c-FLIP在恶性血液病中的表达及其临床相关性研究

目的：探讨c-FLIP基因在血液肿瘤中的表达以及临床意义。方法以半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测22例血液肿瘤骨髓中的c-FLIP mRNA表达,Western-Blot蛋白质印迹(WB)方法检测其c-FLIP蛋白的表达。病例包括急性白血病(AL)12例(其中初治11例及反复复发1例)、完全缓解(CR)后AL 2例、慢性粒细胞性白血病(CML)2例、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)2例、多发性骨髓瘤(MM)2例和骨髓增生异常综合征-难治性贫血伴原始细胞增多2型(MDS-RAEB-2)2例。结果初治和复发AL,初治CML、CLL、MDS-RAEB-2、MM患者c-FLIP mRNA和蛋白均表达异常增高。初治AL c-FLIP mRNA及43 kD蛋白的表达显著高于慢性白血病(CL)(P<0.05)。MDS-RAEB-2、MM与ALc-FLIP mRNA的表达差异均无统计学差异(P>0.05),但MDS 55 KD、43 KD蛋白表达明显低于AL(P<0.05),而MM无明显差异。对照组mRNA及其蛋白均阴性表达,CR后AL mRNA阴性表达,但其蛋白均有表达,低表达于AL,尤其43 kD明显低于AL(P<0.05)。c-FLIP表达在初治AL患者与其年龄、性别、初诊白细胞数、LDH以及核型、免疫表型无关。AL患者c-FLIP mRNA及其蛋白表达与初治疗效无明显相关性(P>0.05)。结论血液肿瘤患者c-FLIP mRNA及其蛋白表达异常增高,能够反映出恶性血液病患者骨髓造血细胞的凋亡抑制情况,与恶性血液病的类型、疾病的状态以及病程中的临床疗效、预后等都密切相关。     

细胞因子及淋巴细胞亚群在弥漫大B细胞淋巴瘤患者中的表达及临床意义

目的:探讨细胞因子和淋巴细胞亚群在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者诊断、预后以及疗效评估中的作用，以及替雷利珠单抗对DLBCL患者免疫功能和细胞因子的影响。方法:选择本院23例初治DLBCL患者作为DLBCL组，同期34例巨幼细胞性贫血患者作为对照组，采用ELISA法检测患者外周血中细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ水平，采用流式细胞术检测淋巴细胞CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞水平、CD4⁺/CD8⁺比值。比较不同临床特征、不同疗效的DLBCL患者外周血中细胞因子及淋巴细胞的水平。结果:DLBCL组患者外周血中细胞因子IL-2、IL-6、IL-10水平均明显高于对照组(P<0.05);细胞因子水平与患者年龄、性别无明显相关性(P>0.05);IPI评分越高、高Ann Arbor分期、有B症状、高β₂-MG、高LDH及高CRP水平患者外周血中细胞因子IL-6及IL-10的水平...     

低频超声对阿霉素杀伤人白血病多药耐药细胞K562/A02作用的影响

背景与目的:有研究表明,超声可增加化疗药物对肿瘤细胞的敏感性.从而抑制细胞增殖.本研究中我们观测不同剂量的低频超声波联合阿霉素(adriamycin,A02)对人白血病耐药细胞株K562/A02的生物学影响,并探讨可能的机制.方法:将对数生长期的K562/A02细胞分为空白对照组、单纯阿霉素组、单纯超声组、阿霉素加超声组.24孔培养板上进行超声照射,台盼蓝拒染法、MTT法检测细胞活性,应用瑞姬氏染色法和流式细胞仪榆测细胞凋亡和药物浓度,免疫细胞化学检测细胞膜P-糖蛋白的表达变化.结果:频率20 kHz、声强0.25 W/cm2、辐射时间60 s的超声辐射联合7.5 ug/mL阿霉素可诱导细胞凋亡,当超声频率20 kHz,声强0.5 W/cm2时,对细胞有急性杀伤作用.与单纯阿霉素组相比较.超声辐射增加了细胞内阿霉素的药物浓度,促进细胞凋亡的发生;但超声辐射没有影响细胞膜P-糖蛋白变化.结论:频率20 kHz、声强0.25 W/cm2、辐射时间60 s的超声可以增强阿霉素对耐约细胞K562/A02的杀伤作用.     

骨髓异常增生综合征的治疗进展

本文将综述近年来提出的治疗骨髓异常综合征(MDS)的新策略。包括其生物学行为的治疗如影响血管形成和细胞因子的沙利度胺、人鼠嵌合单抗,抑制调亡诱导分化剂砷酸、丙戊酸,分离特异性生物活性肽,蛋白酶抑制因子,去甲基化治疗等都将在本文中加以阐述;化疗及移植方面也有了突破。     

siRNA沉默c-FLIP对K562/ADR耐药性的影响

目的：探讨c-FLIP siRNA干扰c-FLIP mRNA水平对阿霉素耐药细胞K562/ADR的耐药性的影响及作用机制。方法应用siRNA干扰的方法抑制K562及K562/ADR细胞c-FLIP的表达,通过荧光定量PCR的方法检测c-FLIP mRNA表达及对多药耐药基因MDR1 mRNA水平的影响。MTT法检测c-FLIP干扰与否对K562及K562/ADR细胞增殖的影响,Annexin V/7-ADD双染研究c-FLIP干扰与否对K562及K562/ADR细胞凋亡的影响。结果与阴性siRNA转染组相比较,c-FLIP siRNA转染下调K562细胞中c-FLIP的mRNA后,K562细胞增殖受到一定程度的抑制(P<0.05),但是并未显著诱导细胞凋亡,c-FLIP干扰与否K562细胞48 h增殖率分别为(69.14±1.82)%和(60.69±2.23)%,凋亡率分别为(1.7±0.3)%和(1.8±0.2)%。与阴性siRNA转染组相比较, c-FLIP siRNA转染抑制K562/ADR细胞中c-FLIP的mRNA后,K562/ADR细胞增殖显著被抑制(P<0.05),并显著诱导了细胞凋亡增加(P<0.05),c-FLIP干扰与否K562/ADR细胞48 h增殖率分别为(-6.07±0.71)%和(-37.45±3.53)%,凋亡率分别为(5.2±0.4)%和(9.2±0.4)%。并且c-FLIP siRNA下调c-FLIP mRNA水平后,K562/ADR细胞中的多药耐药基因MDR1的mRNA表达水平也被显著下调(P<0.05)。结论 c-FLIP siRNA下调K562/ADR细胞中c-FLIP的mRNA水平抑制了多药耐药基因MDR1的表达,从而抑制了K562/ADR细胞对阿霉素的耐药性。     

S100A6在急性髓细胞白血病中的表达及对疗效的影响

目的 了解S100A6 mRNA在人急性髓细胞白血病(AML)中的表达及对疗效、预后的影响。 方法 选取南京医科大学第二附属医院2009年11月—2014年6月收治的初治AML患者42例,另选取健康对照者12例,Real-time PCR检测AML患者治疗前后及对照组骨髓单个核细胞S100A6 mRNA表达,比较AML患者与对照组及AML不同类型间S100A6表达。比较M3、M4、M5患者中治疗有效组与治疗无效组治疗前后S100A6表达差异,复发组与无复发组S100A6表达差异,比较M3、M4、M5患者S100A6高表达组与低表达组间CR1(第一次完全缓解)、CR2(第二次完全缓解)的表达差异、2年总生存率(OS)表达差异及复发率表达差异。采用SPSS 19.0统计软件比较各组间差异。 结果 S100A6在M3、M4、M5患者中表达较对照组高(P<0.05),在M1、M2、M6、M7患者中表达较对照组差异无统计学意义(P>0.05)。M3、M4、M5患者治疗有效组治疗前后S100A6表达差异有统计学意义(P<0.05),治疗无效组差异无统计学意义(P>0.05)。M3、M4、M5患者2年内复发组治疗前S100A6表达较无复发组高(P<0.05)。S100A6高表达组与低表达组间CR1率、CR2率、2年OS率差异均无统计学意义(P>0.05)。M3、M4、M5患者S100A6高表达组较低表达组复发率明显提高(P<0.05)。 结论 S100A6在AML患者中的表达与AML分型、疗效及预后相关,可作为白血病疾病诊断分子标志之一。      

超声空化逆转K562／A02细胞对阿霉素的耐药性研究

本研究观察低频低功率超声联合阿霉素（adriamycin，A02）对白血病耐药细胞株K562／A02的影响，寻找合适的干预参数，探讨耐药细胞耐药逆转的可能机制。取对数生长期的白血病K562／A02细胞株，将研究对象分为空白组、单纯阿霉素组（A02）、单纯超声组（US）、阿霉素加超声组（A02＋US）共4组。细胞在24孔培养板上受低频低功率超声作用，用台盼蓝拒染法、MTT法检测细胞活性，应用瑞氏染色法和流式细胞术分别检测细胞凋亡和药物浓度，扫描电子显微镜观察细胞表面变化。结果显示，频率20kHz、声强0．25W／cm^2。、作用时间60秒的超声，可显著降低阿霉素的LC50;当声强0．50W／cm^2、作用时间大于30秒的超声，对细胞有急性杀伤作用。细胞经低频超声作用后细胞膜表面出现直径大约1-2μm的小孔，细胞内阿霉素的药物浓度增加，细胞凋亡增强。结论：适当参数的超声辐射通过超声空化导致肿瘤细胞产生声孔效应，使阿霉素对耐药细胞株的抑制作用增强，从而逆转耐药细胞株的耐药性.