SARS患者康复期淋巴细胞功能状态及T细胞受体Vβ24个亚家族表达的格局

背景:严重急性呼吸道综合征(severe acuterespi ratory syndrome,SARS)是由SARS相关冠状病毒感染引起的急性传染性疾病。但目前其康复期患者细胞免疫状态仍有待进一步研究。目的:观察SARS患者康复期淋巴细胞功能状态和T细胞受体(TCR)Vβ24个亚家族表达的格局。设计:前后对照观察。单位:广东省中医院中心实验室。对象:选择2003-01/04在广州中医药大学第二附属医院收治的76例治愈的SARS患者,全部病例均符合"非典型肺炎的临床诊断标准"、"非典型肺炎重症病例诊断标准、出院标准"及《中医临床诊疗术语证候部分》的诊断标准,男30例,女46例,平均(32±11)岁。选择10名同期健康到院体检者,女5名,男5名,平均(32±7)岁,所有受试对象对检测项目知情同意。方法:①TCRVβ24个亚家族的表达检测:取受试对象全血2mL,用EDTA-K2抗凝管抗凝。在流式细胞术检测专用管中,分别加入各种荧光素标记的mAb:抗CD3、抗CD4、抗CD8、抗CD25、抗CD28、抗HLA-DR、PC5-抗CD3mAb、TCRVβ1(PE FITC)、Vβ2(PE FITC)、Vβ3(FITC)、Vβ4(PE FITC)、Vβ5.1(PE FITC)、Vβ5.2(PE)、Vβ5.3(PE)、Vβ7.1(PE FITC)、Vβ7.2(FITC)、Vβ8(FITC)、Vβ9(PE)、Vβ11(PE)、Vβ12(FITC)、Vβ13.1(PE)、Vβ13.2(PE)、Vβ13.6(PE FITC)、Vβ14(FITC)、Vβ16(FITC)、Vβ17(PE FITC)、Vβ18(PE)、Vβ20(FITC)、Vβ21.3(FITC)、Vβ22(PE FITC)和Vβ23(PE)10μL,然后加入抗凝血50μL。混匀后,于室温避光孵育15min,再加入溶血素溶血、洗涤。最后将沉淀溶在300μLPBS中,用CoulterESP流式细胞仪进行检测。②T细胞亚群,T、B细胞的活化状态及Ts细胞和Tc细胞百分率的检测:每次收集5000个细胞,用仪器所带软件分别计算T细胞亚群(CD3、CD4和CD8)、活化的T、B细胞(CD3 /CD25 、CD3 /HLA-DR 、和CD3-/HLA-DR )、Ts细胞和Tc细胞(CD8 /CD28 、CD8 /CD28-)的百分率。主要观察指标:①T细胞亚群(CD3、CD4和CD8)的表达。②活化的T、B细胞(CD3 /CD25 、CD3 /HLA-DR 、和CD3-/HLA-DR )的表达。③Ts细胞和Tc细胞(CD8 /CD28 、CD8 /CD28-)的百分率。④TCRVβ24个亚家族的表达。结果:所有受试对象均进入TCRVβ24个亚家族检测结果分析,74例SARS患者及健康对照者10名均进入其余检测结果分析。①T细胞亚群的检测结果:CD4 细胞的百分率均数低于参考值[(33.33±6.64)%,(43±9)%,P<0.01],CD8 细胞的百分率高于参考值[(34.07±6.40)%,(30±9)%,P<0.01]。②活化的T、B细胞表达检测:表达HLA-DR的T、B细胞增加,而表达CD25的T细胞减少。有53例CD25 细胞的百分率低于正常参考值,有64例CD3 /CD25 T细胞的百分率低于正常参考值。只有CD3 /HLA-DR 和CD3-/HLA-DR 细胞的百分率高于正常参考值,其中表达CD3 /HLA-DR 的T细胞增加36例,表达CD3-/HLA-DR 的T细胞增加30例。③Ts细胞和Tc细胞的百分率:Ts细胞(CD8 /CD28-)的百分率较参考值增高[(28.75±7.31)%,(15.99±5.1)%,P<0.01];Tc细胞(CD8 /CD28 )的百分率则低于参考值[(5.99±3.60)%,(13.2±4.1)%,P<0.01]。其中有39例Tc细胞的百分率降低,有48例Ts细胞的百分率升高,CD4 与CD8 T细胞的比值均在正常参考值范围内。④TCRVβ24个亚家族表达:康复期SARS患者TCRVβ24个亚家族表达中,TCRVβ14的表达最高,TCRVβ5.3、和23表达次之,出现TCRVβ24个亚家族表达的不同。正常对照组中只有TCRVβ14表达最高,与SARS患者的结果相一致,但TCRVβ24个亚家族的分布格局不同。两组进行比较,Vβ1、Vβ5.2、Vβ5.3、Vβ7.2、Vβ9、Vβ11、Vβ13.1、Vβ13.2、Vβ17、Vβ18、Vβ22和Vβ23的表达差异显著,康复期SARS患者组均高于正常对照组(P<0.05-0.01)。结论:康复期SARS患者CD8 CD28-T细胞数的升高可导致CD8 T细胞数升高;而Ts细胞数的增加,因其分泌的抑制因子增多,从而造成CD3 和CD4 T细胞数降低。SARS患者康复期TCRVβ24个亚家族在T细胞上的表达不同。CD3 /HLA-DR 和CD3-/HLA-DR T细胞数的升高,可能与T、B细胞的活化较晚有关。     

人红细胞嘧啶5'-核苷酸酶Ⅰ分子量鉴定、氨基酸组成分析及其微量测序

为进一步探讨遗传性红细胞嘧啶5'-核苷酸酶Ⅰ(P5'N-Ⅰ)缺乏症的发病机制,在纯化人红细胞P5'N-Ⅰ的基础上,分别用质谱仪和氨基酸分析仪分析其分子量及氨基酸组成,同时将该酶经胰蛋白酶水解后进行微量测序,并行生物信息学分析.研究结果:质谱分析表明在蛋白电泳呈一条带的纯化的人红细胞P5'N-Ⅰ中发现3种分子量成倍数关系,且质谱图曲线非常吻合的蛋白,分子量分别为26 952.9,55 476及110 938.测出1个酶解肽片段N末端的10个氨基酸序列为:I-E-G-P-T-I-R-Q-I-E.在数据库中未发现同源性片段.氨基酸分析表明该酶至少由18种氨基酸,约253个氨基酸残基组成.结论:人红细胞P5'N-Ⅰ可能为一种多亚基组成的变构酶,生理状态下可能存在同源二聚体或四聚体.所测氨基酸序列可作为筛选目的基因的探针.所测氨基酸组成为确定其蛋白一级结构提供了重要依据.     

子宫内膜异位症的分子病因学研究现状

子宫内膜异位症(EMS)是子宫内膜腺体和基质种植于子宫以外的一种雌激素依赖性疾病,是引起该病患者盆腔疼痛和不孕的常见因素。EMS的发病机制迄今尚未完全阐明,是妇产科临床和基础研究的热点。目前研究认为,EMS发病的分子机制不纯粹是某一生物学特征异常,尚涉及腹膜侵袭、血管形成、细胞凋亡、细胞黏附及自噬等方面,并且某一信号通路异常,参与EMS发病过程的各个环节,而涉及整个通路调控网络异常。笔者拟从腹膜的侵袭、血管形成、细胞凋亡、细胞黏附、自噬等方面,对EMS的分子病因学最新研究进展进行阐述。     

腹膜外造口术围手术期的护理

目的 总结腹膜外造口术围手术期的护理方法.方法 选取2015年1~11月我科腹膜外造口患者48例,术前重视心理护理、造口定位和肠道准备;术后强调常见并发症的观察和护理及采用标准化ARC流程进行造口的更换和患者指导,对护理进行总结.结果 术后大部分患者恢复良好,术后早期会出现造口水肿,经过采取护理措施,未发生造口黏膜坏死;术后2个月回访未发生造口旁疝,2例因护理不当发生粪水性皮炎.结论 腹膜外造口可以减少造口并发症,尤其减少造口旁疝的发生;规范的造口护理及指导可促进患者早日康复,提高其生活质量.     

临床肠造口护理教学融入人文关怀理念的实践研究

目的：探讨人文关怀理念融入临床造口护理教学的效果。方法选取2014~2015年医院分配至我院胃肠外科的83名实习护生,采用多种教学方式对护生进行造口护理技能、人文关怀理念的培训,出科时采用关怀能力量表( CAI)、造口护理标准流程(造口护理SOP)评分标准以及患者对护生工作的满意度调查表进行测评,采用SPSS 16．0统计软件进行数据处理与分析,结果以百分比形式描述。结果72．3%的护生关怀能力高,21．7%的护生关怀能力中等,仅6%的护生关怀能力低;80．7%的护生操作技能90分以上,19．3%护生操作技能的80~90分之间,无人不及格;实习期间患者对护生工作满意度为96．6%。结论结合肠造口患者护理的特殊性,融入人文关怀理念进行教学,有利于护生人文关怀能力的培养和操作技能的提高。     

鞘磷脂酶在柯萨奇病毒B3感染心肌细胞中的作用

目的检测柯萨奇病毒B3(CVB3)感染心肌细胞后鞘磷脂酶活性的变化、鞘磷脂酶mRNA、CVB3RNA的表达、病毒滴度的变化及心肌细胞表型的变化。初步探讨鞘磷脂酶在CVB3感染的心肌细胞中的作用。方法 CVB3感染心肌细胞后不同时间点,用薄层色谱法(TLC)检测鞘磷脂酶活性;用Real time-PCR检测心肌细胞中鞘磷脂酶mRNA与CVB3RNA的表达;同时取细胞培养上清液检测CVB3滴度。用Annexin V-FITC,PI双染法观察心肌细胞表型变化。设正常心肌细胞对照组,每个时间点设三个复孔。结果病毒感染组与正常心肌细胞相比,酸性鞘磷脂酶在4h、12h时活性有升高,其mRNA表达在2h时有升高趋势(P0.05);中性Mg2+非依赖性鞘磷脂酶活性在4h时有明显升高,在12h时活性下降,而其mRNA表达在20h时升高(P0.05);中性Mg2+依赖性鞘磷脂酶活性于病毒感染后4h、12h无明显变化,其mRNA表达在各组间也无明显变化。心肌细胞内病毒RNA表达在4h时有升高趋势,8h后开始明显升高(P0.01)。CVB3病毒滴度在2h时明显升高(P0.05)。心肌细胞在病毒感染2h后早期凋亡及坏死开始增加,4h时凋亡坏死增加更明显,到24h时坏死心肌细胞明显增多。以上实验均重复3次。结论中性Mg2+非依赖性鞘磷脂酶与酸性鞘磷脂酶在CVB3侵入心肌细胞及病毒的扩散增殖过程中可能起重要作用;而中性Mg2+依赖性鞘磷脂酶在此过程中可能不起作用。     

祖师麻的化学成分及制剂学研究进展

目的综述祖师麻化学成分、提取工艺、制剂学研究进展。方法查阅近10多年国内外相关文献,进行分类分析总结。结果主要含香豆素类、黄酮类、萜类等成分,现有制剂包括祖师麻片、祖师麻膏、祖师麻关节止痛膏、祖师麻注射液和黄瑞香注射液等。结论化学成分研究较为深入,制剂学研究主要集中于提取工艺和成分分析,现有制剂品种涉及口服、外用及注射剂等。     

导师制在妇产科住院医师培养中的实践与探索

目的：探索医学专业毕业生继续职业发展,保障住院医师的培训质量。方法：回顾性分析导师制的5年实践。结果：导师制使住院医师的包括职业素养、临床决策水平、科研能力在内的综合能力得到了提升。结论：建立真正以提高住院医师综合素质为核心的导师制是保证住院医师培养质量提高的有效途径。     

猪苓及猪苓多糖协同卡介苗对膀胱癌大鼠模型腹腔巨噬细胞功能的影响

目的:观察猪苓及猪苓多糖(PPS)协同卡介苗(BCG)对BBN诱导的大鼠膀胱癌腹腔巨噬细胞表面分子的表达及体外NO释放的影响。方法:流式细胞术检测BBN诱导膀胱癌大鼠腹腔巨噬细胞的表面分子CD14、TLR4;共刺激分子CD86、CD40的表达。Griess试剂盒检测并分析猪苓及PPS协同BCG对腹腔巨噬细胞体外NO释放的影响。结果:PPS协同BCG组巨噬细胞表面CD86、CD40的表达与模型组比较均显著升高(P<0.05)。猪苓协同BCG组CD86、CD40的表达介于模型组与空白对照组之间,与两者均无显著性差异(P>0.05)。BCG组腹腔巨噬细胞TLR4/CD14的表达显著升高(P<0.05)。PPS协同BCG组TLR4/CD14的表达显著低于单独BCG组。PPS协同BCG组及猪苓协同BCG组与模型组比较NO释放的比值均显著降低(P<0.05)。结论:猪苓及PPS能协同BCG调节膀胱癌大鼠腹腔巨噬细胞表面分子的表达,降低腹腔巨噬细胞NO的释放,从而调节膀胱癌大鼠腹腔巨噬细胞的功能,降低NO过度释放对机体组织的损伤作用。     

猪苓及猪苓多糖对膀胱癌模型大鼠腹腔巨噬细胞吞噬和表面免疫相关分子表达的影响

目的:观察猪苓及猪苓多糖(PPS)对BBN加糖精诱导的膀胱癌大鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能、体外NO释放及共刺激分子和表面分子表达的影响。方法:实验分为空白对照组、模型组、PPS组和猪苓高中低剂量共6组。用流式细胞术检测膀胱癌大鼠腹腔巨噬细胞的荧光微球吞噬率、TLR4/CD14、CD86、CD40的表达。Griess试剂盒检测并分析猪苓及PPS对腹腔巨噬细胞体外NO释放的影响。结果:PPS组与模型组比较,PPS显著促进巨噬细胞吞噬率的增加、NO释放的比值均降低、巨噬细胞表面分子TLR4/CD14、CD86、CD40的表达均显著升高(P<0.05)。不同浓度猪苓组与模型组比较巨噬细胞吞噬率增加、NO释放的比值均降低(P<0.05),巨噬细胞表面分子CD86表达增加。低浓度猪苓组巨噬细胞CD40表达百分率显著升高(P<0.05);但TLR4/CD14的表达无明显变化;中、高剂量猪苓组TLR4/CD14的表达百分率与模型组比较则降低(P<0.05),CD40的表达无统计学差异。结论:PPS可显著促进膀胱癌大鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能和表面免疫相关分子的表达,但猪苓组对巨噬细胞功能的影响因剂量不同而表现出不同结果,可能与猪苓诸多成分同时作用或各成分作用的靶点不同有关。