黄芪对感染病毒大鼠心肌细胞L型钙通道的效应

目的:了解黄芪对感染柯萨奇病毒心肌细胞 L 型钙通道的影响,以探讨黄芪用于心肌炎治疗的作用机制。方法:以柯萨奇 B_3病毒感染急性分离的成年大鼠心肌细胞,利用膜片钳技术记录 L 型钙通道电流。结果:黄芪不影响正常心肌细胞 L 型钙通道电流的幅度,但可减缓 L 型钙通道电流的衰减。病毒感染增加心肌细胞 L 型钙通道电流的幅度,并改变其电压依赖性而使电流电压曲线向左下偏移。黄芪可抑制病毒感染细胞 L 型钙通道电流的增加。结论:黄芪通过抑制感染细胞经 L 型钙通道的跨膜钙内流和稳定 L 型钙通道的作用,可防止病毒感染可能导致的细胞内钙超载和异常电活动,从而对感染细胞起到保护作用     

维拉帕米对病毒感染心肌细胞Ca~（2＋）内流及病毒核糖核酸复制的作用（摘要）

维拉帕米对病毒感染心肌细胞Ｃａ~（２＋）内流及病毒核糖核酸复制的作用（摘要）上海医科大学中山医院郭棋，彭天庆，顾全保，赵剑星，杨英珍我们在证实了病毒感染早期细胞Ｃａ（２＋）内流增加的基础上，进一步观察维拉帕米（Ｖｅｒ）对柯萨奇Ｂ３病毒（ＣＶＢ３）感染?..     

鞘磷脂酶在柯萨奇病毒B3感染心肌细胞中的作用

目的检测柯萨奇病毒B3(CVB3)感染心肌细胞后鞘磷脂酶活性的变化、鞘磷脂酶mRNA、CVB3RNA的表达、病毒滴度的变化及心肌细胞表型的变化。初步探讨鞘磷脂酶在CVB3感染的心肌细胞中的作用。方法 CVB3感染心肌细胞后不同时间点,用薄层色谱法(TLC)检测鞘磷脂酶活性;用Real time-PCR检测心肌细胞中鞘磷脂酶mRNA与CVB3RNA的表达;同时取细胞培养上清液检测CVB3滴度。用Annexin V-FITC,PI双染法观察心肌细胞表型变化。设正常心肌细胞对照组,每个时间点设三个复孔。结果病毒感染组与正常心肌细胞相比,酸性鞘磷脂酶在4h、12h时活性有升高,其mRNA表达在2h时有升高趋势(P0.05);中性Mg2+非依赖性鞘磷脂酶活性在4h时有明显升高,在12h时活性下降,而其mRNA表达在20h时升高(P0.05);中性Mg2+依赖性鞘磷脂酶活性于病毒感染后4h、12h无明显变化,其mRNA表达在各组间也无明显变化。心肌细胞内病毒RNA表达在4h时有升高趋势,8h后开始明显升高(P0.01)。CVB3病毒滴度在2h时明显升高(P0.05)。心肌细胞在病毒感染2h后早期凋亡及坏死开始增加,4h时凋亡坏死增加更明显,到24h时坏死心肌细胞明显增多。以上实验均重复3次。结论中性Mg2+非依赖性鞘磷脂酶与酸性鞘磷脂酶在CVB3侵入心肌细胞及病毒的扩散增殖过程中可能起重要作用;而中性Mg2+依赖性鞘磷脂酶在此过程中可能不起作用。     

大鼠心肌细胞L型和T型钙通道的特性

目的研究大鼠心肌细胞Ｌ型和Ｔ型钙通道的特性。方法参照Ｈａｍｉｌ法记录全细胞跨膜钙电流。结果Ｔ型和Ｌ型钙通道可并存于大鼠心肌细胞膜上。Ｔ型钙通道激活电压在－７０～－６０ｍＶ，持续时间在２０～３０ｍｓ，电流幅度较小；Ｌ型钙通道激活电压在－３０～－２０ｍＶ，持续时间在１５０～２００ｍｓ，电流幅度较大。在细胞外钙离子浓度为０．５、２和１０ｍｍｏｌ／Ｌ时，Ｌ型钙通道的平均电流分别为（１．４３±０．３６）、（１．９６±０．３９）和（４．１３±０．７５）ｐＡ／ｐＦ；峰电流分别为（５．５０±１．５８）、（８．１７±２．１４）和（１３．６３±３．５９）ｐＡ／ｐＦ；电流幅度随时间变化可分为无明显衰减、缓慢衰减和快速衰减３种方式。与豚鼠心肌细胞相比，大鼠心肌细胞对钙通道特异性阻断剂相对不敏感。结论Ｌ型钙通道是大鼠心肌细胞膜上的主要电压依赖性钙通道，而Ｔ型钙通道在心室肌细胞上不起主要作用。     

特异性的VP1-siRNA对CVB3复制抑制作用的研究

目的 研究特异性的CVB3-VP1 siRNA对CVB3体外复制的抑制作用的量效关系与时效关系。方法 CVB3感染HeLa细胞，利用脂质体介导将CVB3-VP1siRNA转染HeLa细胞，用RT-PCR法检测CVB3-VP1 RNA水平，免疫荧光检测CVB3-VP1蛋白的表达水平。结果 60pmol／LCVB3-VP1 siRNA是抑制CVB3 RNA及VP1表达的最佳剂量；在转染后的48h，siRNA对CVB3-VP1的抑制作用达到最佳状态。结论 特异性的CVB3-VP1 siRNA对CVB3-VP1蛋白表达水平及CVB3-RNA复制水平呈明显的剂量依赖关系和时效关系，转染后48h呈现出完全抑制作用。     

Effects of taurine on L-type voltage-dependent Ca~(2 ) channel in rat cardiomyocytes infected with coxsackievirus B_3

目的：观察牛磺酸对正常和感染柯萨奇Ｂ３病毒大鼠心肌细胞Ｌ型钙通道的影响．方法：用膜片箝技术记录经Ｌ型钙通道的Ｃａ２＋电流．结果：正常心肌细胞Ｌ型钙通道的Ｃａ２＋电流密度为４１±０８ｐＡ／ｐＦ，柯萨奇Ｂ３病毒感染后Ｃａ２＋电流密度增加到４９±１４ｐＡ／ｐＦ．牛磺酸１６ｍｍｏｌ·Ｌ－１不仅使正常心肌细胞Ｌ型钙通道的Ｃａ２＋电流密度降为３５±０５ｐＡ／ｐＦ，也使感染柯萨奇Ｂ３病毒后心肌细胞的Ｃａ２＋电流密度降为３８±０８ｐＡ／ｐＦ．柯萨奇Ｂ３病毒感染使引起最大Ｃａ２＋电流的膜电压（Ｖｐ）由８±８ｍＶ减为５±３ｍＶ，牛磺酸可使降低的Ｖｐ恢复到８±４ｍＶ．结论：牛磺酸抑制柯萨奇Ｂ３病毒感染引起的Ｃａ２＋电流的增加，并使因感染而降低的引起最大Ｃａ２＋电流的膜电压正常化．牛磺酸对Ｌ型钙通道的影响是牛磺酸减轻病毒感染引起的细胞内Ｃａ２＋增加和异常电活动的机制之一．     

心脏病患者血清Coxsackie B组病毒中和抗体的调查

44例不明原因早搏患者的Coxsackie B组病毒(CBV)中和抗体效价明显高于献血员、风心病、冠心病及平均年龄基本配对的先心病组。效价≥1:320者亦明显高于其他4组,结果提示不明原因早搏与CBV感染可能有一定关系。     

扩张型心肌病的细胞骨架蛋白异常表达及与肠道病毒的关系

目的 :旨在明确扩张型心肌病 (DCM)心肌细胞骨架蛋白的异常表达情况及与肠道病毒 (EV)感染的关系。方法 :对 1 1例DCM患者应用PCR及RT PCR方法检测心肌EVRNA ,免疫荧光间接法检测心肌细胞骨架蛋白dystrophin及α /δ /γsarcoglycan、β dystroglycan。结果 :1 1例DCM中有dystrophin异常 2例 ,β dystroglycan、α sarcogly can、δ sarcoglycan、γ sarcoglycan异常各 1例 (其中 β dystroglycan与δ sarcoglycan同时受累 1例 )。细胞骨架蛋白dys trophin、β dystroglycan、sarcoglycans(α 、δ 、γ )在DCM病变心肌中表达明显降低和 (或)发生崩解 ,但在 2例正常心肌组织中均表达正常。DCM心肌内EVRNA的阳性率高达45 .5 % ( 5 /1 1 ) ,其中 2例dystrophin异常者均为EVRNA阳性。但β dystroglycan与α /δ /γ sarcoglycan异常者EVRNA为阴性。 结论 :DCM衰竭心肌中有多处细胞骨架蛋白的异常表达 ,并可能与EV感染有关     

苦瓜蛋白对柯萨奇3型病毒感染大鼠心肌细胞的保护作用

目的 在病毒性心肌炎心肌细胞模型上观察苦瓜蛋白对柯萨奇3型病毒(CVB3)感染SD大鼠心肌细胞的保护作用及其机制. 方法 体外原代培养SD大鼠心肌细胞,以CVB3感染培养大鼠心肌细胞,复制病毒性心肌炎心肌细胞模型,分别测定心肌细胞搏动百分比(PBC)、半数有效率(ED)、细胞病变(CPE)、心肌酶谱、半感染致死量(TCID50),分析其对心肌细胞的保护作用. 结果 苦瓜蛋白的ED值为0.045 mg/mL,80、40、20、10 μg/mL苦瓜蛋白可显著提高心肌细胞PBC、降低病毒的复制,80、40 μg/mL苦瓜蛋白可减少CPE,降低心肌酶水平. 结论 苦瓜蛋白对感染CVB3的心肌细胞有较强的保护作用.