正常与受照大鼠组织中甲_2巨球蛋白与激肽释放酶的免疫酶标PAP法测定

甲_2-巨球蛋白(α_2-M)为多种蛋白水解酶的抑制剂,而组织激肽释放酶则是蛋白水解酶的一种。本文研究了两者在正常及辐射损伤大鼠多种组织中的分布及含量(半定量)变化,旨在探索α_2-M治疗辐射烧伤的机理。 材料与方法 Wistar雄性大鼠8只,2只正常,6只经8.5Gy~(60)Co_Υ线照射,于照后第1,3,5天各取2只大鼠的心、肝、脾、肺、肾、睾丸、腮腺、胰腺、胸腺、十二指肠及皮肤,经中性福尔马林固定,低温石蜡包埋,切片(5μm),免疫酶标PAP法染色,普通光镜下观察。 结果 ①在正常大鼠的心、肝、脾、肺、肾、睾丸、腮腺、胰腺、十二指肠及皮肤中的不同部位,均不同     

188 Re-HEDP对体外成骨细胞增殖及细胞周期的影响

目的 观察不同剂量188Re-羟基亚乙基二膦酸盐(HEDP)近距离作用对成骨细胞增殖和细胞周期的影响.方法 在体外培养的成骨细胞中加入不同放射性浓度(0,1.85,9.61,48.00,240.50,462.50,832.50和1110.00 kBq/ml)188 Re-HEDP,继续培养24 h后检测细胞的放射性计数,了解成骨细胞摄取188Re-HEDP的能力.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测成骨细胞增殖能力.测定细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,以明确成骨细胞分化功能.采用流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 成骨细胞摄取188Re-HEDP的能力较强,188Re-HEDP≤1110.00 kBq/ml时未观察到结合平台期.受188.Re-HEDP刺激后成骨细胞生长增殖旺盛、分化加强,成骨细胞存活率为(113.67±3.22)%-(122.00±6.58)%,ALP值为(0.42±0.02)～(0.50±0.05)U/L;188Re-HEDP≥33.30 MBq/ml时成骨细胞凋亡率增加[(6.26±0.09)%]并随剂量增大.188Re-HEDP作用后处于合成期的成骨细胞百分率明显增加,为(22.32±2.31)%-(35.58±5.18)%.结论 188Re-HEDP可能刺激成骨细胞增殖和分化,使合成期的细胞百分率增高.188Re-HEDP超过33.30 MBq/ml时引起成骨细胞凋亡,且凋亡率与其放射性浓度呈正相关.     

大鼠骨生物学指标的月龄特征

目的 观察大鼠骨密度、骨生物力学和骨矿元素含量的月龄特征和变化规律。方法 采用固体物理密度测试方法测量大鼠股骨和腰椎标本骨密度和体积，三点弯曲试验和压缩试验分别测试股骨最大抗弯载荷和腰椎最大抗压载荷，自动生化分析仪测试骨组织浸出液中钙、磷和镁含量，计算单位体积含量。结果 骨密度峰值区间为7-12月龄，股骨平均密度峰值为1．429(雌性)和1．399g／cm^3(雄性)，腰椎平均密度峰值为1．207(雌性)和1．204g／cm^3(雄性)。随后开始减低，12-16月龄阶段股骨密度减低明显，而腰椎出现在16-18月龄，18月龄以后骨密度变化不大。股骨抗弯强度雌性大鼠增加至12月龄(198．29N)，而雄性大鼠可持续至18月龄(323．2N)，随后逐渐减低至24月龄的211和157N。腰椎抗压能力增强至12月龄的252-263N后逐渐减低，24月龄时维持138-149N。股骨和腰椎中Ca和P的含量呈7月龄为峰值的双相变化，高龄阶段Ca含量小幅减低。镁含量随年龄变化不大。结论 骨生物学指标呈阶段性特征，7-12月龄阶段骨量相对稳定，而力学性能不断改善。12月龄后骨量开始丢失，并可能存在一个短暂快速丢失期。18月龄以后丢失减缓，骨量相对稳定。     

盐酸地尔硫草两种片剂的生物利用度比较

报道用高效液相色谱法(HPLC)对上海信谊制药厂生产的治疗心血管疾病的盐酸地尔硫(DTZ)片剂与日本产的DTZ片剂作了正常人口服后的生物利用度对照比较,结果表明:两种片剂的生物利用度相同(国产片为进口片的98.2％)。     

体外培养成骨细胞成纤维生长因子23表达及其对激素的反应

 目的 研究体外培养大鼠成骨细胞在不同分化阶段的成纤维生长因子23（fibroblast growth factor 23,FGF23）基因表达水平,并观察其对钙、磷、甲状旁腺激素（PTH）和1,25二羟维生素D［1,25(OH)₂D₃］的反应。方法 酶消化法分离培养新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,于细胞半汇合、汇合、基质堆积和矿化4个阶段收获细胞,Trizol一步法提取总RNA,Real-time PCR法检测其FGF23 mRNA水平,并通过其碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）、骨钙素（bone gla-protein,BGP）和骨桥蛋白（osteopontin,OPN）的mRNA表达水平变化评价成骨细胞分化状态。进一步取汇合细胞,分别用3.2 mmol/L氯化钙、4.4 mmol/L β甘油磷酸钠（βGP）、10^-9 mol/L rhPTH(1-34)和10^-8 mol/L 1,25(OH)₂D₃作用3 d,检测其FGF23的mRNA表达变化,结果与空白对照组比较。结果 体外培养成骨细胞生长良好,成骨细胞FGF23的mRNA水平在汇合时显著上调,为半汇合阶段的7.5倍（P<0.001）,于基质堆积和矿化时期回落至半汇合水平,提示成骨细胞FGF23的表达呈阶段特异性。10^-8 mol/L 1,25(OH)₂D₃刺激后,FGF23的mRNA表达水平明显上调,约为对照组的16倍（P<0.001）;而CaCl₂、βGP、PTH刺激后,FGF23的mRNA表达水平与对照组相比,差异无统计学意义。结论 FGF23的表达与成骨细胞的分化状态有关,1,25(OH)₂D₃能强烈刺激体外培养成骨细胞FGF23的表达。     

辛伐他汀对去卵巢大鼠脊椎椎体骨形成功能影响的实验研究

目的 观察辛伐他汀对去卵巢大鼠腰椎椎体骨形成功能的影响,评价辛伐他汀对躯干骨骼的骨质疏松是否具有预防和治疗作用。方法 6月龄雌性SD大鼠60只,每组10只,50只切除双侧卵巢分为剂量组和对照组,另10只作为假手术平行对照组。以不同剂量辛伐他汀（5mg、10mg 、20mg 及40mg /kg/d）灌胃。三个月后分别行腰4椎体的双能X线骨密度测试,周围定量CT（pQCT）纵向扫描和腰5椎体的生物力学压缩测试。结果 （1）骨密度和pQCT扫描值：10mg、20mg剂量组数值较高,但皆无统计学差异。（2）生物力学测试：10mg、40mg剂量组数值较高,但无统计学差异。结论 辛伐他汀10mg/kg/d灌胃组（相当人体口服辛伐他汀12 mg～24mg/天）在多数指标中好于其它剂量组,但未发现明显统计学差异。说明辛伐他汀对去卵巢大鼠的躯干骨骼并不具有明显的骨形成促进作用,即对脊柱椎体的骨质疏松并不具有预防和治疗的作用。     

补肾中药复方和尼尔雌醇对卵巢摘除大鼠骨丢失及血1,25(OH)2D水平的影响

 目的 以卵巢摘除法建立大鼠雌激素缺乏型骨质疏松模型,研究补肾中药复方和尼尔雌醇对卵巢摘除大鼠骨丢失和维生素D代谢的影响,探讨血清1,25(OH)2D水平与骨量丢失的相关性。方法 手术摘除雌性大鼠双侧卵巢,以子宫重、子宫重/体重、子宫内膜厚度和血E2判断卵巢摘除是否完整;以骨干重、灰重、骨密度等骨量指标和骨组织形态计量、骨代谢生化标志物等鉴定骨质疏松模型建立。将实验大鼠随机分为假手术组(SHAM)、卵巢摘除组(OVX)、卵巢摘除尼尔雌醇干预组(OVX＋CEE3)和卵巢摘除补肾中药干预组(OVX＋TCM),每组10只。手术后35天开始灌服药物,给药13周后处死,检测上述指标和血25(OH)D、1,25(OH)2D、Ca、P等指标,观察尼尔雌醇和补肾中药对切卵大鼠骨量和骨结构的改善作用。结果 OVX大鼠双侧卵巢摘除完整,雌激素缺乏诱发骨质疏松指标明显;OVX组血清钙较SHAM组明显降低(P<0.01),给予尼尔雌醇干预后血清钙明显恢复(P<0.01),而补肾中药组血清钙仍在低水平。各组血25(OH)D 水平并无明显改变,而OVX组血清1,25(OH)2D水平明显升高,较SHAM组［(38.45±10.99)nmol/L］增加64.1％(P<0.01);OVX+CEE3组血清1,25(OH)2D水平明显回落,较OVX组降低60.8％(P<0.01);OVX+TCM组血清1,25(OH)2D仍处于OVX组水平,明显高于SHAM组(P<0.01)。结论 与尼尔雌醇比较,补肾中药复方改善卵巢摘除大鼠骨量和骨结构的作用不明显,可能与其未有效改善血清低钙和代偿性高1,25(OH)2D水平有关。     

大豆苷原(DA)对成骨细胞雌激素受体(ER)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的调节作用及其受雌激素的影响(英文)

目的研究大豆苷原(daidzein,DA)对成骨细胞雌激素受体(estrogen receptor,ER)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)表达的调节作用,并观察雌激素对这种调节的影响。方法小鼠成骨细胞MC3T3-E1体外低血清(α-MEM,含2%FBS)培养,分别用0.1和10μmol/L的DA处理,采用实时定量PCR或Western blot分析细胞ERα、ERβ和PPARγ的表达变化。加入浓度均为0.1μmol/L的ER拮抗剂ICI182780或PPARγ拮抗剂GW9662,观察ER和PPARγ在DA调节中的作用。为观察雌激素的影响,采用无血清培养,在10nmol/L 17β-雌二醇(E2)条件下研究DA对细胞受体表达的作用。结果 DA抑制体外培养成骨细胞ER表达,而刺激其PPARγ表达。0.1和10μmol/L的DA分别下调ERα蛋白水平44%和38%(P<0.05),下调ERβ蛋白水平50%(P<0.05)和31%(P<0.05),上调PPARγ74%和78%(P<0.05)。ICI182780可阻断DA对ERα转录水平的抑制作用,DA对成骨细胞ERβmRNA水平的下调无统计学意义(P=0.087 4);GW9662可阻断DA对PPARγ表达的上调作用,提示成骨细胞ER和PPARγ参与自身表达调节。在10nmol/L 17β-雌二醇条件下,DA对无血清培养的成骨细胞ERα转录水平的抑制作用由28.0%～29.6%(P<0.05)增强至74.0%～82.8%(P<0.01),其对ERβ表达的抑制作用也明显增强,而对PPARγ的上调作用几乎丧失。结论 DA可通过调节ERs和PPARγ等受体表达间接影响成骨细胞的药物反应,雌激素可明显影响DA的受体调节作用。DA对细胞受体表达的调节作用可能是其对成骨细胞时间相关双相调节的重要机制之一。     

猪大脑灰质组织提取液促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖☆

背景：有研究表明大鼠脑组织提取液能够促进大鼠成骨细胞和骨髓基质干细胞的增殖。 目的：观察跨种属脑组织固有成分对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响。 方法：提取猪和大鼠大脑灰质、白质、垂体、肢体肌肉组织,分别制成匀浆提取液,并设空白对照组,各组提取液分别用于培养大鼠成骨细胞。比较各种组织提取液对成骨细胞增殖的影响。 结果与结论：与空白对照相比,猪和大鼠的大脑灰质、白质和垂体组织提取液均显著促进了成骨细胞的增殖(P < 0.05),各组间比较显示猪和大鼠的大脑灰质较白质、垂体和肌肉组织提取液促进成骨细胞增殖的能力更加显著(P < 0.05)。结果证实,猪脑组织提取液能跨种属促进大鼠成骨细胞的增殖,其中以大脑灰质的促进作用最为显著。     

血管内皮细胞培养及鉴定

虽然内皮细胞的体外研究十分重要,但在方法上仍存在一定困难。六十年代初,有关内皮细胞培养的报道均缺少对所培养的细胞进行鉴定的技术。目前由于细胞免疫化学技术及放射自显影技术的发展。并广泛应用到细胞生物学领域中,对血管内皮细胞的鉴定已成为可能。本实验旨在建立兔子主动脉内皮细胞的体外传代培养,为进一步