AutoLumo A2000Plus检测新型冠状病毒抗体性能评价

目的 对安图磁微粒化学发光仪AutoLumo A2000Plus检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)抗体IgG和IgM的性能进行评价.方法 采用安图SARS-CoV-2抗体IgM和IgG试剂对AutoLumo A2000Plus的正确度、精密度、最低检出限、参考区间、抗干扰能力及携带污染率进行验证,并与博奥赛斯SARS-CoV-2抗体IgM和IgG试剂检测SARS-CoV-2抗体的结果进行比较.结果 该仪器的正确度和精密度好,检出限符合要求,参考区间设置合理,抗干扰能力较好,携带污染率验证结果可满足本实验室需求.其检测SARS-CoV-2抗体结果与博奥赛斯SARS-CoV-2抗体IgM和IgG试剂比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 Au-toLumo A2000Plus检测性能良好,适用于临床对SARS-CoV-2抗体IgG和IgM的检测.     

藏族和汉族健康人群血浆miRNA表达谱的差异

目的检测并比较藏族和汉族健康人群血浆miRNA表达谱。方法分别采集246例藏族健康人和128例汉族健康人血浆样本,用Taq Man低密度芯片技术对50例藏族和50例汉族组成的2组人混合血浆中的754种miRNA进行检测,随机选取存在miR-130a-3p和miR-629-5p表达差异的样本,用qRT-PCR法进行验证。结果低密度芯片结果显示,藏族和汉族健康人群血浆中miRNA表达谱的相关系数(r)为0.592。与汉族组相比,藏族组血浆中139种miRNA的表达水平发生明显改变,其中62种miRNA表达上调,77种miRNA表达下调。qRT-PCR进一步证实miR-130a-3p和miR-629-5p在藏族组血浆中的含量明显高于汉族组[(467±27.30)×10-5vs(236±9.69)×10-5和(14.67±0.94)×10-5vs(7.58±0.52)×10-5,P均0.01]。结论藏族人群血浆miRNA的表达谱与汉族人群存在明显差异,临床检测miRNA时应考虑民族因素的影响。     

男性不育症患者精浆miR-106b水平变化及意义

摘要：目的：检测男性不育症患者精浆全基因组微小核糖核酸(miRNAs)表达谱,筛选差异表达的miR-106b,探讨其作为男性不育症分子诊断指标的可行性。 方法：收集163例男性不育症患者及126例正常生育男性精浆,分别混合;用Solexa测序技术分别检测弱精症、非梗阻性无精症和正常生育男性的混合精浆中692种miRNAs的表达,用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）对表达异常的miR-106b在单个样本中逐一进行验证。 结果：Solexa测序结果显示,19种miRNAs在不育症患者精浆中的表达量与健康男性相比变化＞2倍,miR-106b在弱精症和无精症患者中分别上调了6.89倍和2.61倍。qRT-PCR结果表明,弱精症组miR-106b含量［中位数（四分位数）］为719.35(518.49,1 183.39) fmol/L,与正常生育组的291.35(148.83,421.56)fmol/L比较,明显升高（U=91.00, P<0.0l）;无精症患者miR-106b的含量则明显降低,为60.07(18.38,292.52)）fmol/L（U=195.00, P<0.0l）。ROC曲线分析显示,miR-106b诊断弱精症和无精症的曲线下面积(AUC^ROC)分别为0.844 (95% CI, 0.734~0.954)和0.720 (95% CI,0.575~0.864);鉴别弱精症和无精症的AUC^ROC为0.902 (95% CI,0.822~0.982)。 结论：男性不育症患者精浆miR-106b表达水平与正常生育男性存在明显差异,有望成为男性不育症诊断和鉴别诊断的辅助指标。     

miR-144/451基因簇调控网络的生物信息学分析

目的生物信息学方法是预测miRNA二级结构及miRNA靶基因的有用工具。miRNA、转录因子和靶基因之间的调控网络参与多种生理、病理活动的分子机制。文中用生物信息学方法预测mir-144/451基因簇的调控网络结构。方法运用多个在线数据库,研究miR-144/451基因簇的上游转录因子及下游靶基因间的多个反馈和前反馈环路,对参与miR-144/451基因簇调控环路的基因进行功能聚类分析,绘制miR-144/451基因簇的核心调控网络图。结果 miR-144/451基因簇与其上游转录因子GATA1有17个共调控的靶基因,与生物体蛋白磷酸化、性腺发育、上皮细胞分化、葡萄糖代谢等生化学过程密切相关,并参与胰岛素信号通路、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)信号通路、自然杀伤细胞介导的细胞毒作用、Toll样受体信号通路、ErbB信号通路及黄体酮调节卵细胞成熟等体内重要生理过程。结论对miR-144/451基因簇调控网络的生物信息学分析有助于理解其在细胞发育、细胞周期调控和肿瘤发生过程中的作用机制,为后续实验提供了理论依据。     

胸腹腔积液上清液中游离核酸检测方法的建立

胸腹腔积液是恶性肿瘤的常见体征之一.目前临床确诊恶件胸腹腔积液主要靠细胞学检测,但是细胞学诊断仅能确诊约50%～70%的恶性胸腹腔积液的性质和来源,联合活检能够提高其7%～13%的诊断水平[1-3].胸腹腔积液游离肿瘤标志虽然能够在一定程度上提高良恶性胸腹腔积液诊断准确率及敏感性[4-5],但是仍有待新的简便有效,且非侵入性的检测方法的建立.20世纪70年代,Leon等[6]发现肿瘤患者血清游离DNA浓度高于健康人,提示游离核酸有作为肿瘤诊断的价值.本研究中,我们采用荧光定量(FQ)-PCR建立了一种简单的胸腹腔积液游离核酸[包括DNA、mRNA及microRNA]检测方法,以寻找新的诊断与鉴别诊断良恶性胸腹腔积液的肿瘤指标.     

胰腺癌细胞与其基质成纤维细胞相互影响的研究

目的：观察胰腺癌细胞系BXPC-3、SW1990能否促进其基质中正常成纤维细胞( NFs)活化成癌相关成纤维细胞( CAFs)及其活化的可能机制,以及活化后的CAFs对BXPC-3、SW1990细胞迁移能力的影响。方法采用差异贴壁法分选出野生型小鼠C57胰腺组织中的NFs,后运用非接触式共培养方法将BXPC-3、SW1990与NFs共培养,共培养后采用免疫荧光方法检测共培养前后NFs中CAFs标志性蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞活化蛋白( FAP)的表达变化,以确定其是否活化,并且运用qRT-PCR法检测目前较公认的胰腺癌中升高的12种 miRNAs 在共培养前后的NFs中含量变化；采用 transwell 法观察活化前后的 NFs 对BXPC-3、SW1990迁移能力的影响。结果免疫荧光检测表明,与BXPC-3、SW1990共培养后, NFs中α-SMA、FAP表达均显著升高；同时,在所选取的12种miRNAs中,与BXPC-3、SW1990共培养后,NFs中miR-155含量均有明显升高。 BX-PC-3、SW1990在CAFs基质环境中迁移能力大大提高。结论胰腺癌细胞能够促进其周围NFs活化成CAFs,其活化可能与胰腺癌中某些特定的 miRNA分泌进入到 NFs中有关,活化后的CAFs又可以反过来促进胰腺癌细胞的迁移。     

系统性红斑狼疮患者血浆和外周血细胞人巨细胞病毒miR-UL22a-3p水平变化及价值

目的 探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)编码的hcmv-miR-UL22a-3p在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者血浆及外周血细胞中的水平变化及临床价值.方法 选取2019年10月至2020年1月于东部战区总医院确诊的SLE患者...     

金银花提取物对小鼠肝脏和人肝细胞PGC—1α表达及胰岛素抵抗的影响

目的检测金银花提取物对小鼠肝脏和L02细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体7（PPARy）共激活因子1α（PGC--1α）表达及对胰岛素抵抗（IR）的影响。方法分别将ob／ob小鼠、C57／B6J小鼠和L02细胞随机分为对照组和实验组,实验组给予金银花提取物,对照组给予生理盐水。给药后检测小鼠肝脏和L02细胞PGC-1α表达。结果与对照组相比,实验组ob／ob小鼠给予金银花提取物后肝脏PGC-1α mRNA和蛋白表达下调（P〈0．05或P〈0．01）;而实验组C57／B6J小鼠给药后肝脏PGC-1α mRNA表达与对照组比较无统计学差异。给药5d后实验组ob／ob小鼠FPG降低,但实验组与对照组组间胰岛素水平无统计学差异,实验组FPG／FIns比值显著降低。胰岛素耐量实验显示金银花提取物改善了ob／ob小鼠的IR。脂肪酸培养L02细胞,给予金银花提取物后PGC-1α mRNA表达下调（P〈0．05）,而正常培养I．02细胞PGC-1α mRNA表达无变化。结论金银花提取物可以下调PGC-1α在肝脏中的病理性高表达,降低血糖,改善IR。     

食管鳞状细胞癌患者血清全基因组microRNA测序和分析

目的通过测序、分析食管鳞状细胞癌(ESCC)患者血清全基因组微小核糖核酸(miRNA)表达谱,筛选出表达上调的miRNA,探讨其作为ESCC分子标志物的可能性。方法收集未经治疗的199例ESCC患者血清,同时以107例年龄、性别匹配的健康人血清作对照。用Solexa测序技术对血清miRNA进行测序和表达量测定,用实时荧光定量PCR技术对表达上调的miR-223验证,并与血清CEA含量比较。结果 Solexa测序结果显示,ESCC患者和健康人混合血清小分子RNA中miRNA含量所占比例分别是75.46%和81.44%,22种miRNA在患者血清中表达量是健康人对照的2倍以上;PCR分析证实,miR-223在患者血清中的浓度[M(P25,P75)]显著高于健康人对照[893.8(684.8,1 200.7)fmol/L vs 445.6(347.7,664.0)fmol/L,t=10.03,P<0.01];用于ESCC诊断的miR-223 ROC曲线下面积(AUCROC)为0.84(95%CI,0.79～0.89),明显大于CEA的0.55(95%CI,0.48～0.62),P<0.01;当cut off值为710.2 fmol/L时,miR-223诊断ESCC的敏感性和特异性分别为70%、80%;ESCC患者年龄、性别、病理类型、TNM分期、吸烟史、饮酒史与血清miR-223水平无明显相关性(P>0.05)。结论 ESCC患者血清miRNA表达谱与健康人存在差异,miR-223在患者血清中浓度显著升高,是ESCC潜在的分子标志物。     

低密度脂蛋白免疫复合物对小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇酯蓄积和一氧化氮释放的影响

目的 探讨低密度脂蛋白免疫复合物对小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇酯的蓄积和一氧化氮释放的影响。方法 密度梯度超速离心从新鲜人血浆分离天然低密度脂蛋白，与抗低密度脂蛋白抗血清IgG组分制备低密度脂蛋白免疫复合物，低密度脂蛋白免疫复合物与小鼠腹腔巨噬细胞孵育后采用酶荧光法检测细胞胆固醇酯含量，进行细胞形态学观察和组织化学分析．并用硝酸还原酶法测定细胞释放至培养基中的一氧化氮量。结果 低密度脂蛋白免疫复合物剂量依赖性地诱导巨噬细胞内胆固醇酯的大量堆积，其效应显著强于氧化型低密度脂蛋白（P〈0．01）。经低密度脂蛋白免疫复合物处理的巨噬细胞呈典型泡沫细胞状，与猩红强染色，而天然低密度脂蛋白、抗低密度脂蛋白IgG处理的巨噬细胞内未见胆固醇酯的蓄积。此外，低密度脂蛋白免疫复合物剂量依赖性地抑制巨噬细胞一氧化氮的分泌。结论 低密度脂蛋白免疫复合物不仅通过致小鼠腹腔巨噬细胞泡沫化，也通过损伤巨噬细胞分泌一氧化氮的功能参与致动脉粥样硬化作用。