI和醋酸-靛胭脂染色两者联合检查的图像质量明显高于各自单独检查,差异均有统计学意义（P <0.05）。早期胃癌及癌前病变患者临床特征中的分化程度比较,差异有统计学意义（P <0.05）。ME-NBI诊断早期胃癌及癌前病变的曲线下面积（AUC）为0.853,准确度为85.64%,敏感度为88.37%,特异度为83.62%,醋酸-靛胭脂染色诊断早期胃癌及癌前病变的AUC为0.814,准确度为81.68%,敏感度为83.72%,特异度为80.17%,多层螺旋CT...     

IL-2的真核表达载体对乙肝病毒基因疫苗的免疫佐剂效应

单以乙肝病毒S区基因疫苗 (pCR3 1 S)或联合IL 2真核表达载体 (pDOR IL 2 )注射BALB/c小鼠 (H 2 d)股四头肌 ,ELISA法检测小鼠血清抗HBs,4h51Cr释放法检测小鼠脾细胞CTL活性。免疫 8周后 ,单注射pCR3 1 S及共注射IL 2真核表达载体的小鼠血清 45 0nmA值分别为 1 2 4± 0 1及 1 98± 0 17。CTL细胞杀伤活性分别为 (5 0 5± 6 4) %、 (6 1 9± 7 1) % ,两组均有明显差异 (P <0 0 1)。脾细胞悬液经抗CD4+ 单克隆抗体处理后CTL细胞杀伤活性分别为 (4 8 3± 5 9) %、 (5 6 2±6 1) % ,抗CD8+ 单克隆抗体处理后分别为 (10 6± 1 4) %、 (13 6± 1 3) %。结果表明 ,IL 2的真核表达载体能够提高小鼠对DNA疫苗的免疫应答 ,CTL细胞杀伤活性主要由CD8+ 执行。基因疫苗可能用于预防及治疗HBV感染。     

人DC-SIGN真核表达载体的构建及在K-562细胞中的表达

目的构建含人DC-SIGN基因的真核表达载体,探讨DC-SIGN在K-562细胞中的表达,为研究丙型肝炎病毒(HCV)与DC-SIGN的相互作用奠定基础.方法分离人外周血单个核细胞,体外诱导分化为树突状细胞(DC);提取细胞总RNA并反转录为cDNA,设计上下游引物,利用PCR技术扩增DC-SIGN片段,连接入克隆载体pGEM-T easy;应用双酶切回收基因片段,定向克隆入真核表达载体pCDNA3.1;通过脂质体介导的基因转染技术将pCDNA3.1-DC-SIGN和空载体转入K-562细胞,应用G-418筛选稳定表达DC-SIGN的K-562细胞,以DC-SIGN单抗通过免疫荧光法检测K-562细胞的表达产物.结果 PBMC体外成功刺激分化为DC,含DC-SIGN基因的克隆载体pGEM-DC-SIGN经酶切、PCR及测序鉴定分析正确,pCDNA3.1-DC-SIGN经酶切、PCR鉴定分析正确,DC-SIGN可在K-562细胞表面稳定表达.结论 DC-SIGN可在K-562细胞中大量表达,为进一步研究DC-SIGN在HCV感染中的作用奠定了基础.     

硫糖铝联合法莫替丁治疗120例急性胃炎疗效分析

目的观察硫糖铝联合法莫替丁对急性胃炎患者的治疗效果。方法从我院消化内科接诊的急性胃炎患者中抽取120例,分为观察组与对照组,观察组使用硫糖铝与法莫替丁联合治疗,对照组只单纯使用法莫替丁治疗。对比观察两组患者的治疗效果。结果观察组患者的有效率（96．67％）明显高于对照组患者（85．00％）,差异有统计学意义（／9〈0．05）。结论硫糖铝联合法莫替丁能够对急性胃炎产生理想的治疗效果,且比单独使用法莫替丁更为有效,具有在临床中进一步推广应用的价值。