梅毒螺旋体Tp0453和TpN47抗原的制备及应用

目的表达纯化梅毒螺旋体Tp0453和TpN47蛋白,评价2种蛋白的检测效果,并建立一种新的梅毒抗体检测方法。方法以梅毒螺旋体Nichols菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增Tp0453和TpN47蛋白基因,构建原核表达载体;转化表达菌株后经IPTG诱导表达,并优化表达条件,大规模培养后采用Ni2+亲和柱纯化目的蛋白;纯化蛋白用过碘酸钠法进行HRP标记,采用双抗原夹心ELISA法分别评价两种蛋白的检测效果,在此基础上,按比例混合两种抗原,并建立双抗原夹心ELISA检测法。结果构建了Tp0453和TpN47蛋白的原核表达载体,在低温(27℃)和低剂量IPTG(0.1mmol/L)诱导条件下,有效的实现了Tp0453和TpN47蛋白的可溶性表达。采用Ni2+亲和纯化方法成功纯化出了高纯度的Tp0453和TpN47融合蛋白,ELISA检测结果显示Tp0453比TpN47具有更强的反应性,两种蛋白混合,建立的双抗原夹心ELISA检测法通过血清学试验表明具有很好的敏感度和特异性。结论实现了梅毒螺旋体Tp0453和TpN47蛋白快速高效的表达,并结合2种抗原优势,建立了一种高效的梅毒双抗原夹心ELISA检测方法。     

ELISA在出入境人员梅毒检测中的应用分析

目的分析ELISA在出入境人员梅毒检测中的应用价值。方法对出入境人员1847份标本采用TRUST和ELISA同步盲法进行检测,TRUST或ELISA阳性者进行TPPA检测;对TRUST阴性,ELISA阳性受检者进行跟踪复检和流行病学调查。结果1847份标本中,TRUST检测28份阳性,ELISA检测57份阳性,TPPA复检ELISA检测57份阳性者均为阳性。对31份TRUST阴性,ELISA和TPPA阳性标本受检者1～2月后进行TRUST复查。全部仍为阴性。结论ELISA与TPPA检测结果具有很好的一致性,对出入境口岸梅毒监测具有很好的应用价值;推荐采用ELISA做初筛试验,阳性结果以TRUsT试验复核的出入境人员梅毒血清学检测程程序。     

甲型H1N1流感双重荧光PCR快速筛查方法的研究

目的 优化一种甲型H1N1流感的双重荧光PCR快速筛查方法.方法 根据WHO推荐的甲型H1N1流感检测方案合成、标记引物和探针.通过改进反应条件与参数,优化了甲型H1N1流感的双重荧光PCR检测方法.结果 该方法敏感度高,特异性强,重复性好.应用该方法检测患者实际样品,结果与WHO推荐方法的检测结果一致;应用该法可在4 h内完成对样品中甲型H1N1流感的检验.结论 本研究优化的甲型H1N1流感的双重荧光PCR快速筛查方法可用于甲型H1N1流感的诊断.     

甲型H1N1流感双重荧光PCR快速筛查方法的研究

目的优化一种甲型H1N1流感的双重荧光PCR快速筛查方法。方法根据WHO推荐的甲型H1N1流感检测方案合成、标记引物和探针。通过改进反应条件与参数．优化了甲型H1N1流感的双重荧光PCR检测方法。结果该方法敏感度高,特异性强,重复性好。应用该方法检测患者实际样品,结果与WHO推荐方法的检测结果一致;应用该法可在4h内完成对样品中甲型H1N1流感的检验。结论本研究优化的甲型H1N1流感的双重荧光PCR快速筛查方法可用于甲型H1N1流感的诊断。     

登革热病毒RNA实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

目的建立TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR方法,测定登革热病毒（DV）及DV病毒的RNA拷贝数。方法利用TaqMan探针,建立实时荧光定量RT-PCR方法,通过对登革热病毒RNA定量外标准品的定量分析,优化反应体系,检测TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR方法的灵敏度、特异性和重复性。结果该方法检测灵敏度可达1×103copies/mL,特异性及重复性良好,对同一样品进行5次重复检测,其循环阈值的平均标准偏差为0.792。结论TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR法特异性、敏感性高,稳定性好,可用于定量测定登革热病毒及DVRNA载量。     

正己烷接触人群神经生长因子mRNA表达水平研究

目的建立一种人神经生长因子(NGF)mRNA荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测方法,探讨接触时间对正己烷接触人群NGF mRNA表达水平的影响。方法以接触正己烷工龄分组。设计引物、探针,检测对照组和接触正己烷各组之间的NGF mRNA水平。结果利用该荧光定量PCR检测结果显示工龄<2年组、2～6年组、>6年组以及对照组的NGF mRNA以10为底的对数分别为(8.88±0.08)、(8.68±0.08)、(8.53±0.11)和(8.90±0.07)copies/L。2～6年组和>6年组的NGF mRNA表达水平均低于对照组。各组内男女之间NGF mRNA表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论正己烷的毒性对于NGF mRNA的表达有明显的时间依赖关系,随着接触时间加长,NGF的表达逐渐减弱;所建立的检测方法特异性强,完全符合检测要求。     

中国大陆和台湾地区抗-HCV阳性人群ALT活性对比分析

目前全世界有1亿7千万人感染丙型肝炎病毒（hepatitis Cvirus，HCV），占世界人口的3％～5％。大多数感染者临床为无症状的慢性感染，严重危害人类的生命健康，已引起全球研究领域的广泛重视。迄今，在中国HCV感染者约4100万，达总人口的3．2％。近年来中国部分地区静脉吸毒和非法供血的一时猖獗和性开放，HCV感染呈增长趋势。为探究大陆和台湾地区抗-HCV阳性人群抗丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性是否存在差异性，利用流行病学方法，对出入境人员抗-HCV和ALT两者检测并进行结果分析。     

职业性慢性苯中毒患者自由基相关标志的研究

目的 研究职业性慢性苯中毒患者超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)、谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)和总抗氧化物状态(total antioxidant Status,TAS)水平...     

细菌直接PCR和双引物策略鉴定16S rRNA基因技术的建立

目的探索一种基于16S rRNA基因的快速鉴定细菌方法,为临床诊断治疗及耐药菌的分子遗传分析提供科学依据。方法对卫生部室间质评菌株和临床病人标本分离培养纯菌落,用双蒸水稀释菌落,然后直接以菌液为模板优化反应体系PCR扩增16S rRNA基因片段,再测序扩增片段。将测序结果在细菌Ribosomal数据库中进行同源性比对,根据序列同源性鉴定病原细菌。结果本实验鉴定的卫生部质评菌株结果与卫生部报告结果一致。本实验能够一次性鉴定出临床病人标本分离的菌株。结论本研究优化了一种免纯化细菌核酸直接PCR鉴定细菌16S rRNA基因的方法。本研究建立的基于病原细菌16S rRNA基因鉴定方法可用于细菌的快速诊断。