采用Amplicon文库构建法对地中海贫血的基因检测

目的 进一步完善现有地中海贫血的检测方法并且建立一种新的基于高通量测序的基因诊断方法,研究α/β地中海贫血基因的突变类型及分布情况.方法 采用Amplicon文库构建法,基于高通量测序平台,对219例地中海贫血患者全血样本进行上机测序与数据分析. 结果 在219例地中海贫血患者中,共计检测出14种突变类型,包括CD122、CD125、CD142 3种非缺失型α-地贫突变及IVS-Ⅱ-654、CD41-42、CD17等11种常见β-地贫突变型别.此外,通过生物信息学软件作图分析,筛查出--SEA、-α37、-α42 3种缺失型α-地贫. 结论 本研究进一步完善了基于高通量测序的基因诊断方法,建立了一套Amplicon文库构建法,能准确、有效地用于诊断α/β地中海贫血基因的缺失与突变类型,对人群筛查,优生优育的遗传咨询,防止该病重症患儿的出生等具有重要意义.     

PHⅡ-7增强阿霉素杀伤HL-60/ADR细胞的作用及机制研究

目的 研究PH Ⅱ-7增强阿霉素杀伤HL-60/ADR细胞的作用及其相关机制.方法 用MTT法测定阿霉素、PHⅡ-7单独及联合用药对阿霉素杀伤人急性髓系白血病耐药细胞株(HL-60/ADR)及其亲代细胞系(HL-60)作用的IC50值,提取不同浓度PH Ⅱ-7处理不同时间后HL-60和HL-60/ADR细胞的RNA,RT-PCR法分析PHⅡ-7对MRP基因表达水平的影响,通过激光共聚焦显微镜和流式细胞术观察PHⅡ-7处理前后HL-60和HL-60/ADR细胞内阿霉素浓度的改变.结果 PH Ⅱ-7本身具有抗肿瘤活性,对HL-60和HL-60/ADR的IC50值分别为(0.83±0.08)μmol/L,(1.74±0.56)μmol/L.PHⅡ-7还能协同提高阿霉素的细胞毒作用,HL-60组两药相互作用指数(CDI)值为0.7,HL-60/ADR组CDI值为0.43,其对耐药细胞的协同作用更为显著.随PHⅡ-7作用时间延长及剂量增加,细胞MRP基因表达水平逐渐下降,细胞内阿霉素浓度逐渐提高,可达敏感细胞的55%.结论 PHⅡ-7是有效的肿瘤细胞化疗药物,还具有下调MRP耐药基因表达的作用,从而有效逆转HL-60/ADR细胞的耐药现象,协同增强化疗药物对细胞的杀伤作用.     

中国人群常见的药物代谢相关基因多态位点及其检测方法

药物代谢个体差异的一个重要来源是遗传多态性即药物代谢相关基因的多态性.中国人群中药物代谢酶基因多态性的系统性分析已发现了很多潜在的功能性多态性位点,因此建立起针对中国人群的药物代谢酶基因多态性的检测技术,对常见的药物代谢相关基因多态位点的检测以及针对这些多态性位点建立个性化用药技术具有重要的意义.检测药物代谢基因多态性大多采用传统的聚合酶链式反应(PCR)和限制性片段长度多态性(RFLP)等方法,随着基因诊断的快速发展,高通量、快速准确的基因多态性检测方法开始发展起来,如基因芯片法、下一代测序技术等.本文对药物代谢酶基因多态性位点及其检测方法进行综述.     

足跟痛的跖侧神经阻滞疗法

目的观察跖侧神经阻滞治疗足跟痛的效果。方法采用确炎舒松A10mg+2%利多卡因注射液1ml+维生素B10.5mg+生理盐水2ml进行外侧跖神经第一分支阻滞。结果全组56足中有52足达优良级,4足经手术后治愈。结论该法是治疗足跟痛的有效方法之一。     

肠道透析在糖尿病肾病晚期的治疗及护理

糖尿病肾病是糖尿病晚期的严重并发症之一.胰岛素的广泛使用,糖尿病急性并发症死亡率大幅度下降,慢性并发症的发生率逐年上升,由于我国经济条件的限制,绝大部分尿毒症病人不能承担血液透析和腹膜透析的昂贵费用,放弃治疗.如何减少糖尿病肾病尿毒症期病人的医疗费用,提高生活质量成为临床迫切需要解决的问题.肠道透析是治疗肾功能不全的传统方法,包括口服透析和灌肠透析,效果虽不及血液透析和腹膜透析,但费用低廉、操作方便、并发症少.若能合理应用,做好透析期间的综合护理,将发挥其在糖尿病尿毒症期的最大治疗作用,改善病人症状,提高生存质量.     

南通市1080例老年干部牙列缺损及修复情况的调查

目的 了解南通市1080例老年干部牙列缺损及修复情况。方法 对1 080例老年干部进行问诊及口腔检查。结果1 080例老年干部中缺牙者939例,患病率86.94％。缺牙修复者509例,修复率54.21％,其中不良修复体149例,占29.27％。结论 牙列缺损患病率高,患者修复率低,且义齿合格率也低。因而要及时修复缺牙,修复体要适应老年人的生理、心理特点。     

阿糖胞苷对抗CD3/抗P-gp双功能抗体介导的T淋巴细胞免疫杀伤多药耐药白血病细胞的影响

目的 探讨阿糖胞苷对抗CD3/抗P-gP双功能抗体介导的T淋巴细胞免疫杀伤多药耐药白血病细胞的影响.方法 采用抗E-tag亲和层析柱分离纯化抗CD3/抗P-gp微型双功能抗体,用阿糖胞苷刺激K562和K562/A02细胞,并用流式细胞术检测K562和K562/A02细胞B7-1、B7-2分子的表达,用CytoTox 96非放射性细胞毒试剂盒检测阿精胞苷对抗CD3/抗P-gp双功能抗体介导的T淋巴细胞免疫杀伤K562/A02细胞的影响.结果 经阿糖胞苷刺激的K562和K562/A02细胞B7-1、B7-2分子的表达较未刺激的对照组明显升高.阿糖胞苷对抗CD3/抗P-gp双功能抗体介导的T淋巴细胞在效靶比0.39:1～25:1范围内,激活T细胞对耐药白血病细胞的杀伤率为(16.44±1.20)%～(60.49 ± 2.90)%,其杀伤率与效靶比和抗体浓度呈依赖关系(P＜0.05).结论 阿糖胞苷可明显提高抗CD3/抗P-gp双功能抗体介导的人T淋巴细胞对高表达P-gp抗原的耐药白血病细胞的杀伤效应.     

人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白的构建和表达

目的:构建和表达人4-1BBL胞外区/抗CD20双功能融合蛋白,并测定该融合蛋白的生物学活性.方法:采用PCR和ovelap PCR方法构建人4-1BBL胞外区/抗CD20双功能融合蛋白,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层析法纯化该产物,并用150 g/L SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化产物;采用FACS法鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性.结果:DNA序列测定结果表明:人4-1BBL胞外区/抗CD20双功能融合蛋白已构建成功,表达可溶性产物的产量达4 mg/L以上,具有与Raji细胞(CD20 )和A549(4-1BB )细胞结合的活性.结论:利用融合蛋白形式,首次成功地构建了人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白,并获得较高表达.表达产物具有与相应2个靶抗原结合的活性.     

高血压病患者OGTT1小时切点血糖在筛查糖代谢异常中的意义

目的探讨高血压病患者葡萄糖耐量试验（OGTT）1小时切点血糖（1hPG）筛查糖代谢异常的可能切点数值和意义。方法纳入2009年1月至2011年6月本院内分泌门诊就诊的高血压病患者112例，行75 g OGTT试验，采用受试者工作特征曲线（ROC曲线）确定糖代谢异常时OGTT 1hPG对应的最佳切点数值，以此切点的数值分两组人群比较两组间的体质量指数（BMI），空腹血糖（FPG），三酰甘油（TG），胆固醇（CHO），高、低密度脂蛋白胆固醇（HDL‐C、LDH‐C），血尿酸（UA），胰岛素抵抗指数（HOMA‐IR）、胰岛β细胞功能（HOMA‐β）水平。结果①研究中新诊断DM为36例（32．1％），糖调节受损（IGR）46例（41．1％），糖耐量正常（NGT）30例（26．8％）。②ROC曲线显示以OGTT 1hPG≥10．1 mmol／L作为诊断糖代谢异常的切点，敏感性89％，特异性90％。③以10．1为切点分组后，1hPG≥10．1 mmol／L组的UA、FPG、HOMA‐IR指数高于＜10．1 mmol／L组（ P ＜0．05），HOMA‐β指数低于＜10．1组（ P ＜0．05），两组BMI、空腹真胰岛素（FTI）、TG、CHO、LDL‐C、HDL‐C、比较差异无统计学意义。结论高血压病患者中，当OGTT 1hPG≥10．1 mmol／L ，已出现明显的糖代谢紊乱，1hPG可反应胰岛素抵抗程度及胰岛β细胞分泌功能。     

半夏天麻白术汤治疗脑外伤后综合症31例疗效观察

目的：观察半夏天麻白术汤治疗脑外伤后综合症的临床疗效。方法将62例脑外伤后综合症患者随机分为治疗组和对照组各31例，对照组给予吡拉西坦氯化钠注射液250ml静脉点滴，每天1次，头痛、眩晕者口服药物盐酸氟桂利嗪胶囊5~10mg，每天1~2次。治疗组在此基础上加服半夏天麻白术汤，每天1剂。2组均以15d为1个疗程，观察其临床疗效。结果治疗组总有效率93.5%明显高于对照组的74.2%，差异有统计学意义（ P ﹤0.05）。2组治疗后改善中医症状积分与治疗前比较，差异有统计学意义（ P﹤0.05）。且治疗组改善优于对照组，差异有统计学意义（ P﹤0.05）。结论半夏天麻白术汤治疗脑外伤后综合症患者可明显改善临床症状，提高了临床疗效。