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目的:构建人乳腺癌易感基因BRCA1的真核表达载体,并对其生物学功能进行初步检测。方法利用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人BRCA1基因,将其克隆到pXJ-40-myc载体中,酶切和测序验证后转染到乳腺癌ZR75-1细胞中,通过Western印迹检测其表达情况,并用CCK8法测定细胞生长曲线。结果从人乳腺文库中扩增获得大小为5600 bp的DNA片段,并成功克隆至pXJ-40-myc载体上,经测序与目的序列完全一致;转染乳腺癌ZR75-1细胞后目的基因成功表达;细胞生长曲线结果显示,转染myc-BRCA1的乳腺癌细胞较空载体细胞生长缓慢;划痕实验说明,转染myc-BRCA1的乳腺癌细胞较空载体细胞迁袭缓慢。结论成功构建了带myc标签的人BRCA1真核表达载体,为进一步研究BRCA1在乳腺癌发生发展中的功能奠定了基础。 相似文献
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人CDK7基因真核表达载体的构建与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:构建带Myc标签的细胞周期蛋白依赖性激酶7(cyclin-dependent kinase 7, CDK7)的真核表达载体,获得其表达产物,并验证该激酶与已知相互作用蛋白P53之间的相互作用。方法应用PCR技术从人乳腺文库中扩增出CDK7全长编码区基因,将其克隆到pXJ-40载体中;继而重组质粒转染人胚肾293 T细胞,以SDS-PAGE和Western印迹鉴定表达情况;免疫共沉淀检测Myc-CDK7与FLAG-p53的相互作用。结果双酶切和基因测序鉴定显示,Myc-CDK7真核表达质粒克隆构建成功;SDS-PAGE和Western印迹结果表明,Myc-CDK7转染人胚肾293T细胞后成功表达;免疫共沉淀显示,重组Myc-CDK7与已知相互作用蛋白P53在蛋白质水平上具有相互作用,证实其具有生物学活性。结论成功构建Myc-CDK7的真核表达载体,为进一步探讨Myc-CDK7对细胞周期的调控奠定了实验基础。 相似文献
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目的:探究观察养阴解郁疏肝汤联合西药治疗围绝经期综合征(PMS)肾虚肝郁证的效果。方法:选取本院2019年5月~2020年5月收治的PMS肾虚肝郁证患者139例,采用随机数字表法分为对照组(n=69)和研究组(n=70)。对照组行芬吗通西药治疗,研究组在对照组的基础上另加养阴解郁疏肝汤联合治疗,两组均治疗2个疗程。对比分析两组治疗前后患者证候积分、雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)等性激素指标水平、生存、睡眠质量以及焦虑、抑郁评分的差异性,并对临床效果进行评价。结果:两组的临床有效率分别为92.86%和81.16%,研究组高于对照组(P<0.05)。治疗后研究组潮热汗出、烦躁易怒、抑郁寡欢、腰膝酸痛等证候评分均低于对照组(P<0.05)。与治疗前比,两组治疗后的E2及升高,FSH下降(P<0.05),LH比较无统计学意义(P>0.05)。研究组治疗后的绝经期生存质量表(MENQOL)、匹兹堡睡眠质量指数量表(PSQI)、焦虑自评量表(SAS)和抑郁自评量表(SDS)评分均低于对照组(P<0.... 相似文献
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目的克隆并表达HDAg基因,确定HDAg蛋白在细胞内定位。方法常规分子克隆、错配PCR、Western blot、RT-PCR及免疫细胞化学等。结果通过RT-PCR及错配PCR方法从1例HBV/HDV重叠感染患者血清中成功克隆出HDAg基因,生物信息学分析证实其来源于我国流行的基因I型河南株。将HDAg基因克隆于真核载体转染肝细胞,证实两种不同形式的HDAg主要定位在细胞核。结论 HDAg定位于细胞核可能是其发挥相应生物学作用的基础。 相似文献