构建消除糖皮质激素抵抗新靶点的BAG-1质粒表达载体

目的:利用RNA干扰技术,建立脂多糖和地塞米松作用大鼠肺泡巨噬细胞BAG-1基因阻断模型,并阐明BAG-1表达对糖皮质激素受体抗炎活性的影响。方法:本实验于2006-02/09在南京军区南京总医院呼吸病实验室进行。选用健康SPF级Wistar大鼠10只,鼠龄四五周,雌雄不拘。采用支气管肺泡灌洗获取大鼠肺泡巨噬细胞,将分离培养得到的大鼠肺泡巨噬细胞随机分为4组:正常对照组、阴性对照组、SiBAG-1α转染组及SiBAG-1β转染组。通过在线寻找针对BAG-1基因的RNA干扰靶序列并设计对应的寡核苷酸序列,将退火的合成寡核苷酸序列插入pSilencer3.1H1-hygro质粒载体,构建RNA干扰质粒SiBAG-1α和SiBAG-1β,经测序确认后,转染大鼠肺泡巨噬细胞,阴性对照组是试剂盒提供的阴性对照质粒pSilencer3.1H1-negetive。运用细胞免疫组织化学法检测各组细胞核中BAG-1表达变化,以胞核中积分吸光度平均值表示BAG-1表达的相对强度;运用电泳迁移率改变分析法检测各组糖皮质激素受体活性变化,以扫描条带的灰度值与滞后带面积之积表示糖皮质激素受体的活性。结果:①合成的寡核苷酸片段正确连入pSilencer3.1H1-hygro质粒载体,成功构建针对BAG-1基因的RNA干扰重组质粒SiBAG-1α和SiBAG-1β(上海博亚公司测序号分别为1524-036和1524-037)。②质粒SiBAG-1α转染组胞核内BAG-1蛋白表达较正常对照组明显降低(3.46±0.75,13.58±0.47,P<0.05),而质粒SiBAG-1β转染组胞核内BAG-1蛋白表达与正常对照组比较差异无显著性意义(15.27±0.89,13.58±0.47,P>0.05)。③质粒SiBAG-1α转染组细胞糖皮质激素受体活性与正常对照组明显增强(9.62±0.47,2.65±0.22,P<0.05),质粒SiBAG-1β转染组细胞糖皮质激素受体活性与正常对照组比较差异无显著性意义(2.79±0.57,2.65±0.22,P>0.05)。结论:成功地构建并筛选出一个特异而高效地阻断BAG-1表达的质粒表达载体SiBAG-1α,抑制BAG-1表达可恢复糖皮质激素受体抗炎活性,逆转糖皮质激素受体活性下降所致的糖皮质激素抵抗。BAG-1是消除糖皮质激素抵抗的新靶点。     

阿司匹林性哮喘

阿司匹林性哮喘 (aspirin -inducedasthma,AIA)作为一特殊类型的哮喘 ,其诊断方法与所颁布的哮喘防治指南有所不同。临床上除了具有特殊的诱发因素外 ,还因其多为重症、糖皮质激素依赖、症状难以控制和病死率较高等特点 ,成为难治性哮喘的主要原因之一。因此 ,AIA近年来也就逐渐成为人们研究和关注的焦点。1　阿司匹林哮喘的流行病学根据美国心肺血液病研究院及世界卫生组织(NHLBI/WHO)的工作报告 ,全球范围内AIA占哮喘患者总数的 4%～ 2 8%。日本AIA研究会的资料表明 ,日本AIA约为哮喘患者总数的 9.8%。国内根据病史调查 ,AIA患…     

COPD大鼠肠粘膜屏障功能障碍的观察研究

目的:观察COPD大鼠肠粘膜屏障结构和功能的改变并探讨其可能机制.方法:将40只雄性SD大鼠随机分为对照组及COPD组,每组20只.采用单纯烟熏法建立COPD大鼠模型,HE染色观察肺组织、肠组织的病理变化.用蛋白印迹法测定肠组织紧密连接蛋白的表达,分光光度法测定血清二胺氧化酶的活性,高效液相色谱分析法测定尿L/M值,酶...     

鼻部疾病与慢性阻塞性肺疾病的关系

目前,有关COPD的病因已有诸多研究,但鼻腔和鼻窦等鼻部疾病对COPD的影响却鲜为人知.现有的研究结果表明,COPD患者经常伴有鼻部症状或鼻部炎症性疾病~([1-6]),存在鼻部症状可使COPD患者的生命质量明显降低~([7]),并与COPD患者病情加重及恶化存在相关性~([8]).为了使呼吸科医生关注鼻部疾病对COPD的影响,我们对相关研究进行了综述.     

抗中性粒细胞细胞质抗体相关性血管炎伴大咯血

系统性血管炎（systemic vasculitis, SV）是一组以血管壁炎症和纤维蛋白样坏死为主要病理变化，以多器官系统受累为主要临床表现的疾病。肾血管分布丰富，是SV中最常见的受累器官。肾外最易受累的器官为肺，约有75%的抗中性粒细胞细胞质抗体（anti-neutrophil cytoplasmic autoantibody, ANCA）相关性小血管炎患者均累及肺。现将我科近来诊治的1例ANCA相关性血管炎伴大咯血患者报道如下。     

LPS致大鼠肺泡巨噬细胞NF-κB促进TNF-α分泌

目的: 观察脂多糖（LPS）致大鼠肺泡巨噬细胞（AMs）中核因子NF-κB活性及其调控肿瘤坏死因子-α（TNF-α）分泌的作用。 方法: LPS作用大鼠AMs后，用电泳迁移率改变分析法（EMSA）测NF-κB活性；用特异的反义寡核苷酸阻断NF-κB亚基（p65）后，Western blotting检测p65表达变化；ELISA法检测细胞上清中TNF-α的含量。 结果: 于LPS作用AMs后4 h，NF-κB活性达到峰值，24 h仍维持在高水平；作用后4 h上清中TNF-α的含量达到峰值。反义寡核苷酸阻断NF-κB亚基（p65）表达后，LPS致AMs上清中TNF-α的含量显著低于未阻断组（P<0.01）。结论: LPS致大鼠AMs中NF-κB正向调控TNF-α分泌。     

Spectral analysis of breath sounds in asthm atics and chronic asthm aticbronchitis during acute episode

Spectral analysis of breath sounds in asthm atics and chronic asthm aticbronchitis during acute episode@辛晓峰@殷凯生@张希龙@童茂荣@施毅@夏锡荣@黄小平     

南京地区支气管哮喘患者合并变应性鼻炎的调查

目的了解南京地区支气管哮喘患者合并变应性鼻炎的情况,计算支气管哮喘患者中变应性鼻炎的发生率,并对其变应性鼻炎的治疗现状作一初步分析。方法问卷调查106例确诊为支气管哮喘的南京地区患者,详细了解其临床表现及治疗现状,建立相应的个人数据库档案,数据进行统计学分析。结果106例支气管哮喘患者,年龄3～72岁,平均年龄为31±20.9岁,男57例,女49例;其中70例(66.0%)并发变应性鼻炎,年龄5～72岁,平均年龄为33±20.7岁,男38例,女32例。106例患者中,36例(34.0%)直系三代内有气道炎症相关性疾病家族史。结论支气管哮喘合并变应性鼻炎的发生率为66.0%;气道炎症相关性疾病家族史34.0%;目前对于支气管哮喘和变应性鼻炎的治疗现状均不容乐观。     

小剂量茶碱对哮喘患者血清T淋巴细胞亚群的影响

近年来的资料表明,茶碱不仅具有抗炎作用,而且还具有免疫调节作用［１］。Ｔ淋巴细胞在协调嗜酸粒细胞反应的炎症中起关键作用。哮喘患者Ｔ淋巴细胞亚群数量的改变将直接影响到Ｂ淋巴细胞ＩｇＥ的合成,从而影响到免疫反应过程。国内有关茶碱的免疫调节作用的报道较少,为此本研究通过观察哮喘患者口服小剂量茶碱前后血清Ｔ淋巴细胞亚群和ＩｇＥ水平的变化,探讨茶碱的免疫调节作用。一、对象和方法１．对象：哮喘组：选择轻、中度哮喘缓解期患者２２例,男１４例,女８例,年龄２１～４５岁。１个月内未用糖皮质激素等抗炎药物。随机分为…     

哮喘患者检测痰中基质金属蛋白酶的临床意义

目的探讨支气管哮喘（简称哮喘）患者诱导痰中基质金属蛋白酶9（MMP-9）和基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）的浓度比值与气道炎症和气流受限的关系。方法选择缓解期哮喘患者（哮喘组）和健康对照者（健康对照组）进行肺功能测定;用诱导痰检查方法对痰炎性细胞进行分类计数,并用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定诱导痰上清液中MMP-9和TIMP-1浓度。结果哮喘组和健康对照组诱导痰中MMP-9、TIMP-1浓度比较差异和MMP-9／TIMP-1比值比较差异有统计学意义。结论哮喘组患者诱导痰中MMP-9／TIMP-1比值的失衡与气道炎症有关,从而造成气道重塑和气流受限,导致肺功能下降。