Trizol RNA提取法在雪貂组织的流感病毒H3N2定量PCR检测中优于RNeasy mini kit (Qiagen)柱子法

目的 比较RNeasy mini kit (Qiagen)柱子法和Trizol法提取RNA在雪貂肺和肠组织H3N2 SYBR Green PCR定量中的去干扰作用,从而找到适合该定量体系的RNA提取方法.方法 比较Trizol法,RNeasy mini kit柱子法,改良RNeasy mini kit柱子法1和改良RNeasy mini kit柱子法2提取肺肠组织RNA的质量,RNA逆转录成cDNA后,利用SYBR Green PCR方法检测样品中H3N2的载量,比较产物的特异性,综合评价RNA提取方法.结果 4种方法提取的肺和肠组织的RNA质量不相同,紫外分光光度仪测得RNeasy mini kit柱子法提取的RNA 的A260/280低于1.8,其余3种方法的A260/280在1.8～2.1之间,A260/230只有Trizol法能达到2.0左右,其余3种方法均远低于2.0.电泳可见Trizol法提取的RNA有3条带:28 s、18 s和5 s,而RNeasy mini kit柱子法的RNA除了有28 s、18 s外,还有基因组DNA,改良RNeasy mini kit柱子法1和2提取的RNA只有28 s和18s带.RNA逆转录后进行荧光定量PCR,从溶解曲线看,不论是鼻甲刮取物还是肺肠组织的样品模板,4种方法获得的样品与标准品均为单一峰溶解曲线峰,并且波峰位置重叠.而鼻甲刮取物定量的产物跑琼脂糖凝胶电泳均为单一的特异性条带,而肺肠组织的产物电泳发现:Trizol法获得的模板定量产物与标准品一致,为单一的特异性条带,而其它3种方法获得的模板则均有非特异性条带.结论 鼻甲刮取物的病毒定量选用RNeasy mini kit柱子法提取定量结果与Trizol法一样可靠,说明对于简单样品该体系及引物非常适用,结果可信.对于组织样品肺和肠,Trizol法获得的样品定量结果比其它3种方法可靠.     

塞来昔布减轻糖尿病大鼠心肌细胞纤维化的实验研究

目的 探讨塞来昔布对糖尿病心肌病大鼠心肌细胞纤维化的影响.方法 将Wistar大鼠30只随机分为对照组（A组）、糖尿病心肌病组（B组）和糖尿病心肌病塞来昔布治疗组（C组）各10只.取大鼠心肌组织,经常规石蜡切片、染色后测定胶原纤维面的密度值;采用RT-PCR法测定TGF-β1 mRNA表达情况.结果与A组相比,B组大鼠心肌组织的胶原纤维密度值、TGF-β1 mRNA表达明显升高（P〈0.05）.C组大鼠的胶原纤维、TGF-β1 mRNA表达明显低于A组和B组（均P〈0.05）.结论塞来昔布可能通过抑制TGF-β1减轻糖尿病大鼠心肌纤维化.     

注射用头孢替坦二钠及有关物质的HPLC法测定

建立了HPLC法测定注射用头孢替坦二钠及其有关物质.采用C<,18>色谱柱,以0.1 mol/L磷酸-甲醇-乙腈-冰乙酸(1 520:160:160:160)为流动相,检测波长254nm.头孢替坦二钠在55.45～554.5μg/ml浓度范围内线性关系良好.平均回收率为100.5%,RSD为0.73%.     

大鼠肝硬变病程中血清透明质酸的动态变化

目的通过系统测定大鼠肝硬变病程中血清透明质酸HA的动态变化,来探讨其用于肝纤维化的测试和监控的临床价值.方法利用CCl4损伤SD大鼠造成肝硬变模型(n=6),综合分析不同时间取材的实验组和正常对照组(n=6)之间血清肝纤维化指标-血清HA浓度、肝组织病理改变以及HA在肝组织中的免疫组织化学定位.结果在大鼠肝硬变的病变发展过程中,血清HA含量在3(7.98ng/mL),6(20.10ng/mL),9(229.73ng/mL),12(324.74ng/mL)周时,均较正常组(0周:0.21 ng/mL)有极显著升高(P＜0.01),其中9 wk和12 wk的血清HA含量比正常对照组分别高出1094和1546倍.而在0→3 wk、3→6 wk、6→9 wk、9→12 wk时,血清HA平均增加的倍数依次为38,2.5,¨.4和1.4倍.同时,肝组织病理学结果(HE染色)显示,CCl4诱发的肝纤维化大鼠在9 wk以前无明显变化;9 wk～12 wk时,与正常肝组织相比,有明显肝细胞坏死,同时伴有肝细胞质分布不均匀程度的加深及红细胞增多成团现象.此外,12 wk组还出现明显的肝细胞气球样变性现象及局部炎症细胞浸润.同期用免疫组化法观察HA在不同期肝硬变大鼠肝内的分布,镜检发现只在12 wk有少量HA的特异性分布.结论动态观察血清HA数值可用于早期肝纤维化的预测和肝纤维化的分期.     

季节性流感病毒H1N1 BALB/c鼠肺适应株的建立及其分子机制

目的 建立季节性流感病毒H1N1的鼠肺适应株，并对适应的分子机理进行研究。方法 以病毒滴鼻感染小鼠，通过在BALB/c小鼠肺组织中连续传代，观察小鼠存活情况及肺病理改变，来获得季节性流感病毒H1N1的鼠肺适应株。结果 季节性流感H1N1 A/Brisbane/59/2007病毒野生型毒株，经过在小鼠体内进行8次传代后，毒力逐渐增强，从无致病力到致死率达到100%，对鼠肺适应株与野生型毒株进行基因比对，发现适应株HA基因发生了3个有义突变。结论 野生季节性低致病力H1N1流感病毒可经在小鼠中经过多次传代而获得高致病力H1N1鼠肺适应株，HA蛋白89位Thr至Ile的突变对毒力的增强起决定性作用。     

市售不同产地辛夷中挥发油成分分析及木兰脂素的含量测定

目的：分析比较市售湖南、广西两个不同产地辛夷中挥发油的化学成分,并对其木兰脂素的含量进行测定。方法采用GC-MS联用技术对湖南、广西两个产地的辛夷挥发油成分进行分析,采用HPLC对两个产地辛夷中木兰脂素含量进行测定。结果湖南、广西产地的辛夷挥发油分别分离鉴定出62和64种化合物,主要成分为桉油精、β-蒎烯、2-茨酮、香叶基芳樟醇、α-松油醇等。采用HPLC测定辛夷中木兰脂素的含量,结果显示,木兰脂素在2~256μg/mL浓度范围内与峰面积呈良好线性关系（r=0.99996,n=6）,平均加样回收率为100.32％,RSD为0.04％（n=6）。木兰脂素含量为：湖南产地（0.87±0.05）%、广西产地（0.81±0.02）%。结论 GC-MS法能快速、简便、高效地检测辛夷挥发油的化学成分,HPLC简便可靠、重复性好,可用于辛夷中木兰脂素的含量测定。     

针刺与康复训练对卒中后吞咽障碍影响的临床进展

吞咽障碍常见于脑血管病如脑出血、脑梗死等,系指因食物或液体进入咽喉而引发剧烈呛咳等症,目前中西医均无特效药物,而针刺治疗与康复训练对吞咽功能的改善大有裨益。笔者查阅国内近3 年有关针刺与康复训练对脑卒中后吞咽障碍影响的文献并总结分析,结果表明二者均能有效改善卒中患者的吞咽功能,联合使用疗效更显著。但目前临床上对针刺与康复介入的时机众说纷纭,针刺治疗本病的方法较庞杂,可比性较差,缺乏标准化治疗方案,今后临床应多注重高质量、优选化的治疗方案,以期在临床中广泛推广应用。     

544例高龄老年患者肺间质纤维化与糖尿病的关系分析

目的初步了解高龄老年患者HRCT提示肺间质纤维化与糖尿病关系。方法对我院2011年1月1日至2011年12月31日行胸部HRCT检查的高龄老年患者行总结分析。结果 HRCT提示肺间质纤维化患者合并糖尿病的发生率高于非纤维化患者(P<0.05);糖尿病患者合并肺间质纤维化的发生率高于非糖尿病患者(P<0.05)。结论高龄老年患者中肺间质纤维化与糖尿病关系密切。     

甲型H1N1流感病毒感染小鼠的发病机制

目的 甲型H1N1 流感病毒A/California/7/2009感染BALB/c小鼠,研究甲型H1N1流感病毒病毒性肺炎发病机制.方法 4～6 周龄雌性BALB/c 小鼠60只,随机分为2组,实验组和对照组,每组30只.CA7 流感病毒滴鼻制备甲流病毒感染小鼠模型.攻毒后第5天解剖实验和对照组小鼠,取肺组织,测定肺组织中IL-2,IL-6,TNF-α含量.结果 结果实验组肺组织中IL-6,TNF-α,水平明显高于对照组,IL-2水平明显低于对照组,差异均有显著性(P<0.05).结论 IL-6、TNF-α、IL-2这3种细胞因子在感染甲流病毒后的显著性变化与病毒感染后的肺组织病理损伤有密切的关系.     

雪貂感染流感病毒H3N2动物模型的建立

目的建立甲型流感病毒H3N2感染的雪貂动物模型。方法按实验要求筛选出流感抗体反应阴性的雪貂,经兽用氯胺酮轻度麻醉后进行滴鼻感染H3N2流感病毒株A/Brisbane/10/07,设立两个稀释度106和107 TCID50,每个稀释度接种3只雪貂,感染后第5天安乐处死。感染前采集鼻甲骨活检,感染后1～5 d鼻甲骨活检检测病毒载量,每天记录雪貂一般临床变化。处死时取雪貂肺、肝、脾、小肠、脑组织作病毒滴度检测,肺组织做病理检查。结果 106和107TCID50的H3N2病毒分别感染雪貂,没有雪貂死亡。雪貂感染后都出现一过性的体温升高,体重的下降,流涕、打喷嚏等症状。在鼻甲骨活检物中可测到病毒载量,肠组织可分离到病毒。肺组织以轻度性间质性肺炎为主要病理变化。结论雪貂感染H3N2病毒株A/Brisbane/10/07后,临床表现、病毒学、分子生物学、病理学方面的检测都可以证实雪貂感染H3N2病毒动物模型已建立,其中106 TCID50病毒滴度的是一个建立感染动物模型比较合适的剂量。