和络舒肝胶囊治疗血吸虫病肝硬化临床观察

目的观察和络舒肝胶囊治疗血吸虫病肝硬化的疗效。方法将确诊的96例血吸虫病肝硬化住院患者随机分为和络舒肝组、IFN-γ组和对照组,每组32例,分别采用和络舒肝胶囊、IFN-γ及常规治疗,疗程均为6个月,观察治疗前后患者临床症状、肝功能、血清透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原（PCIII）、层黏连蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（L-IV）及肝脏B超影像学的变化。结果和络舒肝组患者治疗后肝功能指标、肝纤维化指标及B超影像学指标均较对照组有明显改善（P〈0.05）,与IFN-γ组患者比较差异无统计学意义（P〉0.05）。和络舒肝组患者治疗过程中未出现不良反应。结论和络舒肝胶囊能有效降低患者肝纤维化指标,改善肝功能,有明显抗肝纤维化疗效,且与IFN-γ的抗肝纤维化疗效相当,无明显不良反应,值得临床应用。     

枯草杆菌芽孢抵抗胃肠道环境的耐性评估

目的对益生菌-枯草杆菌芽孢进行耐性评估，为研制口服枯草杆菌芽孢载体疫苗奠定基础。方法采用耗竭法，DSM培养基长时间振荡培养（24h）获得芽孢，使用pH2．0盐酸胃蛋白酶液模拟胃液，胆酸盐、胰液素混合液模拟肠液，对枯草杆菌芽孢进行体外耐受实验。结果在DSM培养基中，80％～90％的枯草杆菌WB600可形成芽孢，每升DSM液所生成芽孢约1-10^11。在模拟胃液中1h后，仅0.0024％枯草杆菌WB600繁殖体细菌仍成活，大肠杆菌JM109活力完全丧失，而枯草杆菌芽孢基本不受影响，93．3％仍成活。在模拟小肠环境中3h后，枯草杆菌WB600繁殖体细菌活力显著降低（仅0．0013％存活），枯草杆菌芽孢基本不受影响（92％仍存活），而大肠杆菌JM109有一定量的增殖。结论枯草杆菌芽孢能耐受模拟胃肠道环境，有望成为新型的口服疫苗载体。     

美洲大蠊重组BCG-Cr PI变应原的免疫原性

目的对表达美洲大蠊CrPI变应原的卡介苗（BCG）进行免疫原性评估,为BCG脱敏疫苗的研制提供实验基础。方法10^6CFU重组BCG．CrPI包下注射免疫BALB／C小鼠,分别于免疫0、2、4、6、8周收集血清。使用纯化的重组CrPI被ELISA板,ELISA检测CrPI特异性IgG及IgG1、IgG2a亚类。结果重组BCG—CrPI皮下注射免疫BALB／C小鼠2用后,血清CrPI特异性IgG显著高于对照组（P〈0．05）,实验组IgG1及IgG2a也显著高于对照组（P〈0．05）,IgG2a升高更明显。结论重组美洲大蠊BCG—CrPI具免疫原性,并且诱Th1优势免疫应答。     

儿童感染肺炎克雷伯菌产AmpC酶和ESBLs的检测及耐药性分析

目的了解广州地区儿童感染肺炎克雷伯菌产质粒介导的AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况及其耐药特征,为临床合理用药提供参考依据。方法采用标准纸片扩散法检测ESBLs,头孢西丁三维试验法检测AmpC酶,K-B纸片法测定肺炎克雷伯菌对抗菌药物的敏感性。结果共检出248株肺炎克雷伯菌,其中46株产AmpC酶,阳性率为18.5%;157株产ESBLs,阳性率为63.3%;同时产AmpC酶和ESBLs菌株阳性率为18.1%。产AmpC酶肺炎克雷伯菌对第三代头孢菌素高度耐药,耐药率达80%～100%;对头孢吡肟、含酶抑制剂复合药的耐药率也在56.5%～93.5%之间;但对环丙沙星、阿米卡星的耐药率则在30%以下,对亚胺培南全部敏感。产ESBLs菌株对头孢菌素、含酶抑制剂复合药的耐药率也较高,在50%～91.7%之间,但对阿米卡星、环丙沙星、亚胺培南仍高度敏感。ESBLs阴性肺炎克雷伯菌对所测抗生素的敏感率均在81.2%以上。产酶菌株耐药率明显比非产酶菌株高。结论广州地区儿童感染肺炎克雷伯菌产ESBLs和AmpC酶的状况已十分突出;产酶菌株对常用抗生素的耐药率较高;碳青霉烯类抗生素可作为治疗产AmpC酶和/或E...     

广州地区腹泻患儿肠致病性大肠杆菌的血清型及耐药性

目的调查广州地区腹泻患儿肠致病性大肠杆菌(EPEC)感染的情况,分析EPEC菌株的血清型及耐药性,为更有效地防治EPEC感染提供重要基础数据。方法回顾性分析2014年7月-2016年12月广州市妇女儿童医疗中心3 013名提供大便培养的腹泻患儿的临床资料,统计EPEC感染的流行特征,并分析EPEC阳性菌株的血清型分布及耐药情况。结果在3 013份急性腹泻患儿提供的大便培养标本中分离到96株无重复的EPEC,分离率为3.19%。以1~2岁和大于5岁年龄组检出率相对较高,年龄组间检出率的差异有统计学意义(P0.05)。以冬、夏季检出率较高,季节间检出率差异亦有统计学意义(P0.05)。共分为12个血清型,其中血清型O86K61、O125K70、O44K74、O126K71为优势血清型。EPEC对抗生素耐药率最高为氨苄西林(86.46%),其次为复方新诺明(76.04%)和头孢噻肟(57.29%)。未发现对亚胺培南耐药菌株,其他抗生素均有一定程度的耐药。多重耐药率为61.46%。结论 EPEC是婴幼儿腹泻的重要病原菌,O86K61为最常见血清型,该菌多重耐药严重,应加强监测并根据药物敏感试验合理选择抗生素进行治疗。     

蟑螂变应原基因的免疫学筛选及序列分析

目的　探讨从美洲蟑螂cDNA表达文库中获得的变应原基因对过敏性疾病的治疗价值。方法　用生物素 链霉亲合素系统 ,使用蟑螂过敏病人血清IgG4,对已构建的美洲蟑螂cDNA表达文库进行免疫学筛选 ,并对阳性克隆进行序列测定及同源性分析。结果　从美洲蟑螂cDNA文库筛选出 3个阳性克隆 ,同源性分析显示 ,3号克隆核苷酸序列及推导的氨基酸序列与美洲蟑螂主要变应原CrPI高度同源 ,一致性达 99% ,1、2号克隆与已知变应原无显著同源性 (score <2 0 0 ) ,提示其为新的蟑螂变应原基因 ,其中 1号为编码核糖体蛋白S12 ,2号为编码Rab11蛋白。结论　 3号为克隆编码美洲蟑螂主要变应原CrPI,另外 2个克隆为新的蟑螂变应原基因 ,对这些基因的进一步亚克隆表达 ,将有助于重组变应原对过敏性疾病的诊断及治疗     

枯草杆菌芽孢载体疫苗的研究及其在寄生虫病防治中的应用前景

枯草芽孢的良好安全性，独特的抗性及其免疫学特征，使它作为疫苗载体具有很大的优势。本文对枯草芽孢结构、理化性状、免疫学特性，及表面表达外源蛋白的芽孢疫苗免疫学活性，重组芽孢口服疫苗对动物的免疫保护性进行综述，并对其在寄生虫病防治中的应用前景进行了展望。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ldh-1基因的序列分析及原核表达

目的对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）临床分离株携带的ldh-1基因进行克隆、表达,为L．乳酸脱氢酶（L．LDH）功能研究奠定基础。方法根据金黄色葡萄球菌Newman菌株的基因序列,设计一对特异性引物,以MRSA临床分离株（菌株号：1758）DNA为模板PCR扩增ldh-1,纯化DNA进行BamHI、Xhol I双酶切鉴定及测序鉴定,并与做相应酶切的pET一28a（＋）连接,转化大肠杆菌BL21,对质粒进行双酶切鉴定及基因序列分析,用1PTG诱导融合蛋白的表达,His标签单克隆抗体进行免疫印迹验证融合蛋白的表达。诱导表达后的重组菌经超声破碎离心后,使用Ni2＋_NTA亲和层析柱纯化目的蛋白。结果成功构建重组表达质粒pET．28a—ldhl,基因测序结果显示,扩增的ldhl基因全长956bp,与金黄色葡萄球菌Mu50株ldhl基因的序列同源性为100％。IPTG诱导表达后,聚丙烯酰胺凝胶电泳在39-103Mr处见目的条带,Westernblot验证了重组蛋白L．LDH的表达。该蛋白呈可溶性表达,纯化后获得0．5g／L的重组蛋白。结论在MRSA（菌株号：1758）1~床分离株中成功克隆及表达了ldh．1基因,获得了纯化的重组蛋白．为进一步进行L．LDH的功能研究奠定了基础。     

表面表达幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白枯草芽孢的免疫原性

目的 构建表面表达幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白（NAP）的重组枯草芽孢,并鉴定其免疫原性.方法 以构建的pGEX-4T-1-NAP质粒为模板,采用特异性引物扩增幽门螺杆菌NAP基因,与构建的以枯草芽孢外衣蛋白Cotc融合表达的质粒Pus186-Cotc连接,转化枯草杆菌WB600,提取质粒进行酶切、测序鉴定.应用营养耗竭法诱导枯草芽孢生成,提取重组芽孢外衣蛋白进行电泳及免疫印迹分析,并使用NAP特异性抗体免疫荧光检测芽孢表面重组蛋白的表达.以普通芽孢作为对照组,使用表面表达NAP的重组枯草芽孢口服免疫小鼠,ELISA法检测小鼠免疫后0、15、30、45 d的NAP特异性血清IgG水平,判断重组芽孢免疫原性.结果 以pGEX-4T-1-NAP质粒为模板,扩增了NAP基因,并成功克隆入Pus 186-Cotc质粒,重组Pus 186-Cotc-NAP双酶切鉴定可见435 bp目的片段,测序结果显示NAP在正确读框中.营养耗竭法可诱导重组枯草芽孢生成,产量达1×10^11/L,提取芽孢外衣蛋白电泳见相对分子质量25 600的目的条带.免疫印迹显示使用NAP特异性抗体在相应相对分子质量25 600可见识别带.并且使用NAP特异性抗体可检测到重组芽孢免疫荧光,表明NAP在芽孢表面成功表达.与对照组相比,NAP重组芽孢口服免疫小鼠15d后,NAP特异性IgG升高即达高峰,30、45 d后一直维持在高峰平台期（均P＜0.05）,表明重组芽孢具免疫原性.结论 成功构建了表面表达NAP的枯草芽孢工程菌,重组芽孢口服免疫小鼠具免疫原性,为幽门螺杆菌枯草芽孢疫苗的研制提供了依据.     

2011～2012年广州地区儿童腹泻病原菌分布及耐药性分析

目的了解广州地区儿童细菌性腹泻主要病原菌分布及其耐药性。方法对2011~2012年疑似细菌性腹泻患儿大便标本进行细菌培养,分析病原菌分布特征及耐药性。结果 2011~2012年共检出儿童腹泻病原菌416株,其中沙门菌属、致病性大肠埃希菌、空肠弯曲菌、白色念珠菌分别占53.61%、37.98%、5.29%、1.68%。主要病原菌对抗菌药物的耐药率分别为氨苄西林85.25%、复方磺胺甲噁唑54.28%、头孢噻肟44.70%、头孢曲松42.53%、氯霉素40.66%、头孢他啶23.55%、氨曲南23.36%、环丙沙星14.88%、头孢吡肟8.07%、头孢哌酮/舒巴坦7.99%、哌拉西林/他唑巴坦7.42%、亚胺培南0.00%。结论广州地区儿童腹泻病原菌以沙门菌属、致病性大肠埃希菌、空肠弯曲菌为主;敏感性排名前5位的抗菌药物为亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟、环丙沙星。