幽门螺杆菌粘附素基因alpA的克隆与高效表达

目的 克隆并表达幽门螺杆菌粘附素AlpA基因。方法 提取幽门螺杆菌染色体基因，用PCR方法扩增alpA基因，将其克隆至表达载体pET-22B( ),转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达。结果 分离得到了1.5kb的alpA基因片段，并在大肠杆菌中实现了该基因的高效表达，在37℃诱导表达3h后，表达产物占细菌总蛋白的31．9％。表达以可溶性蛋白和包涵体两种形式存在，其中主要是包涵体的形式，目的蛋白占不溶性蛋白的64．8％。结论 幽门螺杆菌alpA基因的克隆与表达为Hp疫苗的研制打下了基础。     

科泰新~悬浊液稳定性试验

疟疾在全球尤其是热带亚热带地区广泛流行,是严重威胁人们健康的传染病。疟疾治疗药物在各种不同环境条件下的稳定性将直接影响其治疗效果。为此我们设计了该试验,通过对COTECXIN~(Dihydroanemisinin)科泰新(双氢青蒿素)悬浊液在水中28天的稳定性研究分析,我们认为其性状是稳定的。     

表达幽门螺杆菌过氧化氢酶的无抗性减毒鼠伤寒沙门氏菌株的构建

目的构建表达幽门螺杆菌(Hp)过氧化氢酶的无抗性减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗。方法采用缺失腺苷酸环化酶(△cya)、环腺苷酸受体蛋白(△crp)及天门冬氨酸β-半醛脱氢酶(△asd)的鼠伤寒沙门菌(X4072)作为宿主,将编码过氧化氢酶的基因CAT插入Asd 的组成型表达载体pYA248,通过两次转化引入宿主菌,构建表达过氧化氢酶基因平衡致死的减毒鼠伤寒沙门重组菌X4072(pYA248-CAT)。采用桥联法ELISA测定X4072(pYA248-CAT)培养上清液和裂解上清液中过氧化氢酶的抗原性,参照Meacock的方法及重组菌生长曲线的测定来确定重组菌株的稳定性,通过C57BL/6小鼠口服测定半致死量来确定重组菌的安全性。结果成功构建了表达过氧化氢酶的减毒鼠伤寒沙门菌重组菌株X4072(pYA248-CAT)。桥联法ELISA测定表明重组菌X4072(pYA248-CAT)培养上清中过氧化氢酶的含量高于菌体裂解液;重组菌pYA248-CAT在没有选择压力的情况下培养25代,随机挑选的重组菌全部都能生长,且在ELISA测定过氧化氢酶抗原时均显阳性;重组菌的生长曲线测定表明,X4072(pYA248)和X4072(pYA248-CAT)的生长状态基本一致。口服重组菌株X4072(pYA248-CAT) 1.0×1010 cfu,30 d后C57BL/6存活率仍为100%。结论成功构建了表达过氧化氢酶的无抗性的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗X4072(pYA248-CA     

金黄色葡萄球菌A蛋白的提取与纯化

金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)是构成大多数金葡菌细胞壁的一种主要成分。SPA与免疫球蛋白有高度的亲和结合能力,主要是和IgG分子的T_c段非免疫专一的结合。正是利用这个特性,使得分析和纯化免疫球蛋白的方法更加简单、快速和经济。另外,SPA在免疫酶标记、免疫萤光标记和放射免疫分析等技术中能够代替“第二抗体”。因此,在免疫学中,就许多制备和分析目的而言,SPA的应用有着广阔的前途。为此人们建立了一些提纯SPA的方法。本文仅就本实验室所采用的方法以及所得到的实验结果介绍如下。     

PTPN11第3内含子基因多态性与胃癌的相关性研究

目的研究中国汉族人群中蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型11(PTPN11)第3内含子基因的rs2301756位点多态性与胃癌发生的相关性,并探讨基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)检测此多态性的可行性与准确性。方法采用MALDI-TOF-MS对中国汉族的247例胃癌、212例非癌患者以及160例脐带血的PTPN11基因第3内含子rs2301756多态性位点进行基因分型,并用PCR产物直接测序技术对该位点的20例样本进行分型,以验证MALDI-TOF-MS技术的准确性。应用组织涂片镜检、幽门螺杆菌(H.pylori)培养、快速尿素酶、ELISA和胶体金法等5种方法来检测受试者的H.pylori感染情况。结果 20例样本PTPN11第3内含子基因rs2301756位点MALDI-TOF-MS技术分型结果与测序结果完全相符,两种方法的基因型分型结果具有很好的一致性。胃癌组和非癌对照组H.pylori(+)者分别为182例(73.68%)和160(75.47%)。H.pylori感染率在两组间无明显差异(P>0.05)。胃癌组和非癌对照组PTPN11基因在该位点的基因型频率分布符合遗传平衡状态。将G/A型和A/A型合并后与G/G型相比,带有A等位基因的个体不能影响胃癌的发生风险。根据年龄、性别、H.pylori感染对胃癌的易感性进行的分层分析发现,PTPN11基因该位点SNP与年龄、性别和H.pylori感染状态无关。结论中国汉族人群PTPN11基因第3内含子rs2301756位点SNP与胃癌发病风险无关。     

表达大肠杆菌 LT-B/pro-ST融合抗原的减毒鼠伤寒沙门菌株的构建

目的：构建表达 Ｌ Ｔ Ｂ／ Ｓ Ｔ 融合蛋白的产肠毒素大肠杆菌口服活菌疫苗候选株。方法：编码 Ｌ Ｔ Ｂ／ Ｓ Ｔ 融合蛋白的基因插入ｐ Ｙ Ａ２４８ 载体中,构建了重组质粒 ｐ Ｘ Ｚ Ｌ６６。该重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门菌 Ｓ Ｒ１１,Δ Ｃｙａ, Δ Ｃｒｐ, Δ Ａｓｄ 菌株 Ｘ４０７２。结果：此无抗药性的杂合菌株 Ｘ４０７２（ｐ Ｘ Ｚ Ｌ６６） 表达的 Ｌ Ｔ Ｂ／ Ｓ Ｔ 融合蛋白具有耐热及不耐热肠毒素的免疫原性而没有可检出的生物毒性。结论：为研究预防产肠毒素大肠杆菌腹泻提供了口服活菌疫苗候选株。     

肠毒素大肠杆菌CFA/1重组质粒的高效表达及其结构与功能分析

肠毒素大肠杆菌(ETEC)是婴幼儿腹泻和旅游者腹泻的重要致病菌。每年因 ETEC引起腹泻而死亡的婴幼儿多达百万人。ETEC 腹泻主要是由于细菌通过菌体表面定居因子定居于宿主小肠上皮细胞上,然后大量繁殖产生肠毒素而引起的。定居因子抗原1(CFA/1)是一种优势血清型菌毛,其相应抗体在阻止病原菌在宿主小肠上定居起十分重要的作用。CFA/1基因位于60MDa 的质粒上,在此质粒上有两个区域为 CFA/1表达和菌毛装配所必需。含有 CFA/1结构基因的区域称之 CFA/1-1区,含有调节基因的区域称之 CFA/1-2区。由于 CFA/1-1区和CFA/1—2区相距25MDa,给体外重组带来     

幽门螺杆菌黏附素AlpA保守区基因的克隆、序列测定及其生物信息学分析

目的 克隆幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp)4种黏附素（babA,alpA,alpB和hopZ)基因的保守区，并对其进行序列及生物信息学方法。方法 利用 ANTHEPROV4.3c软件，分析已证实的Hp4种黏附素蛋白序列，发现4种黏附素的C－端氨基酸存在保守区。选取AlpA的C－端结构基因序列作为引物进行PCR，将PCR产物定向插入载体pET-22b( )，以DNA自动分析仪进行序列测定，并以生物信息学软件分析其生物学特性。结果 克隆片段的长度为588bp，与发表的黏附素AlpA保守区基因的序列完全一致。ANTHEPROT V4．3c软件预测其蛋白质的Mr约为22500，并显示出良好的抗原性和疏水性。结论 用PCR方法，从幽门螺杆菌ssl中获取到黏附素AlpA保守区的基因序列，为研究Hp黏附素的分子机制和免疫原性奠定了基础。     

美国对生物工程的管理

简要介绍了美国对生物工程管理的历史、一般性政策、相关部门各自的管理政策以及国际上其他国家对生物工程管理的政策，这些内容将对我国的生物工程管理有一定的参考价值。     

DNA疫苗—跨入21世纪的新型疫苗

简述了ＤＮＡ疫苗的发展和研究进展。ＤＮＡ疫苗全方位地调动了机体的免疫系统，可诱导广泛的体液和细胞介导的免疫应答，其应用前景引入注目。