幽门螺杆菌重组Bb-hpaA-vacA疫苗的构建

目的 构建幽门螺杆菌( Hp) 重组双歧杆菌( Bb) Bb-hpaA-vacA疫苗。方法 通过 PCR 分别扩增hpaA和vacA抗原编码基因, 然后采用gene SOEing 剪接hpaA和vacA, 得到hpaA-vacA融合基因;将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT, 构建重组质粒 pGEX-hpaA-vacA,电穿孔法将该质粒导入Bb, 构建幽门螺杆菌重组hpaA-vacA 疫苗。结果 PCR成功扩增出分子量约为1500 bp的 hpaA-vacA融合基因,双酶切证实hpaA-vacA融合基因成功插入pGEX-1λT中,并成功转化入双歧杆菌,构建rBb-hpaA-vacA疫苗。结论 成功构建螺杆菌rBb-hpaA-vacA疫苗,为该疫苗的进一步研究奠定了基础。     

HIV/AIDS合并NTM病的研究进展

近年来,非结核分枝杆菌(Non-tuberculosis mycobacteria,NTM)病在全球的患病率呈快速增长的趋势,且随着HIV/AIDS患者的出现,由非结核分枝杆菌引起的疾病的发生率升高,同时也使人们认识到非结核分枝杆菌病的重要性。HIV/AIDS患者免疫力低下,死亡率高,更容易被NTM感染,从而加速HIV/AIDS患者死亡。因此,尽快对非结核分枝杆菌进行诊断,不仅具有流行病学的意义,而且对降低HIV/AIDS患者的死亡率具有重要意义。本文就近几年关于HIV/AIDS合并NTM病的研究进展做一综述。     

鸟分枝杆菌MAV2928基因编码蛋白的生物信息学分析

目的运用生物信息学方法分析鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白的结构与功能。方法从NCBI数据库获取MAV2928基因编码蛋白氨基酸序列;使用protParam和PortScale工具分析该基因编码PPE25-MAV蛋白的理化性质以及亲疏水性;分别运用SignaIP 4.1 Server、TMHMM Server v.2.0和PSORT Prediction工具预测PPE25-MAV蛋白的信号肽、跨膜区、亚细胞定位;采用NetPhos 3.1 Servera预测磷酸化位点,采用NCBI-Conserved domains分析蛋白的保守域结构;采用SPOMA软件在线分析PPE25MAV蛋白二级结构,使用SWISS-MODEL建立三级结构模型。运用ABCpred软件和IEDB预测蛋白的B细胞抗原表位。结果MAV2928基因全长为1266 bp,编码蛋白PPE25-MAV含有421个氨基酸,为不稳定疏水蛋白,脂肪系数为72.66,无信号肽及跨膜区,定位于细胞质中。该蛋白含有52个磷酸位点,有1个保守域结构属于PPE超家族蛋白;二级结构以无规则卷曲为主,结构较松散。预测该蛋白含有7个B细胞优势抗原表位和24个Th细胞表位。结论PPE25-MAV蛋白含有多个磷酸化位点,参与细胞信号的转导,含有7个优势B细胞抗原表位,为该蛋白作为候选疫苗抗原提供了理论基础。     

果糖胺测定在隐性糖尿病中的诊断价值

目的：探讨果糖胺（Ｆｒｕｃｔｏｓａｍｉｎｅ,ＦＭＮ） 与隐性糖尿病的关系。方法：检测２０７ 例健康体检者,１１９ 例非胰岛素依赖性糖尿病（ＮＩＤＤＭ） ,３５ 例隐性糖尿病人的空腹血糖（ＦＢＧ） 和ＦＭＮ。结果：糖尿病组空腹血糖（ＦＢＧ） 及ＦＭＮ明显高于正常对照组（ Ｐ＜ ０．０１） ,而隐性糖尿病组ＦＢＧ与正常对照组相比差异无显著（ Ｐ＞ ０．０５） ,ＦＭＮ明显高于正常对照组（ Ｐ＜ ０．０１） 。隐性糖尿病患者糖耐量试验阳性,餐后２ 小时血糖增高,ＦＭＮ与空腹时无差异（ Ｐ＞ ０．０５） 。结论：ＦＭＮ是诊断隐性糖尿病的一项可靠指标。     

TLR4-NOD2协同信号传递增强树突状细胞活性的作用

目的探讨Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)-核苷酸结合寡聚化结构域样受体2(nucleotide-binding oligomerization domain 2,NOD2)协同信号(T4N2)传递在增强树突状细胞(dendritic cell,DC)活性中的作用。方法对数生长期DC随机分为空白对照1组(RPMI-1640培养基1mL)、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)1组(RPMI-1640培养基1mL+LPS 10μg)、胞壁酰二肽(muramyl dipeptide,MDP)1组(RPMI-1640培养基1mL+MDP 5ng)、LPS+MDP1组(RPMI-1640培养基1mL+LPS 10μg+MDP 5ng),培养24h,采用ELISA法检测4组细胞上清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平;体外设计并合成针对NOD2基因的慢病毒shRNA干扰载体,转染DC 48h后,将DC分为空白对照2组、LPS2组、MDP2组,LPS+MDP2组,采用ELISA法检测培养24h时细胞上清中IL-6水平。结果培养24h,IL-6水平在LPS1组[(221.00±5.00)ng/L]、MDP1组[(213.3±6.11)ng/L]、LPS+MDP1组[(469.00±3.60)ng/L]均高于空白对照1组[(125.66±4.50)ng/L](P0.05),且LPS+MDP1组高于LPS1组、MDP1组(P0.05);沉默NOD2基因后,LPS+MDP2组及MDP2组IL-6水平[(238.66±7.02)、(125.66±7.67)ng/L]低于LPS+MDP1组和MDP1组(P0.05);空白对照2组及LPS2组IL-6水平[(116.30±5.68)、(207.00±8.54)ng/L]与空白对照1组及LPS1组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 TLR4、NOD2间存在协同作用并可促进DC活化。     

医学细菌学实验课改革的尝试

为了在医学细菌实验课中培养学生实际操作能力和独立工作的能力,我们在我院98级临床医学及护理学五年制本科学生中进行了精心选择实验内容,将实验课相对独立;以病例讨论开始,开设连续性综合实验,增加学生动手机会,培养学生实际工作能力和配以录象及图片教学使教学规范化,内容直观化的细菌学实验课程的改革,结果显示。实验教学方式,方法及内容选择较好,得到了绝大部分学生的认可。     

幽门螺杆菌HpaA-CtxB融合蛋白的表达及其免疫原性研究

目的 :探讨幽门螺杆菌融合蛋白粘附素 霍乱毒素B亚单位 (HpaA CtxB ,HCTB)经口服免疫小鼠后 ,机体产生的免疫应答。方法 :用PCR方法扩增HpaA和CtxB两个目的基因片段 ,将它们分别克隆至pET 32a( )和pQE 30质粒上 ,然后同时插入pQE 30表达载体中 ,构建含双基因的的表达质粒pQE HCTB ,转化E .coliDH5α,经IPTG诱导表达融合蛋白HCTB ;West ernblot分析其免疫反应性。融合蛋白经镍离子柱纯化后 ,HCTB和HpaA分别给小鼠灌胃进行免疫 ,ELISPOT和ELISA分别检测小鼠胃粘膜、派伊尔小结 (Peyer′spatches ,PP)抗原特异性抗体分泌细胞 (ASC) ,和血清IgG、IgA、小肠粘液sIgA和粪便sIgA。结果 :经测序HCTB融合基因片段由 116 1bp组成 ,为编码 387个氨基酸残基的多肽。经SDS PAGE分析相对分子量 (Mr)约为4 0 0 0 0。可溶性表达占全菌的 2 5 %以上 ,经亲和层析后可获得纯度为 92 %以上的重组蛋白。Westernblot分析其能分别与HpaA抗血清和CT抗血清特异性反应。灌胃免疫小鼠后ELISPOT和ELISA检测结果 ,胃和PPsIgA ASC、IgG ASC数量明显增加 ,尤以sIgA ASC为甚 ,同时血清IgA、IgG ,粪sIgA ,肠粘液sIgA也明显高于HpaA组和对照组 (P <0 0 5和P <0 0 1)。结论 :融合蛋白HCTB经口服免疫可有效诱导粘膜免疫应答 ,产生高水平     

志贺菌的疫苗研究进展

志贺菌属是人类细菌性痢疾的病原菌,俗称痢疾杆菌,属于革兰氏阴性兼性细胞内致病菌,临床上可引起细菌性痢疾。由于经济发展水平的不平衡、卫生条件不能得到充分的改善、抗药菌株的不断出现,决定了当前迫切需要研制痢疾疫苗。现对第一代（全细胞死疫苗）、第二代（减毒活疫苗）和第三代（亚单位疫苗）痢疾杆菌疫苗的研究进展作一概述。     

志贺菌感染的多重PCR快速诊断技术的建立

目的 探讨多重PCR技术在志贺菌感染快速诊断中的应用.方法 用多重PCR法对临床分离的68株志贺菌毒力基因shet1A、shet1B、ial和ipaH进行扩增检测.结果 68株志贺菌均在423bp(ipaH)处出现条带,在147bp(shet1B)、309bp(shet1A)、320bp(ial)处均出现了至少一个条带,与常规鉴定法的符合率达100%.结论 成功建立了志贺菌感染的多重PCR快速诊断技术.     

肠球菌生物被膜形成的分子机制研究进展

肠球菌是医院感染的重要条件致病菌,随着对肠球菌致病机制研究的逐步深入,研究者们发现肠球菌与多种置入医疗器材如导尿管、静脉插管和人工瓣膜所引起的生物被膜相关感染有关.生物被膜不仅为细菌提供良好的避护所,而且机体防御系统及抗菌药物难以将其清除,因此对肠球菌生物被膜形成机制的深入研究,在感染的防治中具有重要的意义.此文对肠球...