褪黑激素对β—淀粉样多肽25—35片段所致皮层海马神经细胞毒性损伤的防护作用

目的:观察褪黑激素对β-淀粉样多肽25-35片段(Nβ_(25-35)所致神经细胞毒性作用的影响.方法:用相衬倒置显微镜观察原代培养的神经细胞的形态;用噻唑兰(MTT)法、乳酸脱氢酶(LDH)测定及台盼兰染色观察神经细胞的存活情况.结果:Aβ_(25-35)(20μmol/L)可引起培养的神经细胞数量减少,部分突起消失;台盼兰着色细胞数增加;神经细胞增殖能力降低;培养上清液中LDH释放量增加;褪黑激素(Ⅰ,10μmol/L)可抑制Aβ_(25-35)诱导的上述毒性损伤.结论:Aβ_(25-35)对原代培养的皮质-海马神经细胞有直接的细胞毒作用,褪黑激素对Aβ_(25-35)所致神经细胞毒性损伤具有剂量依赖性的防护作用.     

超微超顺磁性氧化铁粒子增强MRI监测兔抗原诱导性膝关节炎的初步研究

目的探索超微超顺磁性氧化铁粒子（USPIO）增强MRI监测兔抗原诱导性膝关节炎的可行性及理想成像序列。方法9只雌性新西兰大白兔，后腿右膝关节（简称右膝关节）腔注入甲基化小牛血清蛋白（mBSA）0．5ml（2mg／ml）诱导关节炎模型，后腿左膝关节（简称左膝关节）作为对照。另选3只制成假模型组。模型成功后9～28d（平均21．3d）经静脉注入USPIO（0．3ml／kg），分别于增强前、增强后24h行MRI扫描，其中2只于48、72h再行MRI扫描。扫描方案包括T1WI、FSE T2WI、短时反转恢复（STIR）序列及梯度回波（GRE）T2^＊ WI。测量USPIO增强前后滑膜的信噪比（SNR）及SNR变化（△SNR），行配对t检验，并与病理结果相对照。结果9只大白兔右膝均成功诱导关节炎模型，病理显示滑膜增生，血管翳形成，有大量吞噬USPIO的滑膜巨噬细胞浸润；MRI示滑膜增厚，厚度为（2．07±0．97）mm；关节囊积液。注射USPIO后24h，T1WI信号升高[△SNR为（41．91±27．94）％]，T2WI和T2^＊ WI信号下降[△SNR分别为（-34．92±11．77）％和（-57．24±16．05）％]，各序列增强前后SNR差异有统计学意义（P〈0．05）。注射后48h，信号强度开始恢复，72h信号基本同增强前。模型组左膝关节及假模型组双膝关节滑膜正常，关节囊无明显积液。结论滑膜巨噬细胞吞噬氧化铁粒子是引起USPIO增强MRI信号改变的基础，GRE序列是反映USPIO增强效应的敏感序列。     

丹皮酚的体内外抗肿瘤作用

目的研究丹皮酚在体外的细胞毒作用和体内抗肿瘤作用.方法噻唑兰(MTT)体外试验法和灌胃给药体内抗肿瘤试验.结果丹皮酚对体外培养的人红白血病细胞K526、人乳腺癌基因细胞T6-17和肝癌细胞BEL-7404的半数抑制浓度(IC50)依次为25.38 mg/L、10.81 mg/L和93.39mg/L.体内灌胃给予丹皮酚50 mg/kg@d-1、200mg/kg@d-1和800mg/kg@d-1ig×14 d对小鼠肿瘤HepA的抑制率分别为39.26%～42.55%、49.69%～55.32%和64.42～72.64%,P＜0.01,差异有显著性.结论丹皮酚在体外有细胞毒作用,灌胃给药有抗肿瘤作用.     

大鼠C6脑胶质瘤生长的动态观察和MR灌注成像可行性研究

目的研究大鼠C6脑胶质瘤的生长规律,初步探讨其MR灌注成像研究的可行性。方法立体定向技术将C6细胞接种在13只SD大鼠的右侧尾状核建立模型。MR增强扫描动态观察第一组8只大鼠的肿瘤生长状况。在瘤龄第17 d,对笫二组5只荷瘤大鼠进行磁共振灌注成像(MR PWI)检查,根据时间-信号曲线计算为相对脑血容量(rCBV)和最大信号下降百分比(SRRmax)值。结果第一组大鼠生存期为23.5±3.93 d。肿瘤最大径随瘤龄增长呈线性增大,体积呈指数规律增大,濒死前肿瘤的最大径为9.19±236 mm,体积为515.66±303.33 mm3。第二组大鼠皆成功进行了MR PWI检查,肿瘤组织和正常脑组织rCBV分别为179.04±46.02和87.04±23.00,SRRmax分别为39.91％±6.80％和24.11％±6.36％,肿瘤组织和正常脑组织有显著性差异(P<0.01)。结论大鼠C6脑胶质瘤肿瘤生长有规律性,可用作MR PWI研究。     

褪黑素对痴呆动物中枢神经细胞产生NO的影响

目的　观察褪黑素对不同因素诱导的痴呆动物中枢神经细胞产生NO的影响。方法　分别采用淀粉样 β多肽2 5 35片段 (Aβ2 5 3 5)和D 半乳糖 (D gal)诱导大鼠和小鼠学习记忆障碍模型 ,并采用胎鼠皮质 海马神经细胞培养来观察Aβ2 5 3 5和褪黑素对其产生NO的影响 ;NO的测定采用比色法。结果　在Aβ2 5 3 5诱导的大鼠学习记忆障碍模型上 ,大鼠脑组织匀浆中NO的水平各实验组间差异无显著性 ;小鼠皮下注射D gal 3个月后脑组织匀浆中NO含量较对照组降低 (P <0 0 1) ,褪黑素 (1、10mg/kg)可降低的NO水平 (P <0 0 1) ;Aβ2 5 3 5(1× 10 -7、1× 10 -6、1× 10 -5mol/L)能降低胎鼠皮质 海马细胞培养上清液中NO的含量 ,褪黑素 (1×10 -5mol/L)可对抗这种作用。结论　褪黑素对神经细胞产生NO的影响依赖于不同的刺激状态     

鸡Ⅱ型胶原镇痛的作用

目的观察一次性灌胃和口腔喷雾给予鸡Ⅱ型胶原(CⅡ)5、10、20 μg/kg对小鼠痛阈的影响.方法采用热板法和温浴甩尾法测定小鼠的痛阈.结果一次性灌胃给予CⅡ5、10、20μg/kg和腹腔注射哌替啶10 mg/kg可以明显升高小鼠的痛阈,且大剂量组(20 μg/kg)较哌替啶起效快,维持时间长.而口腔喷雾给予上述剂量的CⅡ有提高痛阈的趋势,但差异无显著性.结论口服CⅡ具有明显的镇痛作用.     

不同浓度右美托咪定对糖氧剥夺/再灌注诱导神经细胞凋亡的影响

目的研究不同浓度右美托咪定对糖氧剥夺/再灌注(OGD/R)诱导神经细胞凋亡的保护作用。方法应用全反式维甲酸(ATRA)和十四烷酰佛波醇乙酯酸(TPA)序贯诱导人源性神经母细胞瘤(SH-SY5Y)分化为神经细胞,均分为六组。选择OGD12h/R12h构建OGD/R模型。D0、D1、D2、D3、D4、D5组在OGD开始即刻分别加入右美托咪定0、0.1、1、10、100、1 000μmol/L。于再灌注12h后,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞凋亡法检测细胞凋亡水平,以观察不同浓度右美托咪定对OGD/R诱导神经细胞凋亡的保护作用。随后选择保护效果确切组,应用Westernblot法检测内质网(endoplasmic reticulum,ER)应激特异性蛋白-中脑星形胶质细胞源性神经营养因子(mesencephalic astrocyte-derived neurotrophic factor,MANF)含量以及促凋亡蛋白Caspase-3活性和CHOP含量。结果与D0组比较,D1、D2组细胞存活率和细胞凋亡率差异无统计学意义;D4、D5组细胞存活率明显下降,细胞凋亡率明显升高(P0.01或P0.05);D3组则显著改善并提高了OGD/R诱导后神经细胞的存活率,抑制了细胞凋亡(P0.01)。Westernblot结果显示,D3组细胞MANF含量明显高于D0组(P0.01),Caspase-3活性和CHOP含量明显低于D0组(P0.01)。结论右美托咪定在10μmol/L终浓度时对OGD/R诱导的神经细胞凋亡具有保护作用,并显著提高了细胞存活率。右美托咪定神经保护作用的机制可能与上调ER应激特异性蛋白MANF,抑制凋亡蛋白caspase-3和CHOP的表达相关。     

小鼠结肠癌中巨噬细胞金属弹力蛋白酶对血管抑素生成和肿瘤血管生长的影响

Objective To determine the pathway of macrophage metalloelastase (MME)generate active angiostatin by decomposing plasminogen and its effect on inhibiting growth of tumor and microvessel density (MVD) in vivo in mouse models. Methods The recombined plasmid pEGFPC1-MME was constructed. Thirty mice were subcutaneously inoculated with CT-26 cells that were stably transfected with pEGFP-C1-MME (MME-transfected group), 30 with CT-26 cells transfected with empty vector pEGFP-C1 (vector-transfected group) and 30 with CT-26 cells (non-transfected group). Radioiodination and radioisotope tracer were used to explore the pathway of angiostatin generation in vivo. Results SDS-PAGE electrophoresis analysis revealed that, in the PAGE gel contained the protein with molecular weights of 35 000 and 38 000, radioactivity in MME-transfected group was significantly higher than vector-transfected and non-transfected groups (P = 0. 00).Western blotting analysis demonstrated two bands containing 35 000 and 38 000 fragments in three groups. Quantification of the protein signals by image analysis revealed that the levels of 35 000 and 38 000 fragments were obviously increased in MME-transfected group (9.32±1.52 and 5.61±2.24,respectively) than those in vector-transfected (2.47 ± 0.23 and 0. 67 ± 0. 12, respectively) and nontransfected (1.21±0. 69 and 0. 86 ± 0.44, respectively) groups (P= 0.00). The average value of MVD and fluorescent express of vascular endothelial growth factor (VEGF) were lower in MMEtransfected group when compared with those in vector-transfected and non-transfected groups (P =0.00). The average tumor size in MME-transfected group was small in comparison with vectortransfected and non-transfected groups (P= 0.00). Conclusions MME is demonstrated to be one of matrix metalloproteinase that closely related with angiostatin production and has inhibitory effect on tumor growth in tumor-bearing mice.     

松果体切除及褪黑素对垂体─肾上腺轴的影响

松果体切除后ｄ１４，大鼠垂体促肾上腺皮质激素细胞呈现功能活跃状态：核仁明显，粗面内质网扩张，高尔基复合体池变宽，囊泡增大；肾上腺皮质束状带细胞出现功能受抑制表现：胞体变小，线粒体及滑面内质网减少，并伴有血清皮质酮水平下降。褪黑素（１０μｇ·ｋｇ－１·ｄ－１，×７ｄ）对肾上腺皮质束状带细胞有刺激作用：胞体变大，线粒体及脂滴增多，滑面内质网更丰富；并且能使血清皮质酮水平升高，对松果腺切除引起的皮质酮水平下降有拮抗作用。提示松果体对垂体─肾上腺轴有调节作用。