随机十肽库的构建及血管形成素结合肽的筛选

将合成的含有随机序列 (NNK) 1 0 的寡核苷酸片段 ,克隆入噬菌体呈现载体噬菌粒 p CANTAB5 E的 Sfi ,N ot 位点 ,即 cp 蛋白信号肽与成熟肽之间 ,电转化 E.coli TG1,构建了噬菌体表面呈现的十肽库 ,实际库容为 3.5 3× 10 7,插入率为 6 6 .7% .经辅助噬菌体 M13KO7超感染后 ,获得滴度为 4.8× 10 1 1 pfu/ m l的噬菌体上清 .经过两轮 panning筛选和富集 ,从构建的随机十肽库中筛选到 2 6个具有血管形成素结合活性的重组噬菌体克隆 ,对其中 12个阳性噬菌体克隆的短肽序列进行了分析 ,EL ISA检测结果显示 12个阳性噬菌体克隆都能够…     

含凝血酶切点的hTNFα-hPgnK5的原核表达及活性鉴定

[范彬,张英起,赵宁,颜真,药立波,苏成芝.细胞与分子免疫学杂志,2001;17(1)：29-31]]目的 在原核细胞中表达融合蛋白hTNFα-hPgnK5并鉴定其活性.方法 构建hTNFα-hPgnK5基因的表达载体,并在大肠杆菌DH5α中进行表达.以MTT法测定该融合蛋白体外抑制肿瘤细胞或血管内皮细胞增殖的活性.结果 成功地构建了hTNFα-hPgnK5表达载体并获得表达.免疫印迹分析表明,该融合蛋白具有hPgnK5的免疫活性.体外实验表明,该融合蛋白具有抑制肿瘤细胞和血管内皮细胞增殖的活性.结论 hPgnK5蛋白可与hTNFα共同表达,表达产物可抑制肿瘤细胞和血管内皮细胞增殖.     

人肿瘤坏死因子α单链抗体的原核表达和活性分析

目的　在大肠杆菌中表达抗人 TNF-α单链抗体 (Sc Fv) ,并分析它的结合活性和中和活性 .方法　在获得抗人 TNF-αE6 Sc Fv的基础上 ,用热诱导载体 p BV2 2 0在大肠杆菌中表达 E6 Sc Fv蛋白 .EL ISA测定抗体的结合活性 ,实时 BIA技术确定亲和常数 ,L 92 9细胞毒试验分析其中和活性 .结果　克隆了抗人 TNF-α E6 Sc Fv基因的热诱导载体 p BV2 2 0在大肠杆菌中 ,经42℃热诱导 ,得到了相对分子质量 (Mr)约为 2 70 0 0的重组蛋白质 ,表达量占菌体总蛋白的 18% .对在大肠杆菌中表达的E6 Sc Fv进行了复性和亲和层析纯化 ,并进一步证…     

用差示PCR法筛选类风湿性关节炎滑膜细胞中的高表达基因

目的 筛选类风湿性关节炎（RA）滑膜细胞中的高表达基因,以探讨RA滑膜细胞发生肿瘤样增殖和侵蚀软骨的分子机理。方法 以骨性关节炎（osteoarthritis,OA)滑膜细胞作对照,采用差示PCR（differentially display PCR)方法,克隆RA滑膜细胞中高表达的cDNAs片段,经反向点杂交排除假阳性克隆后,将阳性克隆进行基因序列分析,结果共回收76仆差异条带,得到42个有插段的克隆,经反向点杂交后得到22个阳性克隆,对其中19个克隆进行基因序列分析表明,最长片段为501bp长,最短片段为145bp长,大部分在300bp,有13个克隆为已知基因,其中包括组织蛋白酶,其它6个克隆为未知序列,这些未知序列中除一个序列外酶,其它6个克隆为未知序列,这些未知序列中除一个序列外都为基因的非编码区,结论 差示PCR方法在筛选差异表达基因方面存在着很大的局限性,组织蛋白酶B可能与RA滑膜细胞的软骨侵蚀性有关。     

外伤性截瘫患者的心理状况调查分析

外伤性截瘫是外伤性脊柱骨折后脊髓损伤的严重并发症。当脊柱受到外伤后 ,所引起的截瘫是突然发生的。很多人都会因不可接受的现实 ,而产生一些心理变化。为此 ,我们对 86例住院患者进行了症状自评量表的测定 ,以探讨截瘫患者的心理状况。1　资料与方法1.1　一般资料　本文的临床资料来自齐齐哈尔市第二人民医院 1992年 1月～ 1998年 1月的住院病例 86例。其中男性5 9例 ,女性 2 7例 ,年龄 16～ 5 1岁 ,2 1～ 37岁者占 48例。致伤原因 :高处坠落 46例 ,重物砸伤 19例 ,车祸所致外伤 2 1例。截瘫情况 :完全性瘫 5 4例 ,不完全性瘫 32例。对照…     

超声引导下行输卵管通液术在原发性不孕中的应用

通过57例原发性不孕症病人在B超引导下行输卵管通液术,术后随访观察,输卵管不通畅治愈率达89．5％(51／57);妊娠率达63。2％(36／57)。因此,B超引导下行输卵管通液术不仅是诊断和治疗输卵管不通所致原发性不孕症的一条好途径,而且是对传统输卵管通液术的进一步发展。     

足底板对类风湿性关节炎患者足底压的影响

目的 :测定类风湿性关节炎病人足底压 ,评价足底板的生物力学效应。方法 :12名女性类风湿性关节炎病人和 8名健康女性进行年龄和体重匹配。用 F- Scan系统进行动态足底压测量 ,Kistler床反力平台用以校正测量精确性。测量足底峰压和垂直分力 ,评价足底板的生物力学表现。结果 :类风湿性关节炎病人中足底压明显高于健康人。使用足底板后 ,足底总的峰压明显降低 ,前足、后足峰压减低 ,中足峰压增高。而垂直分力改变不大。结论 :足底板能显著降低足底压力 ,使足底压力重分布 ,减轻类风湿足痛。特殊设计的足底板对类风湿足痛的治疗能起重要的作用     

急性闭合性喉外伤病人的麻醉处理

急性闭合性喉外伤是耳鼻喉科常见的危重症,由于外力对喉部直接钝性打击或勒扼伤,常常造成喉软骨骨折或气管断裂伤,并发急性呼吸道梗阻或出血窒息而危及病人生命。如处理及时得当,则会化险为夷。我科近年收治４例,现报告如下。１病例摘要 例１,女性,６２岁,在用压水井压水时不慎滑手,被压水井柄反弹击中颈前部,当即出现颈前区疼痛、咯血、声音嘶哑、气急、颈部很快肿胀并有皮下气肿,约２ｈ后出现呼吸困难而急诊来院。检查见颈部前部极度肿胀,广泛皮下气肿,压痛明显,呼吸困难。间接喉镜下见喉粘膜裂伤、渗血、声门区肿胀。喉Ｃ…     

吸入速尿平喘的临床观察及机理

目的：观察速尿雾化及吸入对支气管哮喘患者平喘疗效,并对其机理进行探讨。方法：对４６例支气管哮喘病人以速尿４０ｍｇ＋α－糜蛋白酶２０００＋生理盐水５ｍｌ雾化吸入为第一组;另外４７例在以上方案基础上去速尿为第二组,结果：第一组显效３５例,显效率为７３．９１％,总有效率为９０％,第二组明效１５例,显效率为３１．９％,总有效率为５３．１９％,两组比较差异显著（Ｐ〈０．０１）,结论：速尿可能成为一种新的非激素类抗炎药,吸入速尿抗哮喘作用的研究,开辟了哮喘治疗的新途径。     

抗前列腺特异抗原单链抗体/人羧肽酶A融合基因的构建及表达

目的 构建抗前列腺特异抗原（PSA）单链抗体（scFv)/人羧肽酶A(hCPA)融合基因,为前列腺癌的抗全导向酶-前体药物疗法奠定基础。方法 在已克隆抗PSAscFv和hCPA基因的基础上,用加端PCR分别在scFv基因的3′端和hCPA基因的5′端加上部分连接肽（linker)基因序列,回收后混合。应用重叠延伸拼接法,将抗PASscFv基因和hCPA基因通过linker序列串联为scFv/hCPA融合基因;并将构建的融合基因克隆到融合表达载体pGEX-4T-1中进行表达。结果 序列测定结果表明,构建的抗PSAscFv/hCPA融合基因中scFv和hCPA序列均正确,scFv和hCPA间有18bp的linker序列,推导的氨基酸序列为GSGGSG,与设计的序列相符,融合基因经IPTG诱导表达重组蛋白并以SDS-PAGE分析,在Mr为94000左右出现一条新生蛋白带,表达量约占菌体总蛋白的34%。结论 成功构建并原核表达了抗PSAscFv/hCPA融合基因。