内皮抑素基因的获取及其分泌型质粒构建的研究

目的：通过分离、克隆、重组出内皮抑素基因并测定其基因序列，探讨单独或联合其它血管抑制因子基因及其表达产物经纯化作为生物制品可用于肿瘤治疗的研究。方法：采用RT-PCR技术自肝癌组织中扩增出内皮抑素目的基因片段，采用pEZZ18为分泌型质粒载体构建含内皮抑素基因的重组质粒并在大肠杆菌DH5α内进行表达。结果：成功获得内皮抑素基因并经序列测定证实。序列分析显示与已发表的内皮抑素基因无明显差异。克隆至pEZZ18载体构建成功含内皮抑素基因的分泌型重组质粒。结论：构建的重组质粒具有外分泌特性，为成功分泌表达内皮抑素、快速纯化及临床应用打下良好基础。     

恶性肿瘤自杀基因治疗中GCV和ACV体外抑瘤作用的比较研究

目的：用含有HSV-TK基因的重组腺病毒/丙氧鸟苷系统（AdTK/GCV)及该重组病毒/无环鸟苷系统（AdTK/ACV)，在体外分别对4种肿瘤细胞进行抑瘤实验，比较GCV、ACV对肿瘤细胞的抑制效果。方法：将同滴度AdTK感染的4种肿瘤细胞分别加入GCV、ACV，用MTT法测定OD值，计算细胞抑制率，用SPSS统计软件进行数据分析。结果：相同浓度的GCV与ACV相比，对肿瘤细胞的抑制率无显著差异。结论：由于ACV最大耐受量是GCV的4倍，且价格低廉，故在AdTK自杀基因治疗中可用ACV取代GCV。     

肝细胞癌基因治疗的体外实验研究

目的 :构建一种对肝细胞癌有直接、间接治疗作用的重组腺病毒。方法 :用PCR方法扩增CD基因和glyES基因片段 ,插入腺病毒穿梭质粒。用细菌内同源重组方法与腺病毒骨架质粒重组构建出重组腺病毒质粒。经脂质体介导转染293包装细胞扩增获取重组腺病毒rAd CDglyES。用MTT法检测其对肝癌细胞株 (SMMC -7721)的生长抑制率及其表达产物对经ECGF处理的脐静脉血管内皮细胞 (ECV -304)增殖的影响。结果 :纯化的重组腺病毒滴度为1×1013 3TCID50/L ,对SMMC 7721的生长抑制率达 (82 1±8 3) % ,与对照组 (24 6±14 1) %比较有显著性差异 (P<0 01)。浓缩的转染了该重组腺病毒的细胞培养上清液对ECV 304细胞增殖的抑制率为(78 7±1 8) % ,而同样浓缩的转染了对照重组腺病毒rAd CD的细胞培养上清液的抑制率仅为 (24 2±9 7) % ,两者亦有显著性差异 (P<0 01)。结论 :rAd CDglyES在体外对肝癌细胞具有直接和间接抑瘤作用     

AdTK治疗肺癌的实验研究

目的：构建含HSV—TK基因的重组腺病毒AdTK，在两种肺癌细胞和鼠肺癌模型中对AdTK／GCV系统进行抑瘤买验研究。方法：采用同源重组法构建AdTK，用MTT法测定AdTK／GCV系统对H460、PG49人肺癌细胞的生长抑制率，建立T739鼠肺癌模型，观察AdTK／GCV系统对瘤体大小及鼠存活期的影响。结果：成功构建AdTK，AdTK转染H460、PG49细胞后对细胞抑制率随AdTK、GCV及药物作用时间的增加而增高，有显著性差异，小鼠体内实验中观察到AdTK／GCV系统对鼠肺癌有明显生长抑制作用，且明显延长了小鼠的存活期。结论：本文建立的AdTK／GCV系统在体内外对肺癌细胞均有明显抑制作用，为AdTK用于基因治疗奠定了基础。     

含HSV-TK基因的重组腺病毒的构建及其对肿瘤细胞的抑制作用

目的 :构建含HSV -TK基因的重组腺病毒AdTK并观察AdTK/GCV系统对体外培养的PG49、H460、MCF -7和HeLa4种肿瘤细胞株的抑制作用。方法 :采用同源重组法构建AdTK ;用MTT法测定细胞生长抑制率。结果 :已成功构建了AdTK ;AdTK/GCV系统对4种肿瘤细胞的生长抑制率随AdTK、GCV浓度及作用时间的增加而升高。结论 :所构建的AdTK/GCV系统对4种肿瘤细胞株有明显的抑制作用     

含胞嘧啶脱氨酶基因重组腺病毒体内抑瘤作用的研究

目的：构建含胞嘧啶脱氨酶基因（CD基因）重组腺病毒AdE1CMVCD，用自杀基因治疗系统AdE1CMVCD/5-氟胞嘧啶（5－FC）对小鼠肺腺癌进行体内抑瘤作用的实验研究，方法：建立T739小鼠肺腺癌荷瘤模型，瘤体内导入AdE1CMVCD,腹腔注射5－FC，观察各组小鼠瘤体和生存期差异以及瘤体组织切片病理变化，结果：从实验中观察到AdE1CMVCD/5-FC系统对小鼠肺腺癌有明显的抑制生长作用，与对照组荷瘤小鼠相比，治疗组荷瘤小鼠生存期明显延长，结论：AE1CMVCD与5－FC联合在体内对肺癌有明显的抑制作用。为临床肺癌基因治疗提供了可靠的理论及应用依据。     

弱势群体致腹泻肠道原虫感染调查

弱势群体包括儿童、老人以及其他在身体上或精神上受到创伤的人群。随着社会的进步，弱势群体的经济与卫生状况等日益受到各围的关注。在美国、英国、日本等发达国家，不断有关于弱势群体大肠埃希菌、HIV病毒感染情况以及精神状况和犯罪行为调查，尤其是对老人身体及精神状况调查的报道日渐增多。弱势群体中老年人因抵抗力下降，容易发生感染性疾病。本次仅对养老院老人肠道寄生原虫感染情况进行了调查，以便为我国弱势群体的健康评估提供科学依据。     

重组腺病毒rAdCDglyES体内抑瘤作用的研究

目的：探讨重组腺病毒rAdCDglyES对肺癌的体内抑、杀瘤作用。方法：建立近交纯系C57BL小鼠Lewis肺癌模型：于小鼠荷瘤部位注射定量的重组腺病毒rAdCDglyES并给予5-氟胞嘧啶。通过观测小鼠瘤体大小、重量，中位生存期．及组织病理学改变判定疗效。结果：对荷瘤小鼠连续10d的治疗观测后发现，实验组与对照组之间平均瘤重有显著性差异（P〈0．05）；对荷瘤小鼠的中位生存期比较发现实验组较对照组天数有显著性差异（P〈0．05）；对实验组和对照组肿瘤进行HE染色后病理检测，镜下所见，含ES基因的实验组小鼠瘤组织血管数明显少于对照组，仅为对照组的53．85％（14／26）。结论：rAdCDglyES／5-FC对C57BL小鼠的Lewis肺癌有明显的抑杀瘤作用。     

腺病毒为载体的HSV1-TK基因对肿瘤细胞系抑制作用的研究

目的：用E1区缺失的含HSV1－TK基因和CMV启动子的重组腺病毒AdE1CMVHSV1-TK(AdTK)前体药物GCV即AdTK/GCV系统，观察其在体外对PG49、H460、MCF－7、Hela 4种建株肿瘤细胞系的抑制作用、旁杀伤效应和AdTK/GCV系统处理的肿瘤细胞培养上清液对肿瘤细胞的杀伤效应。方法：采用MTT法测定细胞生长抑制率，AdLacZ作为对照病毒。结果：细胞生长抑制率随重组病毒的浓度、前体药物的浓度及作用时间的增加而升高，而对照病毒则没有显示出对肿瘤细胞明显的抑制作用。旁杀伤效应显示，细胞抑制率随导入AdTK病毒的肿瘤细胞比例的增加而升高。另外肿瘤细胞呈现出上清液浓度依赖性抑制，其生长抑制率随上清液浓度的增加而升高。结论：AdTK/GCV系统对4种肿瘤细胞系有明显的抑制作用及旁杀伤效应。     

含HSV1-TK基因重组腺病毒的构建及对小鼠肺癌的抑制作用

目的　观察含单纯疱疹病毒 1型胸苷激酶 (HSV1- TK)基因和 CMV启动子的重组腺病毒Ad E1 CMVHSV1- TK(Ad TK)对 L795小鼠肺癌细胞和 T739近交纯系小鼠肺癌的抑制作用。方法　采用同源重组的方法在人胚肾 2 93细胞中构建重组腺病毒 Ad TK ,用 PCR方法鉴定 ;TCID50 (5 0 %组织细胞感染量 )方法滴定病毒 ;将荷瘤小鼠分为 DMEM对照组 ,Ad L ac Z对照组 ,Ad TK实验一组 ,Ad TK实验二组 ;连续观察各组小鼠肿瘤的生长速度以及存活期。结果　 PCR证实了 TK基因的导入 ;动物实验结果显示实验组小鼠瘤体的生长速度低于对照组 ,且生存期长于对照组 ,均有统计学差异。肿瘤组织病理切片显示对照组肿瘤组织比实验组生长旺盛。结论　可在人胚肾 2 93细胞中同源重组构建重组腺病毒 Ad TK,且能达到治疗有效滴度 ;Ad TK/ GCV系统对小鼠肺癌具有明显的治疗效果。