银杏叶提取物对三氯乙烯所致的角质形成细胞线粒体膜电位变化的影响

目的研究三氯乙烯(TCE)对角质形成细胞(KC)线粒体膜电位的影响以及银杏叶提取物(GBE)的保护作用,为预防三氯乙烯皮肤损害提供理论依据。方法体外培养的人角质形成细胞以不同浓度TCE处理8h,GBE保护实验则以不同浓度GBE预处理2h后再进行TCE染毒,采用罗丹明123(Rh123)和碘化丙啶(PI)双染色方法,通过流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化情况。结果空白对照组Rh123荧光强度为18.73±0.45,正常和早期凋亡细胞分别占(77.10±2.08)%和(12.33±1.39)%;2.0mmol/LTCE染毒组Rh123荧光强度下降到8.20±0.66(与空白对照相比,P<0.01),正常和早期凋亡细胞比例分别为(11.90±0.56)%和(65.33±1.45)%(与空白对照相比,均P<0.01)。10mg/L的GBE预处理对2.0mmol/LTCE所致的线粒体膜电位下降即显示有保护作用,Rh123荧光强度为13.80±0.92,正常细胞占(40.90±2.10)%,早期凋亡细胞占(32.10±1.25)%(与2.0mmol/LTCE染毒组相比差异有统计学意义,P<0.01)。随着GBE浓度的增大,保护作用渐强,100mg/L的GBE达到完全的保护作用,上述3项指标分别为18.57±0.57,(76.57±2.67)%和(11.63±1.07)%(与2.0mmol/LTCE染毒组相比,P<0.01,而与空白对照组相比差异均无统计学意义)。结论TCE可以剂量依赖性地诱导KC线粒体膜电位的下降,使细胞进入凋亡状态;GBE预处理能有效预防TCE所致的线粒体膜电位的下降,并可降低KC凋亡。研究结果提示GBE可能用作预防三氯乙烯皮肤损伤的有效保护剂。     

汉族人群人类血小板抗原-1系统a/b/x等位基因多态性调查

目的：调查HPA-1抗原系统a/b/x等位基因在汉族人群中的多态性分布。方法：利用聚合酶链反应-序列特异引物技术（PCR-SSP）技术对1000例中国无关健康汉族人群样本进行HPA-1抗原系统等位基因分型,随机抽取部分样本进行测序验证。结果：本次调查共检测到HPA-1a/a基因型988个,HPA-1a/b基因型12个,未检测到HPA-1x等位基因。结论：HPA-1抗原系统在中国汉族人群中以HPA-1a等位基因为主（99.4%）,HPA-1b分布频率较低（0.6%）。目前国内尚未发现HPA-1x等位基因,有必要进一步扩大样本对不同地区、不同民族进行多态性调查。     

软组织微创配合牵引下整脊对神经根型颈椎病的镇痛止麻效果

目的观察软组织微创配合牵引下整脊对神经根型颈椎病的镇痛止麻效果。方法选60例合格的神经根型颈椎病患者,随机分为软组织微创配合牵引下整脊治疗组及软组织微创配合单纯牵引对照组各30例。牵引下整脊及单纯牵引各治疗9次,软组织微创治疗3次。分析治疗前后及随访3个月后两组颈肩臂疼痛、颈部压痛及麻木症状体征积分的变化。结果两组治疗后及随访3个月后症状体征积分均有改善(P<0.05),治疗组的症状体征积分改善优于对照组(P<0.05)。结论软组织微创配合牵引下整脊在减轻神经根型颈椎病颈肩臂疼痛、颈部压痛及麻木症状方面疗效显著,操作安全。     

手法结合简易浮针治疗肩臂疼痛为主神经根型颈椎病的随机对照研究

目的观察龙氏手法结合简易浮针治疗肩臂疼痛为主神经根型颈椎病的临床疗效及复发率,探讨治疗机理.方法将80例合格受试者随机分为龙氏手法结合简易浮针治疗组40例和牵引对照组40例进行治疗.采用简化McGill疼痛量表及疗效标准评定疗效并观察半年复发率.结果治疗组:治愈25例,显效12例,有效3例,无效0例,愈显率92.5%.对照组:治愈18例,显效9例,有效6例,无效7例,愈显率67.5%.两组的愈显率比较:治疗组优于对照组(P<0.05);随访半年,治疗组复发率7.5%(3/40),对照组复发率27.3%(9/33),治疗组复发率明显低于对照组(P<0.01);两组治疗前McGill疼痛评分的比较,差异无显著性意义(P>0.05);治疗后同组McGill评分与治疗前比较有显著性差异(P<0.01),优于治疗前;治疗后2组的McGill评分之间差异有显著性意义(P<0.01),治疗组优于对照组.结论龙氏手法结合简易浮针治疗肩臂疼痛为主神经根型颈椎病疗效显著,操作简便,复发率低,值得推广.     

萎软紫菀化学成分的研究

目的 对萎软紫菀Aster flaccidus全草的化学成分进行分离研究.方法 采用正、反相硅胶柱进行分离纯化,用物理化学和光谱学方法鉴定化合物的结构.结果 从紫菀属植物萎软紫菀全草中分离鉴定出14个化合物,分别为2-oxo-isocostic acid(1)、单萜环烯醚苷(2)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(3)、1β,6α-二羟基桉烷-4(15)-烯(4)、6β-丙酸基-1,10-脱氢呋喃艾里莫芬型烷(5)、印乌头碱(6)、羽扇豆醇(7)、甘草素(8)、黄芹素(9)、苜蓿素(10)、松柏醛(11)、木栓酮(12)、芹菜素(13)、对羟基苯甲酸(14).结论 其中化合物2～7为该属植物中首次分离得到,化合物1～10、13为该植物中首次分离得到.     

三氯乙烯诱导人表皮角质形成细胞凋亡中依赖Caspase-9的Caspase-3激活

目的 探讨有机溶剂三氯乙烯(TCE)诱导正常人表皮角质形成细胞(NHEK)凋亡过程中可能的信号通路.方法 用0.125、0.25、015、1.0、2.0 mmol/L的TCE处理NHEK4 h,并培养4、8、12、24 h,分光光度法测上清中Caspase-9和Caspase-3活性,Annexin-V/PI双染后流式细胞仪(FCM)测细胞凋亡;Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK和Caspase-9抑制剂Z-LEHD-FMK预处理组,用100 μmol/L ZDEVD-FMK或Z-LEHD-FMK预处理NHEK 1 h,再用2.0mmol/L TCE染毒4 h后培养至12 h.结果不同浓度TCE处理NHEK 4 h后培养不同时间,可诱导Caspase-3和Caspase-9活性升高,培养12、24 h时,各TCE处理组Caspase-3和Caspase-9活性与溶剂对照比差异有统计学意义(P<0.05).不同浓度TCE处理NHEK 4 h后培养12 h.凋亡细胞(Annexin-V+/PI-)所占百分比随TCE剂量增加而升高,除0.125 mmol/L TCE组外,其它各处理组AnnexinV+/PI-细胞所占百分比与对照组比差异均有统计学意义(P<0.05).相关分析显示Annexin-V+/PI-细胞所占百分比与Caspase-3和Caspase-9活性都呈正相关(P<0.05).100 μmol/L Z-DEVD-FMK预处理明显抑制2.0 mmol/L TCE诱导的Caspase-3活性上升和Annexin-V+/PI-细胞所占百分比的增加(P<0.05),对Caspase-9活性影响不明显(P>0.05).100 μmol/L Z-LEHD-FMK预处理不仅抑制2.0mmol/L TCE诱导的Caspase-3活性上升和Annexin-V+/PI-细胞所占百分比的增加,还抑制Caspase-9活性上升(P<0.01).结论 TCE诱导NHEK凋亡中,内部凋亡途径中上游关键酶Caspase-9和下游效应分子Caspase-3均激活.且Caspase-3的激活依赖Casapase-9的活化.     

三氯乙烯诱导人角质形成细胞凋亡中Caspase-3活力的研究

目的 观察三氯乙烯(TCE)诱导离体培养的人角质形成细胞(KC)Caspase-3活力变化及细胞凋亡情况,探讨TCE诱导KC凋亡的可能信号通路.方法 以不同浓度(0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mmol/L)TCE对离体分离培养的KC分别染毒至4、8、12、24 h;Caspase-3抑制剂(Z-DEVD-FMK)预处理组,先用100 μmol/L Z-DEVD-FMK预处理细胞1 h,然后再用2.000 mmol/L TCE染毒12 h.用分光光度法检测细胞Caspase-3活力变化,借助Annexin-V/PI双染和流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 与空白对照相比,TCE染毒4 h,各TCE剂量组Caspase-3活力无明显变化(P>0.05);染毒8 h,1.000 mmol/LTCE组Caspase-3活力和2.000 mmol/LTCE组Caspase-3活力,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);TCE染毒12 h和24 h,各TCE剂量组Caspase-3活力明显升高,与对照组相比差异有显著性(P<0.05),且呈剂量-效应关系.各TCE剂量组,在TCE浓度达到0.250 mmol/L以后,细胞凋亡率与对照组相比差异有显著性(P<0.05),且明显呈剂量-效应关系.Z-DEVD-FMK预处理组,与2.000 mmol/L TCE组比较,Caspase-3活力和细胞凋亡率明显得到抑制(P<0.01),而与空白对照相比差异无显著性(P>0.01).结论 在TCE诱导离体培养的KC凋亡中,Caspase-3的活化可能发挥了重要的作用.     

三氯乙烯和四氯乙烯对体外培养人皮肤角质形成细胞脂质过氧化的影响

目的探讨有机溶剂三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)、四氯乙烯(perchloroethylene,PCE)对体外培养的皮肤角质形成细胞(keratinocyte,KC)的脂质过氧化的作用。方法利用中性红吸附(neutral red uptake,NRU)实验确定TCE和PCE对人KC的中性红半数吸收浓度(50%neutral red uptake,NR50),并根据此确定染毒浓度。分别使用2.0、1.0、0.5、0.25、0.125 mmol/L的TCE或0.8、0.4、0.2、0.1、0.05 mmol/L的PCE对体外培养的人KC染毒4 h,利用MDA、SOD和ROS试剂盒测定细胞中MDA、SOD和ROS水平。结果TCE、PCE对人KC的NR50分别为4.53 mmol/L和2.16 mmol/L。经不同浓度TCE、PCE作用4 h后,细胞内MDA水平和ROS水平随TCE或PCE浓度增加呈上升趋势,而SOD活性呈下降趋势,与溶剂对照组相比较差异有显著性,且存在浓度-反应关系。结论TCE、PCE对人KC有氧化损伤作用。     

小儿表皮葡萄球菌败血症临床特点及近十年药敏变迁

目的研究小儿表皮葡萄球菌败血症(SES)的临床特点及近十年药敏变迁。方法回顾性分析1995年1月至2004年12月经血培养证实的72例表皮葡萄球菌败血症患儿的住院临床资料,分前、后5年两个阶段对表皮葡萄球菌(SE)药敏结果进行对比分析。结果近几年小儿SES发生率有上升趋势,常见于1岁以内婴儿(占87.5%),尤其是新生儿(占68.06%);脐部及皮肤感染是引起发病的主要途径;前后5年间该菌对多种常用抗生素耐药率发生显著变化(P<0.05),但尚未发现对万古霉素耐药菌株。结论SES在小儿发病率有增高趋势,近五年对多种常用抗生素耐药率显著增高,对疑诊患儿应及早做血培养并根据药敏选用有效抗生素,对常用抗生素无效者可选用万古霉素。     

三氯乙烯对人角质形成细胞一氧化氮和一氧化氮合酶的影响

目的研究三氯乙烯(TCE)对体外培养的人角质形成细胞(KC)一氧化氮(NO)合成和一氧化氮合酶(NOS)表达及活力的影响,探讨TCE的皮肤细胞毒性机制。方法无血清培养的正常人KC与0.125、0.25、0.5、1.0、2.0mmol/L的TCE共培养4h,分别于染毒后12、24、48、72h测定培养液中NO含量和NOS活力,分析其时间—剂量—效应关系,并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测诱导型NOS(iNOS)mRNA的表达情况。结果低剂量组(0.125和0.25mmol/L)NO含量与iNOS活力在染毒后各时点与对照组相比均无差异;0.5mmol/L组NO含量与iNOS活力均在染毒后48h开始升高,分别为(32.19±4.75)μmol/L[对照组:(23.70±3.11)μmol/L,P<0.05]和(1.15±0.02)×103U/L[对照组:(0.77±0.06)×103U/L,P<0.05],随着染毒浓度的升高,0.5～2.0mmol/L组NO量与iNOS活力呈上升趋势,而且上升出现的时间提前,1.0和2.0mmol/L组分别于染毒后24和12h出现升高;NO释放的增加总是与iNOS活力升高一致,而结构型NOS(cNOS)活力在各剂量组的各时点均无变化;RT-PCR结果显示TCE可以诱导iNOSmRNA转录水平增高。结论TCE可以诱导人角质形成细胞NO合成增加,大量产生的NO与iNOS基因的上调有关,这一机制可能参与了TCE的皮肤细胞毒性。