透骨消痛胶囊干预膝骨性关节炎软骨下骨重塑的分子机制

背景:前期研究表明透骨消痛胶囊能有效治疗膝骨性关节炎,且对膝关节软骨有保护作用,软骨下骨重塑在骨性关节炎病理进程中起重要作用。目的:观察透骨消痛胶囊干预骨性关节炎软骨下骨重塑的作用及并探讨其作用机制。方法:新西兰大白兔分为正常组、模型组、壮骨关节丸组、透骨消痛胶囊组4组。除正常组外动物均按改良Hulth法造模。正常组、模型组兔每天给予生理盐水灌胃;壮骨关节丸组兔每天给予壮骨关节丸水溶液灌胃;透骨消痛胶囊组兔每天给予透骨消痛胶囊水溶液灌胃。结果与结论:造模后6,9,12周,透骨消痛胶囊组软骨下骨CyclinD1基因、胰岛素样生长因子1、细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达均显著高于正常组(P<0.05)。与模型组比较,造模后1周,透骨消痛胶囊组Cyclin D1 mRNA表达较低(P<0.05);造模后6周,透骨消痛胶囊组细胞核因子κB受体活化因子配体表达较低(P<0.05);造模后9,12周,透骨消痛胶囊组各项指标表达均较低(P<0.05)。与壮骨关节丸组比较,造模1周后,透骨消痛胶囊组Cyclin D1 mRNA表达较低(P<0.05);6周时透骨消痛胶囊组细胞核因子κB受体活化因子配体表达较低(P<0.05);9,12周后,透骨消痛胶囊组胰岛素样生长因子1mRNA表达较低(P<0.05)。提示透骨消痛胶囊可改变软骨下骨重塑的速率和模式,最终减轻软骨下骨硬化。     

OA护膝对实验性骨关节炎MDA、SOD和NO的影响

探讨OA护膝对兔实验性骨关节炎MDA、SOD和NO的影响,选择日本大耳白兔60只,随机分为6组,分别测定关节滑膜及血液MDA、SOD、NO浓度。结果表明OA护膝可以有效抑制氧自由基、NO的生物效应,从而延缓关节软骨的退变。     

针灸特定穴教学的几点体会

针灸特定穴,是指十四经脉中具有特定名称、特别含义和特殊治疗作用的腧穴.可分10类,即原穴、络穴、背俞穴、募穴、郄穴、八会穴、下合穴、八脉交会穴、交会穴、五输穴.据不完全统计,针灸学中的特定穴总数为250个左右,如果排除部分重复的腧穴,还有225～ 230个,占全身十四经穴总数的62.5％.经过前人的长期临床实践及不断总结,现已形成比较完整的体系.特定穴治疗效果显著,临床应用广泛,故在腧穴总论授课时应把特定穴部分讲好、讲透,有助于初学者对课程后面经络腧穴各论及治疗总论等章节的理解和掌握,帮助初学者更好地掌握各类特定穴的主治特点,为将来临床实践打下坚实的理论基础.     

BMSCs体外分离培养的实验研究

目的 探索一种正确的BMSCs抽取、分离和体外培养方法，建立BMSCs体外培齐体系。方法倒置相差显微镜观察BMSCs细胞生长情况及形态变化特点。结果培养的BMSCs呈多种形态，有粗细不均的胞质突起，并且呈集落样生长。二代细胞形态更加单一，呈均匀生长，细胞因相互接触而产生接触抑制。大白鼠BMSCs经体外培养后生长活跃．具有良好的形态特征及生长特点。结论全骨髓贴壁培养法是分离BMSCs的一种比较理想的方法。     

经皮穴位电刺激对大学生运动员血清LA、CK的影响

目的观察经皮穴位电刺激对大运动量体能训练大学生运动员血清乳酸（LA）、肌酸激酶（CK）的影响。方法将45个大学生男性运动员随机分为对照组、治疗1组、治疗组2,每组15人。各组进行2周的大运动量训练,分别于训练前和训练后对各组主观体力感觉进行评估并检测运动员血清LA、CK值。结果对照组运动员训练前后血清LA、CK值相比有非常显著性差异（P<0.01）;治疗1组和治疗2组前后血清LA、CK含量相比（P<0.05）;训练后,治疗1组和治疗2组血清LA、CK含量与对照组相比有显著性差异（P<0.05）。各组主观体力感觉评分值与训练前相比也有非常显著性差异（P<0.01）;训练后治疗1组和治疗2组主观体力感觉评分值与对照组相比都有显著差异（P<0.05）;治疗1组与治疗2组相比无显著差异（P>0.05）。结论过度的运动训练可引起机体疲劳,使血清LA和CK含量增加,TEAS能改善运动员疲劳状态,增强运动能力,减少血清LA和CK的含量,起到防治运动性疲劳的作用。     

电针后血清对脂多糖诱导的软骨细胞IL-1β、IL-6表达的影响

目的探讨电针后血清对脂多糖(LPS)诱导的软骨细胞IL-1β、IL-6表达的影响。方法将40只两月龄雄性SD大鼠按1∶3随机分为空白组和造模组,造模组采用改良Hulth造模法建立膝骨关节炎模型并随机分为对照组、实验1组和实验2组各10只,实验1组、实验2组分别予电针治疗15 min/d、30 min/d,空白组和对照组正常饲养,共干预12周,疗程结束后,腹主动脉采血,制备实验用血清。选取4周龄健康雄性SD大鼠10只,Ⅱ型胶原酶消化法体外分离培养软骨细胞后分为正常组、模型组、电针15 min组和电针30 min组,使用LPS诱导建立体外培养软骨细胞炎症模型,并同时予大鼠空白组血清、对照组血清、实验1组血清和实验2组血清进行干预,观察4组软骨细胞干预后IL-1β、IL-6表达的变化。结果与正常组比较,模型组软骨细胞IL-1β、IL-6的表达明显升高(P0.01);与模型组比较,电针15 min组和电针30 min组软骨细胞IL-1β、IL-6表达明显降低(P0.01,P0.05)。结论电针后血清能有效抑制软骨细胞炎症因子IL-1β、IL-6的表达,从而抑制软骨细胞炎症反应。     

透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞线粒体凋亡通路的影响

目的:探讨透骨消痛胶囊含药血清影响软骨细胞线粒体凋亡通路的作用机制。方法:SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,Ⅱ型胶原原位杂交鉴定。第3代软骨细胞培养72h,SNP诱导软骨细胞凋亡,采用含药血清干预凋亡软骨细胞,Hocehst 33342染色检测软骨细胞的凋亡率,Real time RT-PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达。结果:干预24h,软骨细胞的OD值,对照组、实验2组、实验3组明显高于空白组(P<0.05);软骨细胞Bcl-2mRNA表达,对照组、实验2组、实验3组明显高于空白组(P<0.05);软骨细胞Bax、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达,对照组、实验2组、实验3组明显低于空白组(P<0.05)。结论:透骨消痛胶囊含药血清能下调软骨细胞促凋亡基因Bax、Caspase-9、Caspase-3表达,上调抗凋亡基因Bcl-2表达,抑制软骨细胞线粒体凋亡通路的信号转导。     

透骨消痛颗粒对BMSCs向软骨细胞分化的影响

目的 探讨透骨消痛颗粒舍药血清诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化的分子生物学机制. 方法 从5只4周龄SD大鼠骨髓中分离出BMSCs,体外传代培养,取第3代BMSCs分为空白对照组、软骨诱导剂组及透骨消痛颗粒组,进行培养1、2周后,通过透射电镜、RT-PCR等实验技术,观察各组对BMSCs诱导成软骨细胞的影响. 结果 透射电镜观察可见软骨表型化的BMSCs多数为近椭圆形,表面突起多,细胞核大,粗面内质网丰富,内质网池扩张明显,高尔基体丰富.在TGF-β3等诱导因子作用下,透骨消痛颗粒舍药血清可以促进Sox9 mRNA、Cbfa1mRNA在细胞分化过程中的表达,与软骨诱导剂组相比表达量有显著性差异(P<0.05). 结论 透骨消痛颗粒含药血清可促进BMSCs向软骨细胞转化,改善软骨组织的质量,延缓软骨的退化.     

透骨消痛颗粒诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞的分化

背景：研究表明,透骨消痛颗粒通过有效抑制细胞因子、基质金属蛋白酶3、氧自由基的生物效应来延缓关节宏观形态、软骨基质及软骨细胞退变的作用。 目的：验证透骨消痛颗粒含药血清促进骨髓间充质干细胞增殖和诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2006-12/2007-08在福建中医学院中西医结合研究院分子生物学实验室完成。 材料：选用清洁级4周龄SD大鼠80只。透骨消痛颗粒,由巴戟天、杭白芍、青风藤、川芎等组成,由福州屏山药厂制作。 方法：取72只SD大鼠随机分为5组,透骨消痛颗粒的水提物高剂量组、水提物中剂量组、水提物低剂量组、醇提物组各16只,空白对照组8只,分别以含14,7,3.5 g/(kg•d)药量的水溶液2 mL灌胃,对照组以等量生理盐水2 mL灌胃,2次/d,连续给药3 d后,腹主动脉采血制备血清。从另8只4周龄SD大鼠骨髓中分离出骨髓间充质干细胞,体外传代培养,取第2代骨髓间充质干细胞分为空白对照组﹑软骨诱导剂组及透骨消痛颗粒组,通过透骨消痛颗粒含药血清诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化。 主要观察指标：采用MTT法检测骨髓间充质干细胞增殖和免疫组织化学检测Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达。 结果：透骨消痛颗粒含药血清各组均能促进骨髓间充质干细胞增殖,与空白对照组相比差异均有非常显著性意义(P < 0.01),中剂量药物浓度时达到最大效应(P < 0.01),中剂量1 h组与2 h组相比差异无显著性意义(P > 0.05)。透骨消痛颗粒含药血清能增强Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达,与空白对照组相比差异有非常显著性意义(P < 0.01),与软骨诱导剂组相比差异有显著性意义(P < 0.05)。 结论：透骨消痛颗粒含药血清能有效促进骨髓间充质干细胞增殖和诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化。