GDF5过表达与ZIP8基因沉默双重功能慢病毒载体的构建及鉴定

【摘要】目的 构建过表达生长分化因子5（GDF5）与基因沉默锌离子转运蛋白（ZIP8）的双重功能慢病毒载体, 检测其在诱导多能干细胞中的表达效率并建立稳定细胞系, 为骨关节炎的细胞治疗提供种子细胞奠定相关研究基础。方法 以人的GDF5 cDNA为模板合成GDF5全长序列, 设计合成靶向小鼠ZIP8的shRNA 序列, 依次分别与双酶切的载体pRNAU6.2相连, 构建双重功能慢病毒载体。将重组质粒及阴性对照质粒分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞, 收集病毒上清后感染iPSCs 细胞, 实时定量PCR和免疫印迹分别检测GDF5蛋白和ZIP8 mRNA的过表达与沉默效果。经G418筛选获得稳定高效表达GDF5与基因沉默ZIP8的诱导多能干细胞（iPSCs）稳定细胞株。 结果 成功构建了双重功能慢病毒载体pRNAU6.2-CMV-hGDF5-mshZIP8-U6, 经感染和G418筛选获得稳定表达高效表达GDF5与基因沉默ZIP8的iPSCs稳定细胞株。 结论 成功构建的pRNAU6.2-hGDF5-mshZIP8-U6慢病毒载体, 可有效上调GDF5 与下调ZIP8的蛋白和mRNA的表达, 成功建立稳定高效表达GDF5与基因沉默ZIP8的iPSCs细胞株, 为骨关节炎的细胞治疗建立可靠的细胞平台。     

骨科植入金属材料表面电化学制备磷酸钙涂层方法及机理研究

探讨骨科植入金属材料表面化学制备磷酸钙涂层方法及机理。方法 首先在控制钙/磷摩尔比条件下采用滴定法建立磷酸钙的沉淀边界pH曲线,然后根据曲线确定4种涂层工作溶液浓度和pH。接着利用线性扫描伏安法确定4种溶液中在不同电极电位下所发生的界面阴极反应,并明确合适的工作电位。结果 滴定测得磷酸钙溶液的沉淀边界曲线显示,当溶液pH低于边界0.7~1.2时溶液可保持3天以上不发生沉淀且可以稳定形成涂层。电化学沉积电位的合理区间为-1.0~-1.2 V。将pH控制在沉淀边界以下(~1.0),选择-1.15 V为电化学沉积的工作电位,在4种工作溶液中均成功制备了磷酸八钙为主要相的涂层。通过电极反应动力学研究了电流-时间关系,发现涂层形成初期氢离子还原为涂层沉积提供了初始过饱和度,水分子还原为涂层生长提供持续的驱动力。结论 成功确定了电化学沉积磷酸钙的关键条件并阐述了涂层生成机理,且该涂层方法也已成功应用于钽金属,具有广泛适用性     

立体定向脑电图在药物难治性癫术前侵袭性评估中的应用价值和安全性

目的 探讨立体定向脑电图（SEEG）在药物难治性癫（DRE）术前侵袭性评估中的应用价值和安全性。方法 回顾性分析2016年8月至2018年11月在深圳市第二人民医院和深圳大学总医院开展SEEG置入的DRE患者的临床资料。根据患者无创的评估检查,提出可疑致灶位置和传播路径的假设,制定SEEG置入方案,最后根据SEEG和电刺激结果,制定最终手术切除或射频热凝方案,完成外科手术。结果 31例DRE患者共成功置入电极359根电极,平均11.58根/人,电极置入失败13根（3.62%）,无追加电极置入情况。术后出现迟发性颅内出血1例,未出现颅内感染、脑脊液漏等并发症。SEEG置入后,20例患者行致灶切除,8例患者行致网络射频热凝术,1例致灶位于功能区行迷走神经刺激术,2例患者未行手术治疗。31例患者随访时间为6~30个月,平均为（11.68±7.46）个月。20例行致灶切除术患者术后国际抗癫联盟（ILAE）分级Ⅰ级17例（85.00%,17/20）、Ⅱ级2例（10.00%,2/20）、Ⅲ级1例（5.00%,1/20）,8例行致网络射频热凝术患者术后ILAE Ⅰ级6例（75.00%,6/8）、Ⅲ级2例（25.00%,2/8）,2种不同治疗手段间的疗效差异无统计学意义（P=0.61）。13例磁共振成像（MRI）阴性患者中术后ILAE Ⅰ级10例（76.92%,10/13）、Ⅱ级2例（15.38%,2/13）、Ⅲ级1例（7.69%,1/13）,15例MRI阳性患者中术后ILAE Ⅰ级13例（86.67%,13/15）、Ⅲ级2例（13.33%,2/15）,两者间疗效差异无统计学意义（P=0.64）。结论 无论是MRI阳性还是MRI阴性的DRE病例,SEEG均可以提高致灶定位的精准性,SEEG指导下外科治疗DRE是安全、有效的。     

中医儿科学临床型研究生培养模式改革的探讨

随着经济快速增长,医疗事业突飞猛进,群众对医疗的需求日益增加.然从事儿童医疗工作的人员却少之又少.面对如此大的国家和社会的需要,作为旨在培养高级儿科专业人才的各高等院校的研究生培养单位,如何培养出合格的儿科临床医生,满足国家和社会需求是一个亟待解决的民生问题.文章根据学校中医儿科研究生培养现状,总结其教育特色,讨论了在临床专业学位中医儿科研究生培养过程中的一些看法及建议.     

低剂量氨酚羟考酮片与可待因治疗中度骨转移癌痛的随机对照研究

目的 观察低剂量氨酚羟考酮片在中度骨转移癌痛治疗中的疗效及安全性以及是否优于弱阿片药物可待因。方法 78例患者按2:1随机接受氨酚羟考酮片或可待因治疗。氨酚羟考酮片起始剂量为1片，口服，每12小时1次。根据疼痛爆发情况可每8小时1次，氨酚羟考酮片每日总量不超过3片。如出现或疑似消化道出血、肝肾功能异常者停用氨酚羟考酮片。可待因30 mg每12小时1次。根据疼痛爆发情况可每8小时1次。主要观察患者近期（72 h）和远期（2周）的疼痛控制情况及不良反应。疼痛程度用数字化评估量表法（NRS）评估。结果 72 h内单用氨酚羟考酮片NRS降至3分以下：中度疼痛组46/52（88.46%），明显高于可待因组16/26（61.54%）（P=0.006）。远期疗效氨酚羟考酮片有效率为63.46%（33/52），高于可待因组61.54%（16/26），但差异无统计学意义（P=0.868）。不良反应包括恶心、呕吐、嗜睡、便秘等发生率均较低，两组差异均无统计学意义。结论 强阿片类药物羟考酮可以用于中度疼痛的治疗，低剂量氨酚羟考酮片比弱阿片药物可待因更有效，即使长期应用，安全性也可以接受。     

多曲方丝弓技术矫治前牙开

目的探讨多曲方丝弓技术治疗前牙开的效果.方法结合用多曲方丝弓技术治疗的骨性及牙性前牙开病例8例的矫治体会,着重讨论了多曲方丝唇弓的制作技巧及在临床各型开病例中的灵活应用,初步探讨了其矫治开的机理,并介绍了典型病例的治疗过程.结果本文8例开患者治疗变化主要集中于牙及牙槽区,通过牙的远中竖直压低移动及前牙轻微伸长达到治疗开的目的.结论多曲方丝技术能有效的治疗骨性及牙性前牙开,但术后的稳定性有待一步观察.     

介入疗法治疗中晚期肝癌患者29例

我科自1994年10月～1998年3月对29例不能手术治疗的中、晚期肝癌患者进行了介入治疗,取得较好疗效。现将结果报道如下: 1 临床资料 29例患者中男性17例,女性12例。年龄20岁～80岁。中位年龄52岁,按全国肝癌防治研究协作会议肝癌分期标准,Ⅱ期16例,Ⅲ期13例。全组病例共进行介入治疗81次,其中接受1次治疗者9例(31.03％),接受2次及2次以上治疗者20例(68.97％)。随访6～32个月,失访4例。结果统计以随访到的25例患者资料为准。 2 方法 采用Seldinger插管方法,在电视监视下,将导管经股动脉     

十二指肠钩虫病28例诊治体会

自2005年1月至2007年7月,对我院门诊和住院的2 421 例消化系统疾病患者行电子胃镜检查,其中检出十二指肠钩虫病28例,并对其进行了治疗后追踪观察.现报告如下.     

腰麻-硬膜外联合麻醉在老年患者下肢手术中的应用

腰麻一硬膜外联合麻醉（CSEA）具有腰麻和硬膜外的双重优点，其既发挥了腰麻的作用迅速、阻滞完善的特点，又可以通过硬膜外持续给药延长麻醉时间，还可以施行术后镇痛。故CSEA越来越广泛地用于临床。现将我院43例老年患者行下肢手术应用CSEA的情况报道如下。