柱前衍生化-HPLC法测定文冠果种仁油中脂肪酸含量

目的:建立文冠果种仁油中脂肪酸含量的HPLC 测定法.方法:以ω-溴苯乙酮为衍生化试剂,三乙醇胺为相转移催化剂,采用BDS C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),检测波长235nm,以甲醇∶乙腈∶水(58∶27∶15)为流动相等度洗脱,柱温30℃,流速1.0mL·min-1,一次性分离五种脂肪酸,建立文冠果种仁油中脂肪酸含量的测定方法.结果:亚麻酸的线性范围为9.54～63.6μg,相关系数为0.9990,加样回收率为102.2%、RSD 为2.78%(n=9).结论:本方法重现性好,测量准确,可作为文冠果种仁油中脂肪酸含量测定的定量方法,用于文冠果种仁油的质量控制.     

柱前衍生化HPLC法测定百多宁注射液中的脂肪酸含量

目的建立以HPLC法测定百多宁注射液中脂肪酸含量的方法。方法采用无水硫酸钠破乳方法分离百多宁注射液中的油相。以 2 ,4′ 二溴苯乙酮为衍生化试剂 ,18-冠 - 6醚为相转移催化剂 ,采用C8反相柱 ,以乙腈 -水 (V∶V =75∶2 5 )为流动相等度洗脱 ,正十七烷酸为内标 ,一次基线分离 4种脂肪酸。结果亚油酸在 4 6～ 30 7ng内、软脂酸在 2 7 2～ 181 0ng内、油酸在 14 4～96 0ng 内、硬脂酸在 9 7～ 6 5 1ng内质量与相对峰面积线性关系良好 ,相关系数分别为 0 9997、0 9999、0 9995、0 9996。平均回收率分别为 98 2 %、97 5 %、99 8%、10 2 3% ,RSD分别为2 6 %、3 0 %、1 2 %、2 4 %。结论方法重现性好、定量准确 ,可作为百多宁注射液中脂肪酸测定的定量方法     

柱前衍生化RP-HPLC荧光色谱法分离肌肽的光学异构体

目的 采用柱前衍生化反相高效液相荧光色谱法拆分肌肽的对映体.方法 采用邻苯二甲醛和N-乙酰-L-半胱氨酸为柱前手性衍生化试剂,反相液相色谱法分离肌肽的光学异构体.考察衍生化反应条件对肌肽衍生化反应、不同色谱条件下对肌肽光学异构体分离的影响.通过光学异构体分离过程中的热力学参数的计算,探讨光学异构体分离过程的驱动力.结果 邻苯二甲醛和N-乙酰-L-半胱氨酸的摩尔比为1∶2时,以无水乙醇与硼酸缓冲液(pH9.8)为溶剂溶解,作为衍生化试剂,于室温下避光反应5 min,肌肽转化成异吲哚产物;在柱温35℃时,肌肽光学异构体的衍生化产物分离因子(α)和分离度(R)分别为1.533、3.947.其光学异构体-衍生产物的拆分过程主要是一个焓驱动的过程.结论 所用方法简单快速、灵敏度高、重复性好,适用于肌肽的手性拆分.     

人血浆中痕量炔雌醇衍生化LC-MS/MS测定方法的建立及其药动学研究

目的：建立柱前衍生化测定人血浆中痕量炔雌醇的LC-MS/MS方法,并研究中国健康女性受试者空腹口服左炔诺孕酮炔雌醇片（每片含0.02 mg炔雌醇和0.1 mg左炔诺孕酮）后炔雌醇的药动学特征。方法：血浆样品经过环己烷-乙醚（7∶1）提取吹干后,残渣溶解于pH 10.5的碳酸氢钠溶液中,并用丹酰氯丙酮溶液在60℃反应6 min 后进行 LC-MS/MS 分析。以Hedera ODS-2（2.1 mm×150 mm,5μm）为分析柱,流动相为含0.1%甲酸的水溶液-甲醇（13∶87）,梯度洗脱。炔雌醇丹酰氯衍生物和内标米非司酮的检测离子分别为m/z 530.2→171.1和m/z 430.1→372.2,对中国健康女性受试者空腹口服左炔诺孕酮炔雌醇片后,血浆中炔雌醇的浓度进行测定,并计算主要药代动力学参数。结果与结论：炔雌醇的血药浓度在1.059~211.7 pg·mL-1范围内线性良好,中国健康女性受试者单次和连续21 d口服左炔诺孕酮炔雌醇片后炔雌醇的cmax分别为（58.1±25.1） pg·mL-1和（76.5±19.7） pg·mL-1,tmax分别为（1.8±0.6） h和（1.9±0.9） h,AUC分别为（611±223） pg·h·mL-1和（762±189） pg·h·mL-1,t1/2分别为（12.36±4.42） h和（15.44±3.81） h。以上炔雌醇的药动学特征为首次报道。     

柱前衍生化高效液相色谱法测定复方氨基酸制剂的应用研究

研究了以２，４－二硝基氯茉（ＤＮＣＢ）作生化度剂在ＰＨ９．１的硼砂缓冲液中沸水浴加热１ｈ，制得１７种ＤＮＰ－氨基酸，用于反相高效液相色谱（ＲＰ－ＨＰＬＣ）测定复方氨基酸的方法。采用Ｃ８柱，以腈－醋酸盐缓冲系统梯度洗脱，２２ｍｉｎ内１７种氨基酸的ＤＮＰ衍生物及衍生剂水解峰可较邹分离；衍生化产物稳定，３６０ｎｍ处紫外检测，最低检出限为０．１μｇ。本法简便，重现性好，结果较为满意。     

柱前衍生化HPLC法分析沙参多糖中单糖组成

目的建立北沙参多糖中单糖的组成和含量的检测方法。方法以三氟乙酸水解沙参多糖,水解产物加入衍生化试剂1-苯基-3-甲基-5-吡唑酮(PMP)生成衍生化产物,采用RP-HPLC法,色谱柱:C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:体积分数为19%的乙腈溶液-醋酸铵缓冲液(醋酸铵-冰醋酸,pH5.5,体积比为100∶1),等度洗脱,流速:1.0 mL.min-1,检测器:紫外检测器,检测波长:250 nm,柱温:35℃。结果沙参多糖由D-甘露糖、D-鼠李糖、半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、L-(+)-阿拉伯糖等8种单糖(有2种未鉴定出的单糖)组成。D-甘露糖、D-鼠李糖、半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、L-(+)-阿拉伯糖的线性分别为4~80μmol.L-1(r=0.999 0)、12~240μmol.L-1(r=0.999 0)、5.6~1.12×103μmol.L-1(r=0.999 4)、1.54×103~30.80×103μmol.L-1(r=0.999 0)、80.0~1.6×103μmol.L-1(r=0.999 0)、64.00~1.28×103μmo.lL-1(r=0.9992);平均加样回收率分别为94.0%、88.5%、93.9%、95.9%、89.2%、90.8%。含量分别为0.22%、0.61%、8.55%、72.88%、4.79%、2.71%。结论该方法可以准确的测定出北沙参多糖中含有的各种单糖和含量。     

柱前衍生化HPLC法测定肝脑清氨基酸注射液的含量

柱前衍生化ＨＰＬＣ法测定肝脑清氨基酸注射液的含量河南省药品检验所４５０００３仲平，修佳肝脑清氨基酸注射液属于氨基酸类药物［１］，处方中含有Ｌ－亮氨酸（Ｌｅｕ）、Ｌ－异亮氨酸（Ｉｌｅ）和Ｌ－缬氨酸（Ｖａｌ）３种支链氨基酸。目前常用氨基酸分析仪的方法测定...     

柱前衍生化反相高效液相色谱法测定硫酸新霉素的含量

目的建立测定硫酸新霉素含量的柱前衍生化反相高效液相色谱法。方法采用SHIMADZU VP-ODS(5μm,4.6 mm×150 mm)色谱柱,以甲醇-水(40∶60)(含0.2 mol/L醋酸和0.013 mol/L庚烷磺酸钠)为流动相,检测波长为380 nm。结果新霉素在10.00~65.97μg/mL范围内线性关系良好(r=0.998 9),方法精密度RSD=1.1%。结论此法简便、快速,可作为硫酸新霉素质量控制方法。     

柱前衍生化HPLC-UV测定牛膝中齐墩果酸的含量

目的建立牛膝中齐墩果酸的柱前衍生化高效液相色谱测定法。方法以对硝基苯甲酰氯为衍生化试剂,对齐墩果酸分子中的羟基进行苯甲酰化,以乙腈-0.2%磷酸水溶液（95∶5）为流动相,在254nm波长处检测。结果齐墩果酸衍生化产物线性回归方程为：Y=85197X＋22550（r=0.9998）,表明齐墩果酸衍生产物在2.0～6.0μg内线性关系良好。结论所建立的柱前衍生化HPLC-UV可用于牛膝中齐墩果酸的含量测定,齐墩果酸与对硝基苯甲酰氯反应,衍生物为对硝基苯甲酸齐墩果酸酯,紫外检测波长由210nm红移至254nm,与以往方法比较,大幅改善了测定效果,提高了检测灵敏度。该方法准确,灵敏度高,为牛膝药材的质量评价提供了参考依据。     

柱前衍生化HPLC测定大鼠血浆中的盐酸美金刚胺

目的 建立测定大鼠血浆中盐酸美金刚胺浓度的方法.方法 采用柱前衍生化HPLC-UV法,色谱柱为Luna C_(18)柱(150 mm ×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-水-三乙胺(70:30:0.5,磷酸调pH7),流速为1.0 mL·min-1,检测波长为225nm;以盐酸金刚烷胺为内标,采用液-液萃取法,经衍生化后进样测定.结果 大鼠血浆中的内源性成分对美金刚胺的测定无干扰;美金刚胺0.14～9.20μg·mL~(-1)与峰面积线性关系良好(r=0.9950),低、中、高浓度样品的平均提取同收率分别为83.46%、80.34%、82.77%,平均方法回收率分别为112.01%、99.96%、99.10%,日内RSD分别为10.24%、8.97%、6.94%,日间RSD分别为12.10%、8.77%、4.60%.结论 所建方法灵敏、准确,可为盐酸美金刚胺的体内研究提供参考.     

柱前衍生化液相色谱-质谱联用法测定大鼠血浆中5-羟色胺的浓度

目的:建立应用液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)测定大鼠血浆(包括富含血小板血浆)中5-羟色胺浓度的方法,并将其应用于感染后肠易激综合征模型大鼠体内5-HT的测定。方法:血浆样品在加入甲巯咪唑(内标)后用苯甲酰氯作为衍生试剂,以四硼酸钠为催化试剂,室温下进行柱前衍生。样品在甲醇沉淀蛋白后采用ESI电离源在正离子模式下检测,用Agilent Zorbax eclipse plus C18色谱柱,甲醇-水溶液为流动相洗脱,流速为1.0 ml·min^-1。结果:经衍生后5-HT在大鼠富含血小板血浆及血浆中其线性范围及定量限均符合测定要求,日内、日间精密度及基质效应均<15%;肠易激综合征大鼠血浆中游离5-HT相较正常组大鼠显著增高。结论:本方法快速、灵敏、专属性强且重现性好,可用于大鼠血浆中5-HT浓度的测定。     

高效液相色谱法测定人和小鼠粪便中短链脂肪酸

目的建立高效液相色谱测定人和小鼠粪便中短链脂肪酸的方法。方法样品进行衍生化处理,采用高效液相色谱法测定乙酸、丙酸、丁酸以及戊酸。YMC-Pack FA型色谱柱(250 mm×6.0 mm,5μm),流动相甲醇–水(60∶40,0.1%三氟乙酸调节p H值至4.5),检测波长400 nm,体积流量1.0 m L/min,柱温50℃,进样量20μL。结果乙酸、丙酸、丁酸、戊酸分别在0.300~6.005 mg/L(r=0.999 2)、0.370~7.408 mg/L(r=0.998 5)、0.441~8.811 mg/L(r=0.997 3)、0.511~10.210 mg/L(r=0.997 9)线性关系良好;平均加样回收率分别为93.27%、96.40%、95.67%、95.43%,RSD值分别为4.62%、5.42%、3.64%、3.92%。结论方法操作简单,精密度、稳定性、重复性良好,可用于测定人、小鼠粪便中短链脂肪酸。     

AQC柱前衍生高效液相色谱法测定胃乐宁片中游离氨基酸

目的:建立柱前衍生高效液相色谱法测定胃乐宁片中各种游离氨基酸的方法.方法:以α-氨基丁酸为内标,以6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)为柱前衍生化试荆,采用Kromasil C(18)(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,醋酸铵缓冲液(pH5.10)和57%乙腈水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为2...     

柱前衍生化RP-HPLC法测定肌肽的含量

目的建立简单、快速测定肌肽含量的方法。方法采用2,4-二硝基氯苯柱前衍生化RP-HPLC法。衍生化试剂:2,4-二硝基氯苯;色谱柱:DiamonsilTM C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.15 mol.L-1乙酸钠缓冲溶液(体积比1∶5);流速:1.0 mL.min-1;检测波长:360 nm。结果肌肽质量浓度在2.0~20.0 mg.L-1(r=0.999 4)内与其衍生化物峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为96.8%,RSD为0.8%(n=9)。结论2,4-二硝基氯苯柱前衍生化RP-HPLC法可用于测定肌肽含量。     

邻苯二甲醛-9-氯甲酸芴甲酯柱前衍生HPLC法测定血必净注射液中氨基酸

目的通过建立HPLC分析法测定血必净注射液中氨基酸,为提高中药注射液质量标准提供依据.方法通过OPA-FMOC柱前衍生化法,建立同时检测血必净注射液中18种常见氨基酸的液相色谱法.色谱柱为Agilent SB-C18柱(250mm×4.6 mm,5 μm);流动相A为0.02 mol/L醋酸钠溶液(含200μL/L三乙...     

柱前衍生-反相高效液相色谱法测定转移因子胶囊中游离氨基酸

目的用柱前衍生-反相高效液相色谱法测定转移因子胶囊中游离氨基酸的含量。方法采用二硝基氯苯(DNCB)为衍生试剂进行衍生,Waters Novapak C8(3.9 mm×150 mm,4μm)色谱柱分离,以乙腈-乙酸钠水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长360 nm,在65 min内,测定各氨基酸含量。结果回收率为97.5%~103.5%,RSD为0.7%~3.0%。结论DNCB柱前衍生-反相高效液相色谱法可测定转移因子胶囊中游离氨基酸的含量。     

DNFB柱前衍生化RP-HPLC法测定氨肽素的氨基酸含量

目的用二硝基氟苯 (DNFB)柱前衍生化RP HPLC法测定氨肽素中氨基酸的含量。方法采用二硝基氟苯为衍生试剂进行衍生 ,ODS(KromasilC18,4 6mm× 2 5 0mm ,5 μm)色谱柱分离 ,以乙腈 0 0 5mol·L-1乙酸钠水溶液为流动相 ,梯度洗脱 ,3 60nm检测 ,在 3 0min内 ,测定氨肽素的氨基酸组成与含量。结果线性范围 (总氨基酸 1 4种 )为 0 1 5～ 0 75 g·L-1;回收率为 94 8%～ 1 0 3 5 % ;RSD为0 2 6%～ 1 47% (n =5 )。结论DNFB柱前衍生化RP HPLC法可有效控制产品质量     

柱前衍生化HPLC/UV法测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量

目的建立柱前衍生化HPLC/UV法测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量。方法异氰酸苯酯为柱前衍生化试剂,流动相：甲醇-水（83∶17）;ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm,3.5μm）柱分离;检测波长242 nm;流速：1 mL.min-1;柱温：30℃;进样量：10μL。结果环维黄杨星D在2～400μg.mL-1与峰面积呈良好线性关系,回归方程为：Y=2 616X＋198.2（r=0.999 9）;环维黄杨星D平均回收率为102.6%,RSD为0.4%（n=6）;结论该法简单、准确度高、灵敏度好,为黄杨宁片质量控制提供了依据。     

柱前衍生高效液相色谱法测定胎盘多肽注射液中的氨基酸

目的建立柱前衍生-高效液相色谱法测定胎盘多肽注射液中游离氨基酸和水解后总氨基酸的方法。方法以α-氨基丁酸为内标,以6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)为柱前衍生化试剂,采用KromasilC18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,140 mmol/L醋酸铵缓冲液(pH 5.10)和57%乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为248 nm,同时测定胎盘多肽注射液中21种游离氨基酸和水解后氨基酸含量。结果该方法重现性好,精密度高,各氨基酸浓度在0.005～0.50 mmol/L范围内线性关系良好;各氨基酸检出限≤1.57 ng。结论建立的AQC柱前衍生-高效液相色谱法可用于检测胎盘多肽注射液中氨基酸的含量,测定的结果为胎盘多肽注射液的质量研究和评价提供了依据。     

LC-MS/MS法测定人粪便中匹诺塞林的浓度及在粪便排泄中的应用

目的建立LC-MS/MS测定人粪便中匹诺塞林浓度并将其应用于粪便排泄的方法。方法样品用乙腈提取处理,用LunaTMC8色谱柱,以乙腈-乙酸铵水为流动相,等度洗脱(65∶35),流速为0.25 mL.min-1,电喷雾电离源(ESI),用负离子模式检测,多反应离子监测(MRM)。结果匹诺塞林的线性范围为30～4000 ng.mL-1,定量下限为30 ng.mL-1,日间、日内准确度与精密度变异均<7%,回收率均>90%,不存在基质效应。48 h内粪便的累积排泄率为(1.9±1.4)%。结论本方法快速、灵敏、专属性强、重现性好,可用于人粪便中的匹诺塞林测定。