不同构型人α防御素-5多肽抗HSV-2感染的实验研究

目的探讨不同构型人α防御素-5(HD-5)多肽对单纯疱疹Ⅱ型病毒(HSV-2)感染的抑制作用,分析不同构型HD-5抗HSV-2活性的差异。方法 HSV-2病毒感染体外培养的绿猴肾细胞(Vero细胞),分别给予100μg/mL的HD-5/N、HD-5/Acm和HD-5/A肽处理,72h后观察细胞病变效应(CPE),并通过CCK-8法测定细胞保护率;建立HSV-2感染豚鼠生殖器实验动物模型,按照症状评分方法对不同构型HD-5多肽的体内抗HSV-2病毒感染作用进行分析。结果 HD-5/N与HD-5/Acm均能显著抑制HSV-2感染体外培养的Vero细胞(P<0.01),而HD-5/A的抗病毒作用不明显;阴道内给予HD-5/N多肽12.5μg.kg-1.d-1治疗8d能显著改善HSV-2感染豚鼠的生存状况,提高动物30d存活率(P<0.01),外阴感染症状评分显著降低(P<0.01),而HD-5/Acm治疗效果并不明显。结论天然结构HD-5多肽(HD-5/N)在体外或豚鼠阴道内应用均可发挥显著抗HSV-2感染的作用,二硫键缺失会显著影响HD-5多肽的体内抗病毒效果。     

建立矽肺犬动物模型的实验研究

目的模拟矽肺的致病过程,建立初步的矽肺犬动物模型。方法利用气管插管及呼吸机通气,将二氧化硅粉末吹入实验犬肺内,观察不同染尘剂量、不同染尘频次下,各持续时间段内(染尘前,染尘1、2、3个月)实验犬的动脉血气、胸部CT影像学、肺组织病理形态学改变。结果各组实验犬染尘前后的动脉血气水平无明显差异(P>0.05),但染尘后实验犬胸部CT均有不同程度的磨玻璃样改变,肺组织病理可见肺间质增厚,终末细支气管壁周围大量吞尘巨噬细胞聚集,有成纤维细胞增生及网状胶原纤维形成,偏光显微镜下可见肺间质内二氧化硅颗粒沉积,且染尘犬胸部CT及肺组织病理改变程度与染尘剂量、染尘频次、染尘时间呈正相关。结论经气管插管后呼吸机通气,每次按400 mg/kg称取二氧化硅粉尘吹入实验犬肺内,每周染尘1次,持续染尘3个月,可建立初步的矽肺犬动物模型。     

α-MSH和合成肽KPV对病理性应激大鼠血浆皮质酮的调节作用

目的观察不同程度烫伤大鼠血浆中皮质酮的水平及α-MSH和合成肽KPV对它的调节作用.方法采用放射免疫法检测正常对照组、轻度烫伤组和重度烫伤组大鼠血浆皮质酮的浓度;采用体内放射TNF-α、IL-1β中和抗体和α-促黑色素细胞刺激激素(α-melanocyte-stimulating hormone,α-MSH)和合成肽KPV(Ac-D-Lys-L-Pro-D-Val)等措施调节其改变.结果与正常对照组的血浆皮质酮水平(154.32±59.12 ng/mL)相比,烫伤后12 h轻烫组的血浆皮质酮浓度(1 344±376.47 ng/mL)显著升高(P＜0.01);与轻烫组相比,重烫组大鼠血浆皮质酮水平(2 680±443.23 ng/mL)升高更加明显(P＜0.01).体内注射TNFα、IL-1β中和抗体和α-MSH及KPV均能明显降低重烫组动物血浆皮质酮水平.结论重度烫伤可使大鼠血浆出现高皮质酮血症,体内注射TNFα、IL-1β中和抗体及α-MSH和KPV均可在一定程度上减轻重度烫伤所致的高皮质酮血症.     

a—MSH和合成肽KPV对病理性应激大鼠血浆皮质酮的调节作用

目的观察不同程度烫伤大鼠血浆中皮质酮的水平及α-MSH和合成肽KPV对它的调节作用.方法采用放射免疫法检测正常对照组、轻度烫伤组和重度烫伤组大鼠血浆皮质酮的浓度;采用体内放射TNF-α、IL-1β中和抗体和α-促黑色素细胞刺激激素(α-melanocyte-stimulatinghormone,α-MSH)和合成肽KPV(Ac-D-Lys-L-Pro-D-Val)等措施调节其改变.结果与正常对照组的血浆皮质酮水平(154.32±59.12ng/mL)相比,烫伤后12h轻烫组的血浆皮质酮浓度(1344±376.47ng/mL)显著升高(P＜0.01);与轻烫组相比,重烫组大鼠血浆皮质酮水平(2680±443.23ng/mL)升高更加明显(P＜0.01).体内注射TNFα、IL-1β中和抗体和α-MSH及KPV均能明显降低重烫组动物血浆皮质酮水平.结论重度烫伤可使大鼠血浆出现高皮质酮血症,体内注射TNFα、IL-1β中和抗体及α-MSH和KPV均可在一定程度上减轻重度烫伤所致的高皮质酮血症.     

烫伤大鼠血浆TNFα水平的变化及αMSH和合成肽KPV的调节作用研究

目的：观察烫伤对大鼠血浆肿瘤坏死因子－α（TNF－α）水平的变化及α－黑色素细胞刺激激素（α－MSH）和KPV合成肽的调节作用。方法：用酶联免疫吸附（ELISA）法检测正常对照组、轻度烫伤组和重度烫伤组大鼠血浆TNF－α,用烫伤前大鼠尾静脉注射TNF－α和白介素－1β（IL-1β）中和抗体有腹腔注射α－MSH和KPV等调节重度烫伤大鼠血浆TNF－α的水平。结果：与下对照组血浆TNF－α水平相比,烫伤后12小时,轻度烫伤组大鼠血浆TNF－α水平显著升高（P＜0．01）;与轻度烫伤组相比,重度烫伤组大鼠血浆TNF－α水平升高更加明显（P＜0．01）。体内注射TNF－α和IL－1β中和抗体及α－MSH和KPV均能明显减轻重度烫伤组大鼠血浆高TNF－α血症状态。结论：烫伤可使大鼠血浆TNF－α水平明显升高;体内注射TNF－α、IL－1β中和抗体及α－MSH和KPV均可在一定程度上重度烫伤后所致的血浆TNF－α增高。     

树突状细胞与肿瘤疫苗

细胞生物学、分子生物学和免疫学等学科的飞速发展,以及新的实验体系和新的技术方法的不断涌现,促进了肿瘤递呈性免疫治疗的日新月异,树突状细胞作为体内功能最强的抗原递呈细胞在以T细胞识别肿瘤抗原为核心的肿瘤生物治疗研究中展现了良好的应用前景。本文通过对树突状细胞在肿瘤疫苗中设计策略的综述,有助于更加准确地看待当今的肿瘤生物治疗。     

VEGF165基因转染真皮多能干细胞的实验研究

目的 为获得高表达生物活性血管内皮细胞生长因子VEGF165的皮肤种子细胞,拟将转基因治疗与真皮多能干细胞相结合,为难愈性创面的促愈治疗奠定基础.方法 构建真核表达载体pIRES2-EGFP-VEGF165,经脂质体法介导转染真皮多能干细胞;半定量RT-PCR检测VEGF165 mRNA的表达,Western blot和酶联免疫ELISA法检测VEGF蛋白的表达;并检测了表达产物的生物活性及转染VEGF(dermal multipotential stem cells,DMSCs)增殖活性的变化.结果 转染后VEGF165 mRNA和VEGF蛋白的表达均显著增强(P＜0.01),约为对照组的1.6倍,且转染VEGF后DMSCs的培养上清显著提高hECV304细胞增殖活性(P＜0.01).MTT结果显示转染VEGF后DMSCs增殖活性显著增高,约为转染空载体组DMSCs的2倍(P＜0.01).结论 成功获得了高水平表达并分泌具有生物活性的VEGF的基因治疗种子细胞DMSCs,为下一步动物在体进行基因治疗打下了基础.