酵母双杂交技术筛选与RIG-Ⅰ相互作用蛋白

目的:筛选人脾细胞cDNA 文库中与维甲酸诱导Ⅰ型基因(RIG-Ⅰ)所编码蛋白具有相互作用的蛋白基因.方法:通过聚合酶链反应(PCR),以HEK293T细胞RNA为模板扩增RIG-Ⅰ基因的2CARD结构域部分,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒pGBKT7-RIG-Ⅰ2CARD,转化到酵母细胞AH109感受态中,得到阳性克隆AH109[RIG-Ⅰ2CARD].然后将人脾细胞cDNA文库转化进AH109[RIG-Ⅰ2CARD],在含有X-α-半乳糖(X-α-Ga1)四缺营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,提取质粒后转化DH5α大肠杆菌并经氨苄青霉素抗性筛选,挑取单克隆菌落抽提质粒,并进行测序,再进行生物信息学分析.结果:成功构建酵母诱饵蛋白表达质粒pGBKT7-RIG-Ⅰ2CARD,并能在酵母中表达.筛选出阳性菌落59个,经生物信息学分析,最后从脾细胞cDNA文库中筛选出12个与RIG-Ⅰ2CARD 有相互作用的蛋白基因.结论:成功克隆出RIG-Ⅰ2CARD基因,并从脾细胞cDNA文库中筛选出12种能与RIG-Ⅰ2CARD具有相互作用的蛋白基因.     

eICU合作研究数据库申请及数据提取流程

重症医学的循证医学研究必须要基于大量的临床诊疗数据。在危重症患者病情复杂多变以及ICU工作紧张繁重等特点的多重作用下,医务工作者想要收集大样本量的数据开展临床研究存在一定的困难。eICU合作研究数据库(eICU-CRD)是由飞利浦集团与麻省理工学院(MIT)计算生理学实验(LCP)合作创建的大型公共数据库,收集了大量高质量的临床信息,很好地解决了医务工作者缺少大数据进行临床研究的现状。本文通过介绍eICU合作研究数据库的使用申请及数据提取流程,帮助医务工作者更方便快捷的获取需要的数据。     

Toll样受体4基因多态性与HBV相关原发性肝癌易感性及预后的关系

目的探讨分析Toll样受体4(TLR4)基因多态性与HBV相关原发性肝癌易感性之间的关系以及对患者预后的影响。方法选取2015年6月-2017年7月北京中医药大学东直门医院合作的北京佑安医院收治的HBV相关肝癌患者106例作为肝癌组,同期北京中医药大学东直门医院收治的慢性乙型肝炎患者120例作为乙型肝炎组以及健康对照受试者100例作为对照组。收集各组受试者的血液标本,检测3组受试者TLR4 D299G、T399I以及A896G多态性位点基因型,并分析不同基因型肝癌患者术后复发情况。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验;计数资料两组比较采用χ2检验,多组间比较采用Kruskal-Wallis H秩和检验。采用非条件logistic回归模型及相对危险度近似估计值比值比(OR)估计各研究因素与HBV相关原发性肝癌发病风险的关系;生存分析绘制Kaplan-Meier曲线,生存曲线比较采用log-rank检验。结果 3组受试者TLR4 D299G位点以及TLR4 A896G位点基因型及等位基因分布差异均无统计学意义(χ2=1. 436、1. 949、1. 851、2. 599,P值均 0. 05);而3组受试者TLR4 T399I位点基因型和等位基因比较差异均具有统计学意义(χ2=11. 654、14. 995,P值均0. 001),其中肝癌组T等位基因频率明显高于乙型肝炎组及对照组(P 0. 05)。非条件logistic回归模型显示,TLR4 T399I CC基因型OR[95%可信区间(95%CI)]为1. 682(1. 109～2. 243),P=0. 027、TLR4 T399I TT基因型OR(95%CI)为2. 103(1. 347～2. 896),P 0. 001; TLR4 T399I T等位基因OR(95%CI)为1. 872(1. 192～2. 374),P=0. 002。TLR4 D299G位点以及TLR4 A896G位点不同基因型肝癌患者术后无复发生存情况无明显差异(χ2=0. 022、0. 471,P值均 0. 05)。TLR4 T399I位点CC基因型肝癌患者术后无复发生存情况明显优于CT+TT基因型(χ2=6. 781,P 0. 05)。结论 TLR4 T399I位点基因多态性与HBV相关原发性肝癌易感性密切相关,该位点T基因携带可能是肿瘤发生以及预后不良的重要因素。     

皮肤型奴卡菌病二例并文献分析

目的探讨皮肤型奴卡菌感染的临床表现、诊断、治疗及预后，提高对奴卡菌的认识。 方法选取2016年6月至2017年5月解放军总医院第四医学中心烧伤整形科收治的皮肤型奴卡菌病患者2例，患者入院后积极进行外科清创，清创术后行负压封闭引流治疗，细菌培养结果明确为奴卡菌后，使用敏感抗生素结合口服复方磺胺甲口恶唑治疗。分析患者的临床资料、治疗过程，并结合检索、查阅奴卡菌相关文献，对奴卡菌病进行系统性陈述。 结果2例患者最终均治愈。皮肤型奴卡菌病临床表现及影像学检查无特异性，易误诊。 结论皮肤型奴卡菌病少见，病原菌培养为奴卡菌是诊断本病的主要依据，伴有脓肿需行外科手术切开引流，并结合磺胺类药物治疗。     

立体定向放疗推量治疗鼻咽癌残留病变长期疗效观察

目的观察立体定向放疗（SRT）推量治疗鼻咽癌（NPC）根治性外照射后残存病变的长期疗效。方法66例首程根治性外照射剂量70 Gy后局部残存病变的NPC患者,随机分成SRT组和后装放疗组各33例,SRT组补量10-20 Gy,分2-3次给予,隔日1次;后装放疗组亦补量10-20 Gy,每次5 Gy,每周2次。结果SRT组1、3、5 a生存率分别为87.9%、63.6%和42.4%,后装放疗组分别为90.9%、54.5%和39.4%。两组长期疗效比较均无统计学差异。结论SRT提高了NPC残存病变患者的生存率,但与后装放疗组比较差异不明显。     

三维适形放射治疗联合替莫唑胺治疗高级别脑胶质瘤

目的观察三维适形放射治疗(three-dimensional conformal radiotherapy,3D-CRT)联合替莫唑胺(temozolomide,TMZ)治疗高级别脑胶质瘤(high-grade glioma,HGG)的临床疗效。方法 65例术后HGG随机分成TMZ联合3D-CRT组(治疗组)和单纯3D-CRT组(对照组)。治疗组35例(WHO分级Ⅲ级21例,Ⅳ级14例),对照组30例(Ⅲ级18例,Ⅳ级12例)。头颅适形放疗DT60 Gy/(30 f.42 d),治疗组同时每日服用TMZ 75 mg/m2,直到放疗结束。随后用TMZ辅助化疗6疗程,150～200 mg/(m2.d)×5天,每28天重复。对照组按照上述放疗方案进行。结果 治疗组:1、2、3年生存率分别为88.6%(31/35)、45.7%(16/35)、25.7%(9/35),中位生存期20月。对照组:1、2、3年生存率分别为43.3%(13/30)、16.7%(5/30)、6.7%(2/30),中位生存期12月。两组1、2、3年生存率及3年间总的生存率和中位生存期比较差异均有统计学意义(P<0.05)。两组血液学毒性和放射性脑损伤症状均可耐受。结论 与单纯3D-CRT比较,3D-CRT联合TMZ化疗提高了HGG的生存率。     

艾灸法治疗脾胃虚寒型胃脘痛60例临床观察

目的:观察艾灸法治疗脾胃虚寒型胃脘痛的临床疗效及其安全性。方法:选择120例辨证属脾胃虚寒型胃脘痛的患者,随机分为治疗组和对照组各60例。对照组采用常规西医治疗,治疗组在常规西医治疗基础上加用艾灸治疗,2组均以14d为1个疗程,比较2组的疗效。结果:治疗组治愈12例,显效33例,有效10例,无效5例,总有效率为91.67%;对照组治愈8例,显效11例,有效20例,无效21例,总有效率为65.00%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:艾灸具有温经散寒,通络止痛的作用,治疗脾胃虚寒型胃脘痛疗效确切,临床应用安全,值得推广。     

Fibroscan和ARFI对慢性乙型肝炎肝纤维化诊断价值比较

目的比较瞬时弹性成像技术(Fibroscan)与声脉冲辐射力(acoustic radiation force impulse imaging,ARFI)技术诊断慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)肝纤维化的临床价值。方法选取2017年4月至2018年4月于西安交通大学第一附属医院接受诊治的87例CHB患者为研究对象,分别进行Fibroscan和ARFI检查,同时以肝组织活检病理结果为金标准,采用ROC曲线评价两种方法的诊断价值。结果肝组织活检显示F0～F4期患者分别为11例(12.64%)、9例(10.34%)、26例(29.88%)、20例(22.99%)和21例(24.14%)。Spearman相关性分析表明Fibroscan法、ARFI法测定值与肝组织活检病理分期间存在相关性(r=0.735、0.512,P均0.001),且肝脏硬度(liver stiffness meaurment,LSM)值和剪切波速(virtual touch tissue quantification,VTQ)值也呈正相关关系(r=0.622,P 0.001)。F1期与F0期患者的LSM值和VTQ值差异均无统计学意义(P 0.05),F2、F3和F4期患者的LSM值和VTQ值均显著高于F0期(P 0.05)。F1、F2和F3期患者LSM值差异有统计学意义(F=8.635,P=0.012),而VTQ值差异无统计学意义(F=2.256,P=0.126)。ROC曲线分析表明,Fibroscan诊断显著肝纤维化(F2～F4期)的AUC为0.835(95%CI:0.765～0.912),敏感度和特异性分别为78.5%和87.8%,ARFI的AUC为0.702(95%CI:0.617～0.796),敏感度和特异性分别为70.6%和72.5%,差异有统计学意义(P 0.05)。Fibroscan诊断肝硬化(F4期)的AUC为0.887,ARFI的AUC为0.874,差异无统计学意义(z=1.673,P=0.143)。结论 Fibroscan和ARFI均无法较好地区分F0期与F1期患者,但对显著肝纤维化(F2～F4期)患者的鉴别诊断能力较好,且Fibroscan法的诊断价值优于ARFI法。     

大剂量甲氨蝶呤化疗的脑脊液药代动力学研究

目的 :研究大剂量甲氨蝶呤(methotrexate ,MTX)化疗的脑脊液药代动力学。方法 :采用反相高效液相色谱法对 2 7例肿瘤患者静脉滴入MTX( 1 0～ 3 0g/次 )后的脑脊液和血浆中MTX浓度进行连续测定。结果 :滴入MTX后 0、6、12、2 4和 3 6h的脑脊液浓度分别为 ( 1 65± 1 5 2 )×10 -6、( 4 3± 3 3 4)× 10 -7、( 1 46± 1 10 )×10 -7和 ( 3 19± 4 3 8)× 10 -8mol/L ,3 6h时已测不出MTX浓度 ,它的药 -时曲线与血浆相类似。直线回归方程 :Y∧ =0 0 5 797 0 0 10 82X(r =0 83 5 7)。结论 :脑脊液中MTX代谢呈二室模型 ,与血药浓度正相关     

人MAVS小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰MAVS细胞株的筛选

目的:构建人线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)的小干扰RNA真核表达质粒,并筛选出稳定干扰MAVS的细胞株.方法:根据文献报道的序列和载体的黏性末端,设计合成2条针对MAVS的DNA序列,退火后连接到载体pSUPER.retro.neo+gfp上,经测序分析正确后,质粒命名为psiMAVS.用脂质体转染质粒到MCF-7细胞中,经G418加压筛选稳定表达MAVS小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹检测细胞中MAVS的表达情况,将干扰效果好的细胞株命名为MCF-7/siMAVS,再用荧光素酶试验检测MCF-7/siMAVS细胞对外源MAVS或poly(dA-dT)诱导干扰素-β(IFN-β)转录的情况.结果:免疫印迹结果证实建立的稳定细胞株MCF-7/siMAVS能够有效干扰MAVS的表达,并在外源MAVS或poly(dA-dT)存在的情况下,抑制IFN-β的转录活性.结论:构建了表达MAVS小干扰RNA的质粒psiMAVS.筛选出稳定干扰MAVS表达的细胞株MCF-7/siMAVS,为深入研究MAVS在先天免疫中的作用提供了平台.