带Flag标签的RNF26真核表达载体构建及功能验证

目的 构建带Flag标签的RING结构泛素连接酶26(Ring finger protein 26,RNF26)真核表达载体,表达Flag-RNF26的融合蛋白,通过细胞免疫荧光实验,观察其在人肝癌细胞HepG2中的定位及与带绿色荧光蛋白标签的死骨片1(sequestosome 1,SQSTM1)是否存在共定位.方法 ...     

溶质载体家族成员SLC25A39基因促进乳腺癌细胞线粒体分裂

目的 构建带Flag标签的人溶质载体家族成员蛋白SLC25A39基因的真核表达载体,在获得Flag?SLC25A39融合蛋白表达后,研究SLC25A39表达对人乳腺癌细胞线粒体稳态的影响.方法 以人乳腺文库为模板采用PCR技术扩增出人SLC25A39的编码区序列,双酶切后将其插入到带Flag标签的pcDNA3.0载体上...     

Flag-Tinagl1真核表达载体的构建及功能验证

目的 构建带Flag标签的肾小管间质性肾炎抗原样蛋白1(Tinagl1)基因真核表达载体,检测其对肝癌细胞HepG2 ERK/AKT磷酸化、生长和迁移的影响.方法 以人乳腺cDNA文库为模板,PCR扩增Tinagl1基因片段,将其插入pcDNA3.0载体,经双酶切和测序验证后,将重组质粒转染到肝癌HepG2细胞中,采用Western印迹检测重组蛋白对ERK和AKT磷酸化水平的影响,生长曲线和划痕实验检测其对肝癌细胞HepG2生长和迁移的影响.结果 双酶切和Western印迹结果表明,pcDNA3.0-Flag-Tinagl1真核表达质粒构建成功,Tinagl1可降低ERK和AKT的磷酸化水平;生长曲线和划痕实验表明Tinagl1抑制肝癌细胞HepG2生长和迁移.结论 构建了带Flag标签的Tinagl1真核表达载体,并能抑制肝癌细胞HepG2中ERK/AKT磷酸化、生长和迁移,为进一步研究Tinagl1在肝癌细胞中的功能奠定了基础.