解毒消癥饮诱导胃癌细胞凋亡相关基因表达的研究

目的：探讨中药复方解毒消癥饮对人胃癌细胞凋亡相关基因表达的影响。方法：将人胃癌细胞株BGC-823分成空白对照组及药物干预低、中、高剂量组,分别加入空白对照血清和相应剂量的解毒消癥饮大鼠含药血清,培养24h、48h和72h;免疫荧光染色法检测细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Fas及Fas-L的表达,应用激光共聚焦显微镜观察并做半定量分析;另行电镜制样、观察。结果：胃癌细胞经解毒消癥饮含药血清干预后,Bax、Fas表达明显增加（P〈0.05）,且随药物浓度增加该趋势更加明显,Fas-L则随药物浓度的增加表达明显减弱（P〈0.05）;Bcl-2表达量无明显变化。电镜见胃癌细胞出现早期凋亡现象,主要为细胞核异染色质边聚;线粒体嵴消失、基质深染。结论：解毒消癥饮可能通过调控胃癌细胞Bax、Fas及Fas-L等基因,从而促进细胞凋亡,并降低细胞免疫逃逸的功能。     

健骨颗粒含药血清对成骨细胞增殖的影响

目的：探讨健骨颗粒含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响。方法：采用酶消化法培养SD大鼠成骨细胞,健骨颗粒含药血清干预,以生理盐水大鼠血清为对照,运用MTT法、流式细胞术检测成骨细胞增殖情况及细胞周期分布。结果：与同浓度生理盐水血清相比,20%健骨颗粒含药血清能明显促进体外培养成骨细胞增殖（P〈0.05）,明显降低G0/G1期细胞分数（P〈0.01或P〈0.05）,提高S期、G2/M期细胞分数和增殖指数（P〈0.01或P〈0.05）。结论：健骨颗粒含药血清能推进体外培养成骨细胞细胞周期,从而促进成骨细胞增殖。     

松果体及其褪黑素影响胸腺T细胞发育周期

目的 探讨松果体对胸腺分化发育时细胞周期的影响。方法 选用清洁级SD大鼠,分为正常对照组、假手术对照组、松果体摘除、松果体摘除 褪黑素腹腔注射7．5mg／kg组和松果体摘除 褪黑素腹腔注射15mg／kg组。术后4、8周取材。用ABC法染胸腺cyclin A、cyclinE阳性细胞,计算机图像分析仪测量各阳性细胞面积及其染色强度。以碘化丙啶(PI)一步插入性DNA定量荧光染色法,流式细胞术测定胸腺T淋巴细胞不同细胞周期的分布状况。以Rrr-PCR法检测褪黑素对胸腺细胞周期依赖性激酶1β表达的影响。结果 松果体摘除对胸腺cyclin E表达的影响甚于对cyclin A的影响,促进cyclinE的合成,松果体摘除后胸腺细胞周期的变化表现为G1期减少,S期和G2 M期百分比增多。补充褪黑素后上述改变有所恢复,但与剂量不成线性关系,且对皮髓质影响有所不同。褪黑素能促进胸腺细胞表达细胞周期依赖性激酶1β。结论 松果体摘除能显著影响胸腺细胞分化发育,补充褪黑素能缓解相关影响。     

松果体及褪黑素对大鼠胸腺CD4+/CD8+T细胞分化发育的影响

目的：探讨松果体和褪黑素对胸腺T细胞分化发育的影响。方法：实验组为松果体摘除组和松果体摘除 褪黑素组。ABC法染胸腺CD4^ 、CD8^ 细胞。流式细胞术测定胸腺和血液T淋巴细胞CD4^ 、CD8^ T亚类。结果：松果体摘除后胸腺明显萎缩,并随时间延长而加剧,补充褪黑素后胸腺重量逐渐恢复。松果体摘除后胸腺和血液中CD4^ T细胞百分比无明显波动;胸腺CD8^ T细胞比例上升,但血液CD8^ T细胞比例则下降;补充褪黑素后胸腺CD4^ T细胞在低剂量组略有下降,而高剂量组则显著升高,胸腺和血液CD8^ T呈下降趋势,双阳性细胞比例恢复正常,双阴性细胞比例则上升。结论：松果体能显著影响CD8^ T细胞的分化发育和释放,降低血液CD8^ T细胞的比例。补充褪黑素能缓解相关影响。     

松果体褪黑素对大鼠胸腺CD4~+ CD25~+调节性T细胞发育及其相关基因Foxp3的影响

目的研究松果体摘除及补充褪黑素对大鼠胸腺CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg细胞)产生、输出及其相关基因叉状头/翅膀状螺旋转录子(Foxp3)表达的影响。方法选用雄性清洁级SD大鼠120只,分为正常组、假手术组、松果体摘除组、松果体摘除+褪黑素低剂量组[腹腔注射7.5mg/(kg·d)]和松果体摘除+褪黑素高剂量组[腹腔注射15mg/(kg·d)],术后4、8周取材。应用流式细胞检测技术、RT-PCR法及免疫组织化学染色法观察并分析松果体摘除及补充外源性褪黑素后胸腺及外周血CD4、CD25双阳性细胞数量及胸腺Foxp3表达的变化。结果松果体摘除术后无论4周或者8周胸腺CD4+ CD25+ Treg细胞数量均无明显变化,补充褪黑素后双阳性细胞数量呈时间、剂量依赖性明显增加;松果体摘除术后4周外周血CD4+ CD25+ Treg细胞数量明显增加,但补充褪黑素后恢复正常,而术后8周各组之间无显著性差异;半定量RT-PCR及免疫组织化学结果显示,松果体摘除后4周大鼠胸腺Foxp3表达水平明显升高,补充高低两种剂量褪黑素后均有所下降并达到正常水平,而松果体摘除后8周各组之间Foxp3的表达无明显差异。结论松果体摘除对胸腺CD4+ CD25+ Treg细胞的产生无明显影响,但导致大鼠胸腺Foxp3的转录和翻译明显增加,胸腺CD4+ CD25+ Treg细胞的输出增加,而补充外源性褪黑素后能逆转上述异常,长时间作用则其影响逐渐消失。     

透骨消痛胶囊干预膝骨性关节炎软骨下骨重塑分子机制探讨

目的 观察透骨消痛胶囊干预骨性关节炎软骨下骨重塑的作用及机制.方法 128只新西兰大白兔随机分4组,除正常组外均按改良Hulth法造模.正常组、模型组予生理盐水10 mL/d灌胃,对照组予壮骨关节丸水溶液10 mL/d灌胃,实验组予透骨消痛胶囊水溶液10 mL/d灌胃,术后分批分次处死取材.RT-PCR法检测软骨下骨c-fos、β-Catenin、RANKL和软骨MMP-1 mRNA的表达.结果 与正常组比较,造模后6周、9周、12周,实验组各指标表达均较高(P＜0.05).与模型组比较,造模后1周,实验组c-fos mKNA表达较低(P＜0.05);造模后6周,实验组RANKL、MMP-1 mRNA表达较低(P＜0.05);造模后9周和12周,实验组各项指标表达均较低(P＜0.05).与对照组比较,造模1周后,实验组c-fos mRNA表达较低(P＜0.05);6周时实验组RANKL、MMP-1 mRNA 表达较低(P＜0.05);9周、12周后,实验组β-Catenin、MMP-1 mRNA表达较低(P＜0.05).结论 透骨消痛胶囊可改变软骨下骨重塑的速率和模式,最终减轻软骨下骨硬化.     

健骨颗粒抗去卵巢大鼠骨质疏松的血清代谢组学研究

目的 运用代谢组学方法从物质代谢角度探讨健骨颗粒治疗绝经后骨质疏松症的机制。 方法 60只大鼠随机分为正常组、模型组和健骨颗粒组，健骨颗粒组给予健骨颗粒药液灌胃，其余组分别给予等量生理盐水灌胃干预。分别于术后6周和12周取股骨、胫骨、腰椎骨进行骨密度及骨生物力学检测，取腹主动脉血进行液相色谱-质谱（LC-MS）检测，综合单变量和多变量统计分析，鉴定并筛选血清代谢物。结果 模型组较正常组骨密度和骨最大载荷显著下降，健骨颗粒组与模型组相比明显恢复，表明造模成功且健骨颗粒组有恢复正常的趋势。模型组血清代谢谱与正常组分离，健骨颗粒组接近正常组。筛选出硬脂酸、皮质酮及泛酸等27个差异代谢物，分别与不饱和脂肪酸、类固醇激素的生物合成及泛酸和辅酶A生物合成等通路有关，涉及脂代谢、核酸代谢及氨基酸代谢等。结论 健骨颗粒可能通过调节多种代谢通路改善绝经后骨质疏松症。     

清眩降压汤对自发性高血压大鼠（SHR）大脑保护作用的实验研究

目的：探讨清眩降压汤对自发性高血压大鼠（SHR）大脑保护作用的实验研究。方法：40只SHR随机平均分为中药高剂量组、中药低剂量组、西药组（替米沙坦）、模型组（矿泉水）,另取10只wistar大鼠作为正常血压对照组（自由饮水）,连续治疗8周,每周检测血压1次;8周结束后水合氯醛麻醉取血、处死,取大脑;生化检测循环NO、TNOS、iNOS、cNOS,HE染色检测大脑病理,免疫组化学检测大脑组织中淋巴管生成因子2和iNOS的表达。结果：清眩降压汤单次给药不能降低大鼠血压,连续治疗8周大鼠血压未见明显降低（P〉0.05）;西药组大鼠收缩压获得显著降低（P〈0.01）,舒张压未见显著降低（P〉0.05）。模型组大鼠收缩压升高达25 mmHg（P〈0.01）,舒张压变化不明显（P〉0.05）。所有治疗组大鼠循环NO水平均高于模型组大鼠（P〉0.05）,中药和西药均可升高大鼠cNOS水平,降低iNOS（P〈0.05）,各组间TNOS水平无显著差异（P〉0.05）。结论：清眩降压汤可以控制SHR的收缩压进一步升高,减轻由于高血压导致的SHR脑部损害,其机制需要进一步探索。     

EDTA脱钙方法的实验观察

骨骼组织是一种坚硬的结缔组织,有机成分类骨质和无机成分骨盐2种成分紧密结合形成骨基质,使其变得十分坚硬,不能直接制片。我们实验工作中要获得一张优质的骨切片,均需脱钙处理,使钙盐溶解,组织变软后才能制作切片,然后进行HE染色、特殊染色和免疫组化等观察。在诸多脱钙方法中,笔者在实践中认为化学螯合物(EDTA)脱钙法是一种较为理想、可行的方法,特别适合科学研究。本实验在以前工作基础上[1,2],选用骨质疏松模型大鼠的股骨作为研究对象,以HE和TNF-α免疫组化染色作为考察指标,以浓度、温度和时间作为考察因素,对EDTA脱钙方法进行了L4(23)正交实验,现报道如下。