用Streamline SP从大肠杆菌中初步分离纯化anti-HBsAg Fab最适吸附条件的选择及验证

目的 选择阳离子交换介质Streamline SP分离纯化anti-HBsAgFab的最适吸附条件。方法试管法分别测定平衡缓冲液在不同DH和不同离子强度下,阳离子交换介质Streamline SP对预分离纯化蛋白的吸附效果。用l mlSP预装柱及自装28 ml Streamline SP柱进行离子交换层析以验证吸附效果。结果NaAc-HAc作为平衡缓冲液在pH4．4、离子强度100-600mmlo/L可以使阳离子交换介质Streamline SP与蛋白吸附达到最佳效果。在该条件下用l ml SP预装柱及自装28ml SP柱进行离子交换层析,均验证了这一吸附效果。结论试管法选择的离子交换层析的最适吸附条件用于从大肠杆菌中初步分离纯化anti-HbsAg Fab切实可行。     

血浆血栓素B_2放射免疫分析法

本文报告了血浆血栓素B_2的放射免疫分析法。样品经酸化后用乙酸乙酯提取,再经石油醚提取,排除了脂肪干扰,提高了方法的准确性。抗血清以TXB_2-BSA为免疫原注射兔制备。[~3H]-TXB_2的比放射性为140ci/mmol。放射免疫分析采用非平衡法,提高了灵敏度。本法主要技术指标如下:标准曲线范围为2.5～160pg/管,三种不同浓度血浆批内CV分别为6.4、7.8、7.3％。提取示踪回收为90.3％,冷回收为92.3％。健康成人血浆测定值为127±48pg/ml。     

脊椎动物心肌微血管形态的定性观察及定量分析

随着动物种系的进化,脊椎动物由低级向高级过度,各脏器发生了一系列适应性演变,心脏从鱼类的一房一室发展到哺乳类的两房两室,心脏结构的演变必然伴随着支配心肌的微血管系统的相应改变。我们以鱼、蟾蜍、鸽、大鼠作为鱼类、两栖类、鸟类、哺乳类的代表动物。用墨汁灌注的方法显示心肌微血管,在显微镜下观     

~(111)In标记单抗对移植人结肠癌裸鼠的放射免疫显像研究

本文用双功能螯合剂DT PA将~(111)In标记于单抗2C_(10)。标记率100％,放化纯度97％,免疫荧光法检测免疫活性保持80％。~(111)In-2C_(10)以10μCi/只的剂量经腹腔注射带入结肠癌裸鼠体内,对照组动物接受同样剂量的~(111)In-正常BALB/c小鼠IgG。给药后12、24、48、72、96小时各组处死2只动物,测组织化放射性,计算T/N化值和定位指数。实验组各脏器T/N     

抗人结肠癌单克隆抗体CL_3全抗体与F(ab'''')_2片段在荷瘤裸鼠体内动态分布比较

为提高放射免疫显像(RAID)和放射免疫引导下外科手术(RIGS)的效果,用抗人结肠癌单克隆抗体(McAb)CL3,通过Pepsin消化法制备F(ab＇)_2,~(125)I标记,标记率73.1％,放化纯度99.5％,比活度4.7μCi/μg。结合分析法测定的免疫活性为56.8％,亲和常数为3.4×10~9L/mol。~(125)I-CL3全抗体标记率73％,放化纯度99.2％,比活度4.12μCi/μg,免疫活性     

~(131)I标记单克隆抗体瘤内注射对结肠癌裸鼠移植瘤的放射免疫治疗

~(131)I标记抗结肠癌单克隆抗体CL3经两种途径给药治疗LS174t结肠癌细胞系裸鼠移植瘤。大剂量治疗组(18.5MBq/鼠)观察33d,瘤内和腹腔注射两种途径均具有明显的肿瘤抑制作用,与非治疗组、单纯CL3组和单纯~(131)I组有显著差异(P<0.05),两途径之间差距不大;瘤内注射两     

人血浆ACTH的放射免疫分析及临床初步应用

ACTH在血浆中浓度很低,本文用α~(1-28)ACTH联接BSA免疫兔子,生产特异的抗体,制备了稳定的标记品。建立了放射免疫分析法,灵敏度达4pg/ml。不同ACTH浓度,平均回收率为101.8％。测定的批内和批间变异系数分别为2.3～7.0％和8.5～8.8％。整个程序历时4天,操作方便、结果稳定。本文测定健康人(20例)血浆ACTH浓度,于上午8:00的范围值为10～90pg/ml。还进行胰岛素刺激试验和地塞米松抑制试验。对5例病人测定血浆ACTH,结果与临床诊断相符。这对完善肾上腺轴功能的研究有重要的意义。     

~(111)In标记抗结肠癌单克隆抗体在移植人结肠癌裸鼠体内的放射免疫显象

自单克隆抗体问世以来,以放射性核素标记特异性抗体,进行恶性肿瘤的放射免疫显象的技术有了很大的进展。目前,普遍的观点是~(111)In是用作放射免疫显象较为理想的核素。近年来,国内的一些单位在应用核素~(131)I方面进行了一些探索和研究。在结肠癌的诊断上,选用的单抗多为抗CEA抗     

利用放射性同位素标记白蛋白的方法测定微血管通透性

本工作介绍了利用放射性~(125)I标记白蛋白测定微血管通透性的方法,并指出了该方法的优点。     

不同干扰素-γ浓度上调乳腺癌细胞系Her2/neu表达的实验研究

背景与目的:Herceptin是目前治疗Her2/neu高表达晚期转移性乳腺癌的常用分子靶向药物。如将具有强烈细胞毒作用的放射性核素131I联结到Herceptin进行放免靶向治疗,可提高Herceptin的药效。放射免疫治疗的疗效主要取决于定位在瘤体的抗体量。而肿瘤摄取标记抗体的量与肿瘤细胞靶位分子的表达量密切相关。本研究探讨不同浓度IFN-γ对乳腺癌细胞系Her2/neu的诱导效应,以选择最适IFN-γ浓度对乳腺癌细胞系Her2/neu的表达以及131I-Herceptin结合率的影响。方法:取对数生长期乳腺癌细胞系MCF-7、SK-BR-3和BT-474,实验组以终浓度为10、100、500、1000U/m l的IFN-γ诱导培养48h,对照组加入等量不含IFN-γ的培养液。每组设置3个复管。各组三种细胞Her2/neu的表达率及平均荧光强度(MFI)采用流式细胞仪(FACS)检测。采用Iodogen法对Herceptin进行131I标记,以高压液相层析法(HPLC)测定131I-Herceptin的放射化学纯度(RCP),以非竞争性饱和结合法测定三种细胞诱导前后对131I-Herceptin的结合量(Ncpm)及结合率(BR)。诱导前后三种细胞Her2/neu表达率、MFI和BR的差异采用t检验。结果:MCF-7、SK-BR-3和BT-474细胞Her2/neu基础表达率分别为8.5%、97.8%和98.2%,IFN-γ浓度分别为10U/m l、100U/m l时,三种细胞Her2/neu表达率以及MFI均未见显著性增高(t值未列出,P>0.05)。IFN-γ为500U/m l以上时,MCF-7细胞Her2/neu表达率显著提高(t=3.892,P<0.02),其它两种细胞表达率无明显变化(t值未列出,P>0.05),但三种细胞MFI均显著提高(P<0.05)。而500U/m l和1000U/m l组间Her2/neu表达率、MFI比较未见显著性差异(P>0.05)。131I-Herceptin在MCF-7、SK-BR-3及BT-474细胞的基础结合率分别为(5.3±1.5)%、(34.8±4.9)%和(36.2±4.7)%。经IFN-γ诱导后三种细胞对131I-Her-ceptin的结合率均增高,当IFN-γ浓度在500U/m l以上以及SK-BR-3经IFN-γ浓度为1000U/m l诱导时,结合率均显著提高(t值未列出,P<0.05)。Ncpm均不同程度提高,其中MCF-7增幅最明显,倍增比为2.8倍,SKBR-3和BT-474分别为1.5、1.6倍。结论:IFN-γ可以上调乳腺癌细胞Her-2/neu的表达,在一定范围内IFN-γ浓度与Her2/neu表达率及对131I-Herceptin的结合量存在相关性。