RGD序列肽修饰的丝素蛋白仿生支架材料对骨髓间充质干细胞黏附、增殖的影响

目的:为了促进种子细胞在韧带组织工程支架材料上的黏附增殖,在丝素薄膜上共价接枝人工合成的具有生物活性的GRGDS序列,并观察RGD多肽修饰的丝素蛋白支架材料对骨髓间充质干细胞的黏附、增殖的影响。方法:实验于2006-07/2007-07在华中科技大学同济医学院协和医院中心实验室和骨科实验室完成。利用市购的白色家蚕蚕丝制备丝素蛋白薄膜,在丝素蛋白支架材料表面接上海吉尔公司合成的RGD多肽,为丝素-RGD组,以未接多肽的丝素蛋白材料和细胞培养板分别作丝素组和阳性对照组。取第3代骨髓间充质干细胞接种到以上材料和培养板上培养4,12 h后,沉淀法定量检测黏附的细胞数检测细胞黏附率;培养1,2,3,4 d后比较材料上的细胞标准化细胞密度来反映细胞的增殖程度;培养24 h后对细胞骨架作免疫荧光染色,在激光共聚焦显微镜下观察两组细胞骨架的组织情况。结果:培养4,12 h时丝素-RGD组细胞黏附率均显著高于丝素组(P<0.01),但与阳性对照组无明显差异(P>0.05)。培养1,2,3,4 d时各组细胞的增殖程度无显著性差异(P>0.05)。培养24 h丝素-RGD组细胞完全铺展开,有粗大的细胞骨架组织,细胞内应力纤维清晰可见,其肌动蛋白的荧光强度显著高于丝素组(P<0.05)。结论:RGD多肽修饰能显著促进骨髓基质细胞在丝素蛋白支架材料上的黏附、铺展,但对细胞增殖无明显促进作用。     

同种异体骨软骨柱移植治疗关节软骨缺损

背景：同种异体骨软骨移植修复关节软骨损伤可以解决自体骨软骨来源有限的问题,但存在免疫排斥问题。 目的：观察以深低温保护剂保护的同种异体骨软骨柱移植修复兔关节软骨缺损的效果,并与自体关节软骨移植作比较。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-05/10在武汉协和医院骨科实验室完成。 材料：24只成年健康新西兰兔中8只用于异体骨软骨柱的制备,16只随机分成同种异体移植组和自体移植组,每组8只。 方法：使用横穿钉套筒提取兔股骨内侧髁骨软骨柱,将骨软骨柱在4 ℃条件下放入盛有10%二甲基亚砜的冻存管中2 h,将冻存管移入程序冷冻仪内以1 ℃/min速率降至-75 ℃,放入-196 ℃液氮罐底部保存3周备用。用横穿钉钻头在兔左膝关节股骨内侧髁垂直于软骨面制造缺损,缺损深4 mm,直径4.45 mm,自体移植组取右膝关节内侧髁骨软骨柱植入到左侧膝关节相应缺损处,异体移植组将经过程序性深低温冷冻保存的同种异体骨软骨柱移植到相应缺损处。 主要观察指标：术后12周观察兔关节活动度、修复组织的质地等情况。以苏木精-伊红染色观察关节软骨组织的病理变化,以半定量改良Wakitani score法进行评估。以免疫组织化学染色观察Ⅱ型胶原分泌情况。 结果：两组实验动物关节活动度正常。异体移植组移植处关节软骨面较光整,与周围正常关节软骨高度一致,结合紧密,颜色接近,与自体移植组相似。两组移植后,兔关节缺损处被透明软骨覆盖,潮线整齐,细胞排列有序,分泌大量基质,异体移植组移植处软骨深层及软骨下骨处可见微小裂隙,未见淋巴细胞和浆细胞浸润。同种自体与异体骨软骨移植组Wakitani score评分结果无统计学差异,总分接近,修复软骨Ⅱ型胶原免疫组织化学染色均强阳性。 结论：冷冻同种异体骨软骨柱移植可修复全层小面积关节软骨缺损,术后近期软骨细胞存活,可分泌软骨基质,未见明显排斥反应,与自体骨软骨柱修复的兔关节软骨缺损在组织学上相近。     

Mobilization efficiency of granulocyte colony-stimulating factor and stem cell factor to bone marrow mononuclear cells and mechanisms

The mobilization efficiency of granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) and stem cell factor (SCF) to bone marrow mononuclear cells (MNCs) in mice was observed, and the changes of CXCL12/CXCR4 signal were detected in order to find out the mobilization mechanism of stem cells. Kunming mice were randomly divided into two groups. The mice in treatment group were subjected to subcutaneous injection of G-CSF at a dose of 100 μg/kg and SCF at a dose of 25 μg/kg every day for 5 days, and those in control grou...     

成人成骨细胞骨保护蛋白的表达与年龄关系的研究

目的探讨成人成骨细胞骨保护蛋白(OPG)的表达与年龄变化的相关性.方法体外分离培养12例成人成骨细胞.年龄39～74岁,大于60岁以上和小于60岁以下者各6例.采用逆转录-聚合酶链方法(RT-PCR)检测不同年龄段OPG mRNA的表达.结果大于60岁以上组OPG mRNA表达的相对含量为0.28±0.10,小于60岁以下组为0.49±0 14,其差异有显著性(P＜0.05).结论成骨细胞分泌的OPG随年龄的增长而逐渐减少,有可能是增龄性骨丢失的重要原因.     

Chevron截骨术治疗拇外翻

目的探讨对保守治疗无效的拇外翻患者行Chevron截骨术的临床疗效。方法对15例经半年以上保守治疗无效的拇外翻患者行Chevron截骨术。结果 14例获随访,时间6~24个月。患足疼痛症状明显好转,拇外翻外形得以改善。按美国足与踝关节协会制定的AOFAS足拇趾-跖趾关节-趾间关节功能评分系统,由术前56.2分±5.6分提高至术后85.3分±4.5分(P0.05)。结论 Chevron截骨术治疗经保守治疗无效的拇外翻患者,症状改善明显,近期疗效满意。     

应用同种异体肌腱加强修复治疗陈旧性跟腱断裂

目的探讨同种异体肌腱加强修复治疗陈旧性跟腱断裂的临床疗效。方法2005年1月至2011年12月,对26例陈旧性跟腱断裂患者,采用同种异体肌腱在跟腱断裂两侧的正常跟腱组织冠状面钻孔环扎,加强修复断裂的跟腱。结果26例均获随访9～52个月,平均30．7个月,除1例术后伤口延迟愈合外,其余伤口均I期愈合,无全身或局部不良反应,无跟腱黏连再手术者,无跟腱再断裂发生。采用Arner—Lindholm疗效评定方法,优22例（84．6％）,良4例（15．4％）。结论同种异体肌腱加强修复治疗陈旧性跟腱断裂疗效满意,并发症少,手术操作简单,是一种可行的手术方法。     

踝关节镜在创伤性踝关节炎中的临床应用

目的探讨踝关节镜技术在治疗创伤性踝关节炎中的临床疗效。方法对19例踝关节创伤性关节炎患者行关节镜检查,明确关节内病变并行相应处理。结果 17例获随访,时间11～23个月。患者踝关节疼痛及活动受限等症状明显好转。按改良Mcguire踝关节评分系统评分,由术前平均59.1分±7.8分提高至术后平均84.3分±8.9分(P<0.05)。结论应用踝关节镜诊治创伤性踝关节炎创伤轻、适应证广,疗效满意。     

新鲜骨髓吸出物直接种植于支架构建组织工程韧带

背景：有关于应用新鲜骨髓吸出物直接局部注射修复韧带部分损伤的报道,少有提及应用新鲜骨髓吸出物直接种植于支架构建组织工程韧带的研究报道。目的：评价将新鲜骨髓吸出物直接种植于支架构建组织工程韧带的可行性。方法：构建丝素纤维/小肠黏膜下层复合支架后,骨髓种植组将骨髓吸出物直接种植于复合支架上;细胞种植组将骨髓间充质干细胞种植于复合支架上;以未接种任何物质的复合支架作为空白对照,检测各组细胞黏附密度、细胞增殖活性及细胞外基质分泌情况。将骨髓种植组复合物植入兔前交叉韧带横断处,12周后取材评价骨髓种植组材料体内生物相容性。结果与结论：骨髓种植组孵育4 h后的细胞黏附密度、不同时间点细胞增殖率显著高于细胞种植组（P＜0.05）。骨髓种植组及细胞种植组Ⅰ型、Ⅲ型胶原分泌量均显著高于空白对照组（P＜0.05）,但骨髓种植组及细胞种植组两组间Ⅰ型、Ⅲ型胶原分泌量差异无显著性意义。骨髓种植组材料植入兔体内未引起致死性免疫排斥反应及严重炎症反应,未见明显韧带再生及血管化。说明新鲜骨髓吸出物直接种植于支架可构建组织工程韧带,并且体内短期生物相容性良好。     

Study of Rat Osteoblasts Transfected by Transforming Growth Factor β1 Gene

Summary: In order to investigate the effect of TGFβ1 gene transfer on the biological characteristics,the effects of gene transfer and supernatant of transfected osteoblasts on the proliferation and ALP activity of osteoblasts were detected by 3H-TdR and MTT. Our results showed that TGFβ1 gene transfer had no effect on the biological characteristics and the activated supernatant of transfected os-teoblasts stimulated proliferation and inhibited ALP activity of osteoblasts. TGFβ1 gene transfer could promote the expression of TGFβ1 and the biological characteristics of transfected osteoblasts were sta-ble, which might be helpful for gene therapy of bone defects in vivo.