SphK1-S1P信号通路的激活参与糖尿病大鼠肾损伤的研究

目的观察鞘氨醇激酶1-1-磷酸鞘氨醇(SphK1-S1P)信号通路在链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏中的激活情况。方法观察STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏中SphK1-S1P信号通路的激活情况。分别检测大鼠肾脏功能及病理指标。采用液质联用分析SphK1活性及S1P含量。并采用免疫组织化学、Real-time PCR和Western blot法检测了SphK1的表达。结果 STZ诱导的糖尿病大鼠血糖、肾重体质量比、24h尿蛋白显著升高,糖尿病大鼠肾脏系膜区肥大,细胞外基质扩展。同时,糖尿病大鼠肾脏中SphK1-S1P信号通路被激活,表现为SphK1表达和活性增加,以及S1P生成增加。结论糖尿病大鼠肾脏中存在SphK1-S1P信号通路的激活,可能参与了糖尿病大鼠肾损伤过程。     

ANP基因敲除小鼠的饲养繁育及基因型鉴定

目的繁殖和鉴定心房钠尿肽(ANP)基因敲除小鼠。方法将引进的ANP敲除杂合子小鼠进行饲养并繁殖,提取子代小鼠尾部DNA,用PCR方法检测子代小鼠基因型。结果获得子代小鼠,基因型分别为杂合子(ANP+/-)、纯合子(ANP-/-)和野生型(ANP+/+),子代小鼠纯合率为9.09%。结论 ANP基因敲除小鼠的繁育和鉴定均获得成功,为进一步研究ANP缺失对肿瘤发生发展的影响提供了理想的动物模型。     

SphK1突变抑制高糖培养的系膜细胞纤维连接蛋白过度表达的研究

目的研究鞘氨醇激酶-1（SphK1）突变是否抑制了高糖培养的系膜细胞中纤维连接蛋白（FN）的过度表达。方法采用Western blot检测FN的表达。结果系膜细胞转染了SphK1突变质粒后可消除高糖诱导的FN上调效应。结论本研究结果证明了SphK1在高糖诱导的系膜细胞FN表达过程中发挥着重要的调节作用。     

P-选择素缺失对小鼠生理特征的影响

目的 探讨P-选择素基因（P-selectin）缺失对小鼠生理特征的影响。方法 P-选择素敲除（PKO）小鼠和C57小鼠饲养于SPF级环境中,通过基因鉴定确定其为纯和PKO小鼠。观察PKO小鼠的活动状态、繁育状况,检测血常规,确定P-选择素敲除后对小鼠一般情况的影响。分别于6周和18周处死小鼠,通过伊红&苏木素（HE）染色,观察P-选择素敲除后对小鼠各个脏器组织结构的影响。结果 PKO小鼠与正常C57小鼠的繁育状况相似,血常规无异常,HE染色发现PKO小鼠肝、脾、肺、肾组织结构均较正常。结论 P-选择素的缺失不会对小鼠生殖繁育、血液造成影响,对重要的组织脏器也未见明显影响,为以后进一步研究P-选择素在疾病中的作用提供了动物模型研究理论基础。     

冬凌草甲素对PC3细胞增殖及神经内分泌分化抑制作用研究

目的 研究冬凌草甲素(Oridonin,Ori)对前列腺癌细胞增殖及神经内分泌分化的影响.方法 用Ori处理PC3细胞,利用CCK8检测Ori的半抑制浓度IC50及对PC3细胞增殖的时间依赖性;然后用Ori和NF-κB抑制剂咖啡酸苯乙酯(CAPE)处理PC3细胞,通过Western blot检测神经内分泌分化标志物(NSE,CgA)的蛋白表达情况.结果 Ori作用PC3细胞48 h时IC50约为15 μmol/L,且随浓度和时间的增加,抑制作用越显著.Western blot检测结果显示,Ori能显著抑制PC3细胞pp65、pp50和神经内分泌分化标志物NSE、CgA的表达.给予NF-κB抑制剂CAPE处理PC3细胞,抑制pp65表达时,能显著下调神经内分泌分化标志物NSE、CgA的表达.结论 Ori可以抑制PC3细胞增殖,并能通过抑制NF-κB信号通路抑制PC3细胞神经内分泌分化,为临床治疗前列腺神经内分泌癌提供了理论依据.     

APCMin/+结直肠癌癌前病变小鼠模型的生物学特性

目的 研究C57BL/6J-APCMin/+小鼠肠道腺瘤的生物学特性.方法 记录APCMin/+小鼠的繁育情况,通过统计不同周龄小鼠小肠及大肠腺瘤的数目和总体积,观察其肠道腺瘤的发生、发展规律;通过病理组织学切片,观察腺瘤的病理学变化;通过免疫组织化学染色,观察WNT信号通路相关基因的表达情况.结果 APCMin/+小鼠9周龄时肠道开始有腺瘤发生,24周龄时多数小鼠出现死亡.从9～24周龄,腺瘤体积持续增大,但小肠腺瘤数目不再增加.免疫组化染色显示腺瘤中β-catenin入核,启动WNT信号通路下游原癌基因cyclinD1活化.结论 APCMin/+小鼠是良好的结直肠癌前病变动物模型.     

六亚甲基二乙酰胺对粘液表皮样癌细胞p21、PCNA、CyclinD_1表达的影响

目的　探讨分化诱导剂六亚甲基二乙酰胺 (HMBA)诱导人粘液表皮样癌细胞后 ,p2 1、增殖细胞核抗原 (PCNA)和CyclinD1 表达的变化。方法　用 2mmol/LHMBA对培养的粘液表皮样癌细胞进行体外诱导 72h后 ,分别采用免疫组织化学、图像分析等方法对处理与未处理细胞的p2 1、PCNA和CyclinD1 表达变化进行定量分析。结果　HMBA处理的粘液表皮样癌细胞p2 1表达明显高于对照组 (P <0 .0 1 ) ;PCNA和CyclinD1 表达明显低于对照组(P <0 .0 1 )。结论　HMBA通过影响p2 1、PCNA和CyclinD1 的表达而发挥对粘液表皮样癌细胞的抑制增殖作用     

心房钠尿肽在基因敲除小鼠黑色素瘤肺转移中的作用

目的探讨心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)对黑色素瘤肺转移的作用。方法将体外培养的黑色素瘤B16F10细胞株通过尾静脉注射到心房钠尿肽敲除小鼠(ANP-/-小鼠)和C57BL/6J小鼠的体内,建立黑色素瘤肺转移模型,模型建立后第21天计数转移到肺表面的结节数目,并把肺组织包埋固定、切片、HE染色后,确定肺转移结节并计数。结果 ANP敲除小鼠肺表面转移的黑色素瘤结节数明显比C57BL/6J小鼠少,差异有显著性;ANP敲除小鼠肺微转移结节数目也明显比C57BL/6J小鼠少,差异有显著性。结论 ANP敲除显著抑制了黑色素瘤的肺转移。