UPLC-QTOF-MS fingerprinting combined with chemometrics to assess the solvent extraction efficiency,phytochemical variation,and antioxidant activities of Beta vulgaris L.

Accurate assays of plant antioxidants and other phytochemicals require efficient extraction conditions and enable rigorous assessments of crop varieties and production systems. This study assessed the extraction of phytochemicals and antioxidants from conventionally or organically grown red and golden beets (Beta vulgaris L.), using twenty solvent (S1–S20) mixtures containing water, methanol, and ethanol alone or with acids (ascorbic, formic, acetic). Red beetroot extracted with methanol with or without acid had the highest betanin content (2791.0 μg/g and 8222.3 μg/g of fresh weight [FW], respectively) and golden beetroot extracted with methanol/ascorbic acid/water had the highest vulgaxanthin I (193.7 μg/g and 15.0 μg/g of FW, respectively). The radical-scavenging activity and total phenolics in beetroot extracts reflected the different extraction efficiency of each solvent. UHPLC-QTOF-MS was used to identify twenty-seven phytochemicals, including 23 betalains, 2 amino acids, and 2 phenolic acids. Chemometric approaches discriminated the beet varieties and different extracts within one variety based on the composition and abundance of the key phytochemicals. The red beetroot extracted with aqueous ethanol with or without acid (S5, S7, S8, S9), and golden beetroot extracted with methanol-containing solvents (S15 for conventionally and S20 for organically) had the highest levels of phytochemicals, suggesting that these conditions efficiently extract key phytochemicals.     

粪便内中短链脂肪酸柱前衍生化UHPLC-QTOF-MS/MS分析方法研究

建立柱前衍生化超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间质谱(UHPLC-QTOF-MS/MS)定性、定量表征小鼠粪便内中短链脂肪酸的方法,并用于评价其在抗生素处置前后小鼠粪便样品中的变化。动物实验方案获得江苏省中医药研究院动物实验伦理委员会的批准。以3-硝基苯肼为衍生化试剂,对衍生化反应条件、色谱及质谱条件进行优化,建立了粪便中16个中短链脂肪酸的定性、定量方法。所有分析物在各自浓度范围内线性关系良好(R2>0.99),日内、日间精密度RSD均小于10%,重复性RSD小于6%,加样回收率介于80%~120%之间,样品36 h内稳定性RSD小于7%;联合抗生素处置后小鼠粪便内的中短链脂肪酸种类和含量均发生了明显改变。其中,甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、乳酸等含量明显降低,而庚酸和丁二酸的含量明显增加。该方法准确、可靠,可作为粪便内中短链脂肪酸的表征方法。     

基于UPLC-QTOF-MS/MS法的茅苍术与 北苍术化学成分分析

目的：建立超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（UPLC-QTOF-MS/MS）联用方法,对茅苍术与北苍术的75%甲醇提取物中的化学成分进行定性分析。方法：采用Agilent Infinity Lab Poroshell 120EC-C18（2.1 mm × 100 mm,2.7 μm）色谱柱分离,以0.1%甲酸溶液（A）-乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL·min-1,柱温25 ℃,进样体积1 μL;检测质谱采用四极杆-飞行时间串联质谱系统（电喷雾离子源ESI）,正、负离子模式下采集数据,全扫描的质量扫描范围m/z 50~1500。结果：根据UPLC-QTOF-MS/MS提供的各成分的液相色谱保留时间、精确分子质量和特征碎片离子信息,并结合对照品及相关文献数据比对,从茅苍术与北苍术中均鉴定出78个化学成分,包括16个萜类化合物、10个聚乙烯炔类化合物、25个有机酸类化合物、17个糖苷类化合物、10个其它类化合物。结论：该方法可以快速、准确地对苍术药材中的化学成分进行定性表征,可为苍术的物质基础研究和质量控制提供实验依据。     

UPLC-Q-TOF MS/MS对痛安注射液指纹图谱中化学成分的研究

目的：采用液相与四极杆飞行时间串联质谱（UPLC-QTOF-MS/MS）对指纹图谱中色谱峰进行研究,对痛安注射液中的生物碱类化学成分进行定性鉴别。方法：采用Agilent SB-C18 RRHD（3 mm×100 mm,1.8μm）色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸为流动相进行梯度洗脱,流速0.4 mL·min-1,柱温为25℃,进样量为2μL。检测质谱采用电喷雾离子源（ESI）的飞行时间质谱,正离子模式下采集数据,一级质谱质荷比扫描范围m/z 100～1500,二级质谱质荷比扫描范围m/z 30～500。结果：痛安注射液的指纹图谱色谱峰中共鉴别出12个成分。结论：本方法快速、准确地鉴定了痛安注射液的指纹图谱中的主要成分,为痛安注射液质量标准的完善提供依据。     

阿德福韦混膦酯衍生物体外代谢及稳定性研究

采用超高效液相-飞行时间质谱仪(UPLC-QTOF-MS/MS)和超高效液相-三重四极杆质谱仪(UPLC-MS/MS)考察阿德福韦混膦酯衍生物阿德福韦单L-硫代异亮氨酸乙酯、去氧胆酸丙酯(Q₃-I₂)的稳定性及体外代谢产物,将Q₃-I₂和对照药阿德福韦酯与人工胃液、人工肠液、大鼠空白血浆和大鼠肝微粒体进行体外共孵育,采用UPLC-MS/MS和UPLC-QTOF-MS分别测定各孵育体系中的化合物剩余质量浓度和肝微粒体体系中的代谢产物,并通过底物消除法计算半衰期和清除率。化合物Q₃-I₂在胃肠道中稳定,延长了血浆、肝微粒体半衰期,同时能降解出活性代谢产物。在体外肝微粒体孵育体系中通过UPLC-QTOF-MS正负离子模式共检测到8种代谢产物,主要包括水解、氧化、乙酰化、葡萄糖醛酸化反应。     

Urine Metabonomic Analysis of Interventions Effect of Soy Isoflavones on Rats Exposed to Di-(2-ethylhexyl) Phthalate

Objective Di-(2-ethylhexyl) phthalate(DEHP) is a ubiquitous environmental contaminant.As an endocrine disruptor,it seriously threatens human health and ecological environmental safety.This study examines the impact of intervention with soybean isoflavones(SIF) on DEHP-induced toxicity using a metabonomics approach.Methods Rats were randomly divided into control(H),SIF-treated(A,86 mg/kg body weight),DEHP-treated(B,68 mg/kg),and SIF plus DEHP-treated(D) groups.Rats were given SIF and DEHP daily through diet and gavage,respectively.After 30 d of treatment,rat urine was tested using UPLC/MS with multivariate analysis.Metabolic changes were also evaluated using biochemical assays.Results Metabolomics analyses revealed that p-cresol glucuronide,methyl hippuric acid,N1-methyl-2-pyridone-5-carboxamide,lysophosphatidycholine [18:2(9 Z,12 Z)] {lyso PC [18:2(9 Z,12 Z)]},lyso PC(16:0),xanthosine,undecanedioic acid,and N6-acetyl-l-lysine were present at significantly different levels in control and treatment groups.Conclusion SIF supplementation partially protects rats from DEHP-induced metabolic abnormalities by regulating fatty acid metabolism,antioxidant defense system,amino acid metabolism,and is also involved in the protection of mitochondria.     

基于UPLC-QTOF-MS结合多元统计的不同干燥方法白术中化学成分差异分析

目的 建立超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-QTOF-MS)结合多元统计分析技术的分析方法,比较不同干燥方法对白术中化学成分的影响。方法 采用UPLC-QTOF MS进行分析,对采集的图谱进行峰匹配、峰对齐、滤噪处理等进行特征峰提取,分别采用热图聚类分析、主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA) 对数据进行分析。结果 不同干燥白术样品在PCA轴上呈逐步变化的趋势,能有效的区分,与热图的Pearson聚类结果一致,分类结果较为理想;建立的PLS-DA模型结果较好,各样品中化学成分差异明显,根据一级质谱精确质荷比和二级质谱碎片信息,结合软件数据库搜索及相关文献进行成分鉴定,初步鉴定出34种化学成分,并筛选出白术内酯I、苍术醇、白术内酯Ⅱ、芹烷二烯酮、苯乙酸对羟基苯乙酯、白术内酯I(同分异构)、呋喃倍半萜、白术内酯Ⅳ、绿原酸、白术内酯Ⅲ这10种区分不同干燥方法的特征性成分,并呈现出不同的变化规律。结论 本研究成果为揭示不同干燥方法对白术代谢产物的影响规律及探讨白术药材的品质形成机制提供基础资料。     

基于UPLC-QTOF-MS和多元统计分析的赤芝道地性研究

目的 研究不同产地、不同栽培方式对赤芝中三萜类成分的影响,为赤芝的道地性研究提供依据。方法 采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱法（UPLC-QTOF-MS）对120批赤芝样品进行化学成分分析。将赤芝样品按照浙产/非浙产、浙产段木/非浙产段木、浙产段木/浙产野生、不同发育时期进行模式分类,应用正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）对赤芝样品进行多元统计分析,用变量重要性投影（VIP）值、t检验筛选出组间差异显著的指标性成分。结果 从供试样品中鉴定出13种响应高、分离度好的灵芝酸类成分。筛选发现,浙产赤芝中灵芝酸D、灵芝烯酸D显著高于非浙产赤芝,可作为浙产赤芝的标志性成分;浙产段木赤芝中灵芝酸D、灵芝酸B、灵芝酸C₁、灵芝酸G的含量显著高于非浙产段木赤芝;段木赤芝中灵芝酸A等6个成分均显著高于野生赤芝;随着赤芝子实体逐渐成熟（现蕾期→开伞期→成熟期→采摘期）,多数灵芝酸含量呈现下降趋势,但部分样品采摘期（喷孢后）灵芝酸含量较成熟期（喷孢前）高,值得进一步研究。结论 浙产与非浙产赤芝成分差异较明显,且浙产段木赤芝与非浙产段木赤芝成分也存在明显差异,可能与生态环境、种植方式有关。     

UPLC-QTOF-MS结合主成分分析法考察胡芦巴盐制前后的化学成分差异

目的 利用超高效液相-四极杆-飞行时间串联质谱( UPLC-QTOF-MS ) 结合多元统计分析筛选并鉴定胡芦巴和盐胡芦巴的差异性成分。方法 采用 C₁₈反相色谱柱0.5% 乙酸-乙腈梯度洗脱,在正离子模式下采集质谱数据,应用Simca-P等软件进行主成分分析 (PCA) 和偏最小二乘判别分析（PLS-DA）,筛选胡芦巴与盐胡芦巴的差异性成分。通过质谱提供的精确分子量、碎片离子并结合文献数据鉴定PLS-DA分析中VIP值＞1.5的差异性成分的结构。结果 利用准分子离子、二级质谱图、特征碎片离子及其他碎片离子等信息,并参考相关文献报道鉴定了胡芦巴与盐胡芦巴中的24个差异性成分,其中包括7个黄酮碳苷类化合物,15个甾体皂苷类化合物以及1个生物碱类化合物即胡芦巴碱和1个脂肪族化合物即亚麻酸乙酯。通过比较各化合物在胡芦巴和盐胡芦巴样品的质谱中的响应值,盐制后黄酮碳苷类成分响应升高,甾体皂苷中的呋甾烷醇型甾体皂苷响应降低,而螺甾烷醇型/异螺甾烷醇型甾体皂苷响应升高。结论 盐制促进了胡芦巴中黄酮碳苷类成分的溶出,并使胡芦巴中皂苷类成分发生了结构转化。     

基于代谢组学的六味地黄丸干预大鼠甲亢模型的作用研究

目的该文采用血清代谢组学探讨正常大鼠皮下注射L-左旋甲状腺素钠诱导甲亢模型的作用机制和六味地黄丸干预甲亢模型的作用研究。方法选用SD大鼠按35μg.(100 g)-1皮下注射L-左旋甲状腺素钠造模1周后,给予4.7 g.kg-1的六味地黄丸干预3周,同时以正常大鼠作为对照,采用UPLC-QTOF-MS技术对不同组别大鼠的血清进行了分析。结果甲亢大鼠的体内草酰乙酸、磷酸二羟基丙酮、乙基葡糖苷酸、甘油三酯、溶血磷脂、胆固醇等明显上调;而六味地黄丸干预后,这些物质的水平出现明显下调。结论推测甲亢大鼠机体内的三羧酸循环发生障碍,糖、脂质、氨基酸代谢均出现紊乱,给予六味地黄丸后紊乱得到一定的改善。同时,这种方法为全面建立一种基于代谢组学的手段来诊断甲亢的病因和评价六味地黄丸治疗作用,提供一定的参考。