登革热病毒多重荧光PCR检测及基因分型方法的研究

目的 建立一种登革热病毒双靶基因多重荧光PCR检测方法,用于登革热病毒的实验室诊断和基因分型.方法 选取登革热病毒Ⅰ-Ⅳ型病毒保守区设计型特异性引物探针和通用型引物探针,评估多重荧光PCR检测方法的特异性、重复性和检测限;并对20份阳性样本进行检测.结果 20个登革热阳性核酸标本在通用型检测全部为阳性,特异性型别检测发现登革热病毒Ⅰ型10例、登革热病毒Ⅱ型3例、登革热病毒Ⅲ型3例、登革热病毒Ⅳ型4例;20名正常无症状人群标本提取的核酸和HIV、HCV和HEV通用型和特异性型别检测全部为阴性.梯度检测的变异系数均小于5％.对登革热Ⅰ-Ⅳ型病毒检测最低检测限达103 copies/ml.结论 本研究建立的登革热病毒双靶基因多重荧光PCR检测及分型方法具有特异性好、重复性好、快速易操作等优点,可用于登革热病毒的快速检测和基因分型鉴定.     

梅毒螺旋体Tp0453和TpN47蛋白的表达纯化和在梅毒检测中的应用

近年来,梅毒检测方法的研究已成为性传染病防治中的一个研究热点.在众多梅毒螺旋体(Treponema pallidum,rp)基因编码的蛋白中,研究热点包括TpN47(Tp0574)、TpN17(Tp0435)、TpN15(Tp0171)、TPN44.5(TmpA)等抗原.本研究以表达纯化的TpN47和Tp0453蛋白为对象,探讨其在梅毒血清学检测中的应用效果.     

一对男男性接触HIV感染者体内毒株基因序列的分析

目的应用分子流行病学方法,以分析2名具有高危性行为的男男性接触者(MSM)间HIV-1病毒传播关系。方法对2名人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者进行流行病学调查。应用巢式RT-PCR扩增HIV-1 pol区和gag区基因,经DNA测序后,结合流行病学资料,用遗传进化系统树比对的方法分析两感染者体内HIV-1毒株的亲缘关系。结果该2名感染者体内HIV-1毒株所属亚型分别为HIV-1 CRF07_BC和CRF01_AE,gag和pol基因之间的基因距离分别为0.125和0.096。结论该2名男男性接触者间不存在HIV-1传播关系。     

EV71和CoxA16型肠道病毒RT-PCR检测方法的研究

目的建立咽拭子标本中EV71和Cox A16型肠道病毒逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法。方法根据GENBANK数据库中EV71和Cox A16型肠道病毒的基因序列,利用CLUSTAL软件进行序列比对分析,选择基因组的保守序列,并借助引物设计生物信息学软件,设计筛选出一套针对EV71和Cox A16型肠道病毒的RT-PCR扩增的引物。从特异性、最低检测限、重复性等方面进行评估,建立了EV71和Cox A16型肠道病毒RT-PCR检测方法。结果RT-PCR方法对EV71和COXA16病毒的最低检测量分别为63 TCID50/ml和32 TCID50/ml。其他病原微生物及人类基因组在该系统无反应信号,显示方法特异性良好。结论RT-PCR对手足口病病原体检测准确性高、特异性强,具有快速、经济等特点,适合手足口病的早期诊断。     

基于症候群监测初步建立我国口岸入境人员传染病 监测网络及其2009-2011年监测结果分析

目的 了解我国入境人群发热症候群和腹泻症候群的病原谱构成数据,促进我国入境传染病网络实验室监测网络技术平台建立和完善.方法通过口岸体温监测、医学巡查、主动申报、健康体检等手段,于2009年5月-2011年3月间,联合9个直属检验检疫局所属口岸建立监测哨点并对筛选出的入境发热及腹泻人员进行样本采集、统一病原谱检测及数据分...     

深圳口岸出入境人员HIV感染情况及其分子特征

目的为了揭示深圳口岸出入境人员艾滋病病毒(HIV)感染者的流行病学特征以及HIV亚型的分布情况。方法以1991—2008年深圳国际旅行卫生保健中心HIV确证实验室检测的113例HIV感染者为研究对象,分析了深圳口岸出入境人员艾滋病的流行特征;并对HIV感染者的HIV-1抗体阳性血浆进行HIV基因型分析。结果 HIV感染者以境外人员为主,男性高于女性,感染人员以商人和驾驶员为主,感染群体以青壮年为主,两性接触是主要传播途径,感染者来自26个国家和地区。本研究共获得67份gag基因和68份pol基因序列,共发现9种HIV-1亚型和重组亚型,包括A1、B、C、D和G亚型以及CRF01_AE、CRF02_AG、CRF07_BC和CRF08_BC重组亚型。结论深圳口岸出入境人员HIV的感染和流行呈多样化,我国国境卫生检疫在防控艾滋病传播中已发挥了重要作用。     

中国首例HIV-1 J亚型毒株的鉴定

目的通过对1例来自刚果的人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）感染者样品进行序列分析，鉴定其亚型种类。方法从该感染者血浆样品中提取RNA，经逆转录后采用套式PCR扩增HIV env、gag及pol基因的部分区段，PCR产物直接测序，将所获序列与参考序列进行比对分析，计算基因距离及构建系统进化树。结果该感染毒株样品序列与HIV-1J亚型国际参考株J．SE．93及J．SE．94聚在一起，与两参考株序列在env基因区距离均为8．2％，pol基因区距离分别为6．4％和6．3％，gag基因区距离分别为8．9％和8．0％，证实其为HIV-1J亚型。这是国内首次报道检出HIV-1J亚型。结论HIV-1J亚型毒株已随国际旅行者传人我国，加强对国际旅行人员中HIV毒株亚型的监测具有重要意义。     

三种实时荧光RT-PCR试剂在检测甲型H1N1流感病毒中的应用

〔目的〕结合WHO公布的甲型H1N1流感病毒的检测引物和探针,探索合适的实时荧光RT-PCR试剂应用于国境口岸甲型H1N1流感病毒疑似标本的检测。〔方法〕通过对连续梯度稀释阳性对照品进行检测,从而分析AB AgPath-ID、Qiagen QuantiTect和Takara One Step PrimeScript 3种常用实时荧光RT-PCR试剂的灵敏度、信号强度、反应效率等因素。〔结果〕3种试剂的检测下限均为1:1000倍稀释阳性对照品;AB AgPath-ID、Qiagen QuantiTect和Takara One Step PrimeScript检测的线性斜率分别为-5.517、5.214和-4.600;信号强度上Qiagen QuantiTect相对于其他2种明显偏弱。〔结论〕为国境口岸输入性甲型H1N1流感病例的检测和监控提供了有力的技术保障。     

上海口岸2001—2005年HIV-1病原体变异分子流行病学研究

〔目的〕了解上海口岸2001—2005年艾滋病病毒I型感染者（HIV-1）毒株基因亚型分布、变异情况及流行特征。〔方法〕收集2001—2005年上海口岸51份HIV抗体检测确认阳性的血样标本,提取前病毒DNA,使用套式聚合酶链反应进行体外扩增,获得核心蛋白（gag）和包膜蛋白（env）区基因的核酸片段,测定其序列和进行亚型分析。〔结果〕37份标本扩增阳性,共检出8个亚型,包括B亚型11份;CRF01-AE10份;CRF02-AG5份;A亚型4份;C亚型4份;G亚型、B’,和CRF07_BC亚型各1份。上海口岸毒株亚型分布于五大洲15个国家和地区,主要流行CRF01-AE和B亚型,从2004年开始出现其它亚型逐渐增多趋势。〔结论〕上海口岸流行的HIV-1毒株复杂多样,出入境人员是我国HIV毒株输入的主要渠道,流行毒株以性接触传播为主,AE重组毒株具有较强的传播优势。     

基于HIV-1基因序列分析深圳口岸出入境人员与当地人群中CRF01_AE流行株的相关性

目的 分析深圳口岸出入境人员与当地人群中流行的HIV-1 CRF01_AE毒株的基因相关性,为制定相应的防控政策提供指导依据.方法 以深圳口岸出入境人员与当地人群中H1V-1CRF01_AE毒株感染者为研究对象,获得两个人群中的HIV-1基因序列并判定基因型,分别应用传播网络和系统进化分析方法,研究两个人群中HIV-1...