人类SUZ12基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的:建立SYBR Green I实时荧光PCR定量检测人类SUZ12基因的方法.方法:将SUZ12 RT-PCR扩增片段克隆入载体pGEM-T后,经测序鉴定正确后,进行纯化和定量及系列稀释,应用SYBR Green I实时荧光定量PCR检测SUZ12,建立标准曲线,熔解曲线分析产物的特异性.结果:该法检测的最低拷贝数为14.2,线性范围为1.42×10~1-1.42×10~8拷贝,相关系数r为-1.00,1.42×10~7拷贝/L标本的批内变异系数(CV)和日间CV分别为1.8%和2.8%.熔解曲线分析显示单一的峰,熔解温度(melting temperature,Tm)为(81.37±0.16)℃.结论:实时荧光定量PCR方法检测SUZ12基因,快速有效、灵敏度高、特异性好.     

血小板计数和血小板平均体积在新生儿败血症的意义

目的：了解新生儿败血症血小板计数（BPC）和平均体积（MPV）的变化,分析其临床意义。方法：收集52例符合新生儿败血症确诊标准的患儿临床资料,比较败血症发生前后BPC及MPV相关变化;根据病原菌分为革兰阴性菌（G-）组和革兰阳性菌（G＋）组,根据转归分为存活组和死亡组,进行上述相关参数分析。结果：败血症患儿血小板减少发生率53．8％;发病后与发病前相比,BPC显著降低,MPV增加（P％0．05）。G～组与G＋组相比,血小板减少发生率显著升高（63．89％：31．25％）;BPC平均水平明显降低[（109．83±71.02）×10^9／L：（164．5±85．23）×10^9/L],且最低点水平显著降低[（75．31±42．87）×10^9：（112．06±58．18）×10^9]。死亡组BPC和MPV较存活组降低[（59．91±28．83）×10^9：（144．49±78．80）×10^9]、[（9．61±0．98）：（11．22±1．27）fl]。结论：血小板减少和MPV增加与新生儿败血症相关,能较好地反映病情及预后。     

慢性乙肝患者HBV核心基因一组单核苷酸多态性与血清HBV DNA水平的相关性研究

目的 研究慢性乙肝患者HBV核心基因的单核苷酸多态性(SNP)与血清HBV DNA水平的相关关系.方法 采用PCR-RFLP和限制性内切酶Tsp509I榆测HBV核心基因的SNP,采用双脱氧终止法对核心基因进行序列测定,实时荧光PCR技术用于HBVDNA水平的定量检测.结果 慢性乙肝人群中发现5种典型的PCR-RFLP图谱,分别是RFLP-C、RFLP-D、RFLP-E、RFLP-G和RFLP-C/G,各种RFLP图谱的分布频率依次为61.5%、2.6%、9.6%、16.7%和9.6%.A165T、A336C、A336T、T337C和T385C等5种SNP与RFLP图谱的变化有关,但是只有SNP A336C和A336T会导致HBcAg第83位的Glu被Asp所替代.RFLP-C组患者的血清HBV DNA水平显著高于RFLP-G组(P=0.02)和RFLP-C/G组(P=0 006),而且RFLP-C/G组患者血清ALT的阳性率显著低于RFLP-C、RFLP-E和RFLP-G组;当HBeAg阳性时,RFLP-C组患者的血清HBV DNA水平显著高于RFLP-G组(P=0.015)和RFLP-C/G组(P=0.008).结论 本研究中使用的PCR-RFLP能够用于检测核心基因的SNP,RFLP-C组患者的血清HBV DNA水平显著高于RFLP-G组和RFLP-C/G组,可能与Glu83 Asp突变有关.

Abstract：

Objective To investigate the relation between a set of single nucleotide polymorphisms (SNP) in core gene of HBV in chronic hepatitis B patients and HBV DNA levels. Methods PCR restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP) assay and restriction enzyme Tsp509I were adopted to determine HBV SNP in HBV core gene. Nucleotide sequences of core gene were determined using the dideoxy chain termination method. HBV DNA levels were quantitated with real-time PCR. Results Five typical RFLP patterns, RFLP-C, RFLP-D, RFLP-E, RFLP-G and RFLP-C/G mixture were found and the distribution of HBV RFLP patterns was as follows: C, 61. 5% ; D, 2. 6% ; E, 9.6%; G, 16.7%; C/G mixture, 9.6%. Five SNPs, A165T, A336C, A336T, T337C and T385C, were found to be associated with RFLP patterns change and only SNP A336C or A336T caused the substitution of Glu-83 with Asp in HBcAg. The serum HBV DNA levels in RFLP-C group were higher than that in RFLP-G (P =0. 02) and RFLP-C/G group(P = 0. 006) , respectively, furthermore, the positive rate of serum ALT in RFLP-C/G group was lower than that in RFLP-C, RFLP-E and RFLP-G group, respectively. Under the condition of HBeAg-positive, the serum HBV DNA levels in RFLP-C group were higher than that in RFLP-G (P = 0. 015) and RFLP-C/G group(P =0.008) , respectively. Conclusion PCR-RFLP used in this study can be adopted to determine HBV SNPs, not genotypes in Chinese patients with chronic hepatitis B. The serum HBV DNA level in RFLP-C group higher than that in RFLP-G or RFLP-C/G group maybe associated with amino acid mutation, Glu83 Asp.     

输血在实验诊断学教学中的实践

实验诊断学是基础医学与临床医学之间的一门桥梁学科,其教学对象主要是临床医学专业学生,因而其教学重点以临床应用为主,以培养医学生的综合素质、综合能力为核心。而输血作为临床上一种必不可少的治疗手段,在医学中的地位日显重要,国家也有多项法律法规对其进行规范,     

以国家精品资源共享课建设为契机,全面提高医学检验人才培养质量

<正>华中科技大学同济医学院检验系《临床输血检验》课程2013年获国家精品资源共享课立项建设项目,这是该课程继2008年获华中科技大学精品课程、2009年获湖北省精品课程、2010年获国家级精品课程后的又一国家级课程建设项目。精品资源共享课是高等学校教学质量工程和教学改革中的重要内容之一,是国家精品开放课程建设项目的组成部分,是以高校教师和学生为服务主体、同时面向社会学习者的基础课和专业课等各类网络共     

应用SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR法对中国汉族人群HLA-B27进行快速基因分型

目的：建立一种快速、灵敏的实时荧光聚合酶链反应（PCR）对中国汉族人群的人白细胞抗原B27（HLA-B27）进行基因分型。方法：采用SYBR GreenⅠ荧光PCR法对120例已定型的标本、230例健康志愿者、54例类风湿因子（RF）阳性患者和36例抗核抗体（ANA）阳性患者的HLA-B27 DNA进行实时检测，并采用熔解曲线对HLA-B27进行基因分型。结果：①熔解曲线分析显示，伊珠蛋白PCR产物的Tm平均值为87．82℃，HLA-B27 PCR产物的Tm平均值为90．54℃，HLA-B27阴性标本仅在87．82℃处存在β-珠蛋白的熔解曲线峰，而阳性标本则于87．82℃和90．54℃处出现两个熔解曲线峰，且△Tm约为2．72℃；②对120个已定型的标本，SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR法与传统的PCR—SSP（序列特异性引物）结果完全吻合；③健康志愿者、RF阳性患者和ANA阳性患者HLA-B27 DNA阳性率分别为2．6%（6／230）、3．7％（2／54）和5．6％（2／36）。结论：SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR法是一种快速、灵敏的HLA-B27基因分型方法，具有传统的PCR所不可比拟的优点，可取代传统的PCR法用于中国汉族人群的HLA-B27的基因分型，辅助强直性脊柱炎等脊柱关节病的诊断。     

Taqman技术检测肿瘤细胞中端粒酶逆转录酶信使核糖核酸及表达的意义

目的用定量Taqman技术检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)信使核糖核酸(mRNA)以及在肿瘤细胞中表达的意义.方法在Trizol提取总RNA后,将mRNA逆转录成互补脱氧核糖核酸,用Taqman技术定量检测hTERT mRNA,并与经典逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法比较.结果急性髓细胞白血病患者hTERT mRNA表达水平为(52.9～7.3)×104拷贝/μl,平均3.5×103拷贝/μl,其阳性率(90.3%)高于健康体检者(5.6%,χ2=29.9,P<0.05),但与经典RT-PCR检出阳性率比较, 差异无显著意义(χ2=1.3,P>0.05).Taqman技术灵敏度为1.5～3拷贝/μl,特异性为100%;在(50～5)×108拷贝/μl之间有良好的线性关系,相关系数为100%;50和5 000 拷贝/μl的标本的内变异系数(CV)1.7%和2.0%,日间CV则分别为3.7%和2.9%.结论 Taqman技术是一种快速有效、灵敏度高、特异性良好的定量检测hTERT mRNA的方法.     

血浆/血清中肿瘤相关mRNA的研究现状

mRNA存在于血浆 /血清中。现就血浆 /血清中肿瘤相关mRNA(包括病毒RNA和各种肿瘤相关基因编码的mRNA等 )的存在、稳定性、应用及其在肿瘤诊断和预后中的意义进行综述 ,并简要展望其应用前景以及其中尚待解决的问题。     

支气管哮喘易感区域5q31-33内Tim-3基因单体型分析

目的： 探讨染色体上支气管哮喘易感区域5q31-33内Tim-3基因多态性与支气管哮喘的关系。方法：应用限制性片段长度多态性技术方法,分析了118个儿童变应性哮喘核心家系Tim-3基因4个SNPs(rs10053538、rs10515746、rs13170556和rs9313441)的基因型;采用基于家系传递不平衡检验（TDT）,分析基因分型数据;应用TRANSMIT软件构建单体型并进行单体型关联分析。结果：①基于家系的TDT分析显示,Tim-3基因的4个SNPs由杂合子父母传递给患病子代的等位基因频率不比预期值高,与哮喘无关（P>0.05）。②Transmit多个位点单体型分析结果显示由Tim-3基因rs10053538、 rs13170556、 rs9313441构建的单体型与支气管哮喘有关联（Global 2=10.83,P<0.05）。父母传递给患病子女GGG单体型的观察值小于期望值,差异显著（2=8.24,P<0.01）。结论：中国汉族人群中,位于染色体5q31-33区域的Tim-3基因本身或其附近的基因可能与儿童变应性哮喘的易感性相关。